基因診斷與治療第6組(1)

1、膀胱癌組織中TERE1/UBIAD1表達及Ras-MAPK信號通路分析殷享亮、劉文彬、韓學超、許小兵、劉長濤膀胱癌介紹n據國際癌癥組織機構統(tǒng)計，膀胱腫瘤作為泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，是目前導致人類因腫瘤死亡的第四大原因。n在中國，膀胱癌是排列第十位的常見腫瘤。n膀胱癌具有多發(fā)性、復發(fā)性的特點。TERE1/UBIAD1簡介n移行上皮反應基因(Tansitional epithelial response gene，TERE1)是人類一類新的直接與前列腺癌、膀胱癌有關的基因。該基因編碼一個含338個氨基酸，分子量約為36.skDa的蛋白質，廣泛表達于人類各種正常組織的基因，特別是泌尿系統(tǒng)上皮如

2、前列腺、膀胱、腎臟等TERE1具有多個疏水結構域，因其編碼UbiA類異戊系轉移酶，又稱之為UBIAD1n研究表明在前列腺癌、腎癌及癌細胞系中，TERE1基因和蛋白表達水平顯著下降，而通過基因轉染在前列腺癌細胞中過表達TEREI，能顯著減少腫瘤的增殖和維持基因組的穩(wěn)定n推測TERE1/UBIAD1基因可能是一類新的抑癌基因目的n檢測分析臨床膀胱癌組織和正常膀胱組織TERE1/UBIAD1表達及Ras-MAPK信號通路的變化。方法n采用免疫組化檢測分析人正常膀胱組織及膀胱癌組織中TERE1和端粒逆轉錄酶(hTERT)的蛋白表達水平:用RT-PCR及 westemblotting檢測膀胱癌組織中TE

3、REI和hTERT的表達水平及Ras-MAPK信號通路關鍵分子的變化nhTERT作為端粒酶活化的限速酶，在正常組織的增生和腫瘤的發(fā)生中起著至關重要的作用。研究表明人類多種腫瘤組織中均可檢測到hTERT的活性表達，而在正常膀胱組織中卻未檢測到。膀胱癌及正常膀胱組織標本中TEREI與hTERT免疫組化結果結果-免疫組織化學染色分析 HE染色nNormal bladder Bladder carcinomaTERE1(正常膀胱組織) （膀胱癌組織）hTERT正常膀胱組織 膀胱癌組織膀胱癌及正常膀胱組織標本中膀胱癌及正常膀胱組織標本中TERE1與與 hTERTmRNA水平水平Lanel:200bpMa

4、rker:Lane2:正常膀胱TERE1(500bp)mRNA水平;Lane3:膀胱癌標本中TERE1mRNA水平;Lane4:正常膀胱組織hTERT(182bP)mRNA水平;Lane5:膀胱癌標本中hTETmRNA水平。下方膠圖:對應組織中內參 GAPDHmRNA水平。n膀胱癌組織中TERE1表達水平相對于正常膀胱組織明顯降低，nTEREI表達水平與癌組織的分級分期密切相關，隨著腫瘤惡性程度增加，癌組織TEREI表達下降越明顯。n膀胱癌組織中檢測到hTERT明顯表達，而正常膀胱組織未檢測到hTERT表達。膀胱癌及正常膀胱標本中TERE1與hTERT蛋白表達n相對正常組織，膀胱癌中TERE1

5、蛋白表達明顯下降，統(tǒng)計分析具有顯著性差異，P0.01，高惡性度膀胱組織中未檢測到TERE1蛋白表達。n正常膀胱組織沒有檢測到hTERT蛋白表達水平，而膀胱癌組織中hTERT明顯高表達。Ras-MAPK信號通路中關鍵分子在組織中蛋白表達水平n與正常膀胱組織相對比，膀胱癌組織中磷酸化ERK、磷酸化MEK(1/2)、磷酸化B-Raf(Ser455)及磷酸化C-Raf(Ser338)蛋白表達水平明顯增加，有顯著性差異(P0.05);n而膀胱癌組織與正常膀胱組織中總的ERK、MEK(1/2)、A一Raf、B一Raf、C一Raf及磷酸化A一Raf(Ser299)蛋白表達水平沒有明顯差異。n未檢測到膀胱癌組

6、織中磷酸化的C-Raf(Ser259)和磷酸化的C-Raf(Ser289/296)蛋白表達。討論n為探討TEREI與膀胱癌的關系，n我們的免疫組化實驗結果顯示:膀胱癌T2、T3一4期TEREI染色陽性率與Ta、TI期陽性率相比，具有顯著性差異。n根據組織學分級，G3一4期TEREI染色陽性率與G2期TEREI相比具有顯著性，與GI期陽性率相比差異具有極顯著性。討論n根據逆轉錄PCR和免疫印跡結果顯示：膀胱癌組織中TEREI核酸轉錄與蛋白翻譯水平與正常膀胱組織相比明顯下降。n提示TERE1與膀胱癌相關。隨著腫瘤惡性程度增加，癌組織TERE1表達下降越明顯，呈負相關。TERE1與膀胱癌的關系n我們采用免疫印跡分析了膀胱癌組織中Ras-MAPK信號通路中一系列關鍵分子的變化。發(fā)現(xiàn):n膀胱癌組織中磷酸化ERK、磷酸化MEK(1/2)、磷酸化B-Raf(Ser455)及磷酸化e-Raf(Ser338)蛋白表達水平明顯增加，有顯著性差(P0.05);TERE1與膀胱癌