08熒光原位雜技技術(shù)及其臨床應(yīng)用李宇中

1、熒光原位雜交技術(shù)及其熒光原位雜交技術(shù)及其臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用 熒光原位雜交（熒光原位雜交（fish）將分子帶進(jìn)細(xì)胞遺傳學(xué)的領(lǐng)域?qū)⒎肿訋нM(jìn)細(xì)胞遺傳學(xué)的領(lǐng)域 熒光原位雜交技術(shù)熒光原位雜交技術(shù) 90 年代以后年代以后, 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的提高隨著分子生物學(xué)技術(shù)的提高以及向各學(xué)科的滲透以及向各學(xué)科的滲透, 出現(xiàn)了一種新的運(yùn)用分出現(xiàn)了一種新的運(yùn)用分子手段分析染色體異常的方法子手段分析染色體異常的方法, 即即: 染色體熒染色體熒光原位雜交光原位雜交( fish) 技術(shù)技術(shù), 該技術(shù)不僅可用于中該技術(shù)不僅可用于中期分裂相期分裂相, 還可在間期細(xì)胞顯示雜交信號(hào)還可在間期細(xì)胞顯示雜交信號(hào), 尤其尤其適用于那些培養(yǎng)

2、難以成功的各種組織細(xì)胞。適用于那些培養(yǎng)難以成功的各種組織細(xì)胞。由細(xì)胞到由細(xì)胞到dna分子分子熒光原位雜交技術(shù)的基本概念1.脫氧核糖核酸脫氧核糖核酸(dna)分子分子2.脫氧核糖核酸脫氧核糖核酸(dna)探針探針3.脫氧核糖核酸脫氧核糖核酸(dna)變性變性4.脫氧核糖核酸脫氧核糖核酸(dna)雜交雜交熒光原位雜交原理 fish的基本原理是用已知的標(biāo)記單鏈核酸的基本原理是用已知的標(biāo)記單鏈核酸為探針，按照堿基互補(bǔ)的原則，與待檢材料中未為探針，按照堿基互補(bǔ)的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進(jìn)行特異性結(jié)合，形成可被檢測(cè)的知的單鏈核酸進(jìn)行特異性結(jié)合，形成可被檢測(cè)的雜交雙鏈核酸。雜交雙鏈核酸。熒光原位雜交

3、技術(shù)熒光原位雜交技術(shù) 熒光原位雜交技術(shù)（熒光原位雜交技術(shù)（簡(jiǎn)稱fish）是用細(xì)）是用細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的原理，通過(guò)熒光標(biāo)記胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的原理，通過(guò)熒光標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞內(nèi)的核酸序列雜交。借助熒的核酸探針與細(xì)胞內(nèi)的核酸序列雜交。借助熒光顯微鏡，在細(xì)胞和（或）組織中觀察并分析光顯微鏡，在細(xì)胞和（或）組織中觀察并分析細(xì)胞內(nèi)雜交于靶序列的多種彩色探針信號(hào)，以細(xì)胞內(nèi)雜交于靶序列的多種彩色探針信號(hào)，以獲得細(xì)胞內(nèi)多條染色體或多種基因狀態(tài)的信息。獲得細(xì)胞內(nèi)多條染色體或多種基因狀態(tài)的信息。熒光原位雜交示意圖熒光原位雜交示意圖常見(jiàn)的熒色物常見(jiàn)的熒色物熒色物熒色物激發(fā)（激發(fā)（nmnm）散發(fā)（散發(fā)（nm

4、nm）dapidapi達(dá)比達(dá)比350350470470fitcfitc異氰酸熒光素異氰酸熒光素490490525525texas redtexas red德克莎斯紅顏德克莎斯紅顏料料596596615615熒光顯微鏡系統(tǒng)熒光顯微鏡系統(tǒng)探針的標(biāo)記的種類及比較探針的標(biāo)記的種類及比較 1.探針標(biāo)記方法主要有兩類：探針標(biāo)記方法主要有兩類： （1）直接標(biāo)記法，就是熒光素通過(guò)一些方法直）直接標(biāo)記法，就是熒光素通過(guò)一些方法直接連接到核酸序列上。接連接到核酸序列上。 （2）間接標(biāo)記法，就是把地高辛或生物素等半）間接標(biāo)記法，就是把地高辛或生物素等半抗原連接到核酸序列抗原連接到核酸序列 ，然后在雜交過(guò)后的檢測(cè)，然

5、后在雜交過(guò)后的檢測(cè)階段，加入標(biāo)記有熒光素的相應(yīng)半抗原抗體參階段，加入標(biāo)記有熒光素的相應(yīng)半抗原抗體參與反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。與反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。 探針的標(biāo)記的種類及比較探針的標(biāo)記的種類及比較 2. 這兩種標(biāo)記方法相比較而言各有利弊。直接這兩種標(biāo)記方法相比較而言各有利弊。直接法方便、快捷且背景低，信號(hào)強(qiáng)度不及間接法強(qiáng)；法方便、快捷且背景低，信號(hào)強(qiáng)度不及間接法強(qiáng)；間接法具有信號(hào)放大系統(tǒng)，信號(hào)強(qiáng)檢測(cè)靈敏度高，間接法具有信號(hào)放大系統(tǒng)，信號(hào)強(qiáng)檢測(cè)靈敏度高，但是間接法雜交過(guò)后檢測(cè)步驟繁瑣，背景信號(hào)強(qiáng)。但是間接法雜交過(guò)后檢測(cè)步驟繁瑣，背景信號(hào)強(qiáng)。近年來(lái)熒光的亮度和抗淬滅性的不斷改進(jìn)和提高近年來(lái)熒光的亮度和抗淬滅性的不斷改

6、進(jìn)和提高, 直接標(biāo)記的熒光探針越來(lái)越成為首選直接標(biāo)記的熒光探針越來(lái)越成為首選, 并采用多并采用多種不同顏色的熒光種不同顏色的熒光, 方便在同一標(biāo)本上同時(shí)檢測(cè)方便在同一標(biāo)本上同時(shí)檢測(cè)多種異常多種異常. 其熒光強(qiáng)度和信號(hào)大小都易于在普通其熒光強(qiáng)度和信號(hào)大小都易于在普通熒光顯微鏡下觀察熒光顯微鏡下觀察, 操作過(guò)程中也不需要嚴(yán)格避操作過(guò)程中也不需要嚴(yán)格避光光, 鑒于直接標(biāo)記法已經(jīng)可以獲得較滿意的信號(hào)，鑒于直接標(biāo)記法已經(jīng)可以獲得較滿意的信號(hào)，目前臨床檢測(cè)用的探針多為直接標(biāo)記法標(biāo)記。目前臨床檢測(cè)用的探針多為直接標(biāo)記法標(biāo)記。臨床常用的探針臨床常用的探針 臨床使用的探針都是以臨床使用的探針都是以dna 為主。

7、為主。 常用探針主要有：常用探針主要有：（1）著絲粒探針。）著絲粒探針。cep:chromosome enumeration dna probes（2）位點(diǎn)特異型探針。）位點(diǎn)特異型探針。lsi :locus specific identifier（3）染色體涂染探針。）染色體涂染探針。wcp: whole chromosome paints著絲粒探針著絲粒探針 a. 高度重復(fù)序列高度重復(fù)序列dna ,重復(fù)數(shù)百次至數(shù)千次，重復(fù)數(shù)百次至數(shù)千次，其靶序列通常是在染色體的其靶序列通常是在染色體的p11-q11區(qū)域及異染區(qū)域及異染色質(zhì)區(qū)域。色質(zhì)區(qū)域。b. 特點(diǎn)：信號(hào)強(qiáng)特點(diǎn)：信號(hào)強(qiáng) c. 應(yīng)用應(yīng)用 (a)

8、標(biāo)記染色體識(shí)別。標(biāo)記染色體識(shí)別。 (b)染色體數(shù)目異常檢測(cè)。染色體數(shù)目異常檢測(cè)。 (c)間期細(xì)胞遺傳學(xué)研究和臨床診斷。間期細(xì)胞遺傳學(xué)研究和臨床診斷。著絲粒探針著絲粒探針染色體的著絲粒染色體的著絲粒異染色質(zhì)域異染色質(zhì)域位點(diǎn)特異型探針位點(diǎn)特異型探針 a . 標(biāo)記了熒光信號(hào)的標(biāo)記了熒光信號(hào)的dna片段代表了某一個(gè)或幾個(gè)片段代表了某一個(gè)或幾個(gè)基因位點(diǎn)的全部序列。主要用以染色體基因位點(diǎn)的全部序列。主要用以染色體dna 克隆克隆序列的定位和靶序列的定位和靶dna 序列拷貝數(shù)及結(jié)構(gòu)變化的檢序列拷貝數(shù)及結(jié)構(gòu)變化的檢測(cè)。測(cè)。 b. 特點(diǎn)：信號(hào)較小。特點(diǎn)：信號(hào)較小。 c. 應(yīng)用應(yīng)用: （a）定位）定位dna片段。

9、片段。 （b）確定染色體微小缺失與重復(fù)。）確定染色體微小缺失與重復(fù)。 （c）間期細(xì)胞染色體數(shù)目異常診斷。）間期細(xì)胞染色體數(shù)目異常診斷。 16號(hào)和22號(hào)染色體探針信號(hào)位點(diǎn)特異型探針位點(diǎn)特異型探針染色體涂染探針染色體涂染探針a. 涂染探針是針對(duì)某一整條染色體設(shè)計(jì)探針，涂涂染探針是針對(duì)某一整條染色體設(shè)計(jì)探針，涂染探針主要用于常規(guī)顯帶技術(shù)無(wú)法確定的染色體染探針主要用于常規(guī)顯帶技術(shù)無(wú)法確定的染色體重排和標(biāo)記染色體的確定。能對(duì)整條染色體進(jìn)行重排和標(biāo)記染色體的確定。能對(duì)整條染色體進(jìn)行熒光標(biāo)記熒光標(biāo)記b. 特點(diǎn)：結(jié)果容易判讀。然而，整條染色體涂染特點(diǎn)：結(jié)果容易判讀。然而，整條染色體涂染 探針不能分辨同一染色體

10、臂間易位及染色體倒探針不能分辨同一染色體臂間易位及染色體倒位。位。c. 應(yīng)用：應(yīng)用： （1）染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常分析。）染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常分析。 （2）白血病及其它腫瘤的染色體診斷）白血病及其它腫瘤的染色體診斷 和研究。和研究。 染色體涂染探針：染色體涂染探針：染色體結(jié)構(gòu)異常分析染色體結(jié)構(gòu)異常分析fish技術(shù)包括下列幾個(gè)步驟技術(shù)包括下列幾個(gè)步驟1）備制玻片）備制玻片2）標(biāo)本變性）標(biāo)本變性3）探針變性）探針變性4）雜交）雜交5）dapi復(fù)染復(fù)染5）熒光顯微鏡觀察）熒光顯微鏡觀察fish結(jié)果結(jié)果羊水標(biāo)本采集羊水標(biāo)本采集 a. 在b 超腹部探頭引導(dǎo)下行羊膜腔穿刺，抽 取羊水20ml，其中15ml

11、用于常規(guī)羊水細(xì)胞培 養(yǎng), 5ml用于fish 檢測(cè)。未培養(yǎng)羊水細(xì)胞制片未培養(yǎng)羊水細(xì)胞制片 取羊水5ml， 1800rpm 離心棄上清，加1mg /ml hanks 膠原酶b 5ml，37 水浴30 min，1800rpm 離心去上清，加0. 075m kcl 5ml，37 水浴低滲20min，加甲醇: 乙酸= 3 1固定液2ml 預(yù)固定， 1800rpm 離心去上清，加5ml 固定液輕輕混勻，固定10min，1800rpm 離心去上清，再重復(fù)固定1 次，制成細(xì)胞懸液，滴片備用。雜交前預(yù)處理雜交前預(yù)處理 將玻片于2 ssc 溶液中浸泡10min，然后放入0.1mhcl 浸泡10min，再放入2

12、ssc 溶液中浸泡5min，然后放入預(yù)熱到37的 0. 01mhcl( 放入玻片前， 0. 01mhcl 中預(yù)先加入20mg /ml 胃蛋白酶160l) 中消化8 10min，經(jīng)過(guò)2 ssc 溶液再次浸泡5min 后，用70%、85%、100%乙醇中梯度脫水，每次3min，自然晾干， 56烤片2min。標(biāo)本的變性標(biāo)本的變性 玻片置73變性液( 70% 甲酰胺) 中 5min，然后分別置于 20的70%、85%、 100% 冰乙醇中各脫水各3min，自然晾干， 45 50烤片。探針變性探針變性 按照比例( 雜交緩沖液: 探針: 水= 7 2 1) 混合，離心1 3s，73 變性5min，45 5

13、0 放置5 10min。(允許fish探針和目標(biāo)dna同時(shí)聯(lián)合變性)雜交雜交 將10l 探針置于雜交區(qū)內(nèi)，覆蓋蓋玻 片，封片膠封邊，置保濕盒恒溫42雜交 10 16h。洗脫洗脫 拆片，在46水浴中， 50% 甲酰胺/2 ssc 液洗滌3 次，每次7min; 2 ssc 液洗滌10min; 0. 1% np 40 /2 ssc 洗滌5min。室溫70%乙醇洗滌3min，暗處自然晾干。dapi 染色和熒光鏡檢染色和熒光鏡檢 dapi 染色和熒光鏡檢: 每片加dapi 10l，蓋上蓋玻片，染色15 20min，結(jié)果用熒光顯微鏡觀察，選擇背景干凈、雜交信號(hào)清晰形態(tài)圓形或近于圓形的細(xì)胞記數(shù)，并照像。臨床

14、實(shí)驗(yàn)中臨床實(shí)驗(yàn)中fish 結(jié)果判別結(jié)果判別 每張羊水玻片至少計(jì)數(shù)50 個(gè)細(xì)胞，判斷 標(biāo)準(zhǔn)為: 若正常細(xì)胞數(shù)90% 則判為正常，若 異常細(xì)胞數(shù)60% 則判為異常，若異常細(xì)胞數(shù) 大于15%并且小于60%，則需要重新檢測(cè)并加 倍計(jì)數(shù)到100 以上。fish 檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)結(jié)果 采用雙色采用雙色13 /21 號(hào)染色體熒光探針檢測(cè)號(hào)染色體熒光探針檢測(cè) 13 號(hào)、號(hào)、21 號(hào)染色體正常胎兒可見(jiàn)號(hào)染色體正常胎兒可見(jiàn)2個(gè)綠色熒個(gè)綠色熒光信號(hào)和光信號(hào)和2 個(gè)紅色熒光信號(hào)。個(gè)紅色熒光信號(hào)。fish 檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)結(jié)果 13 號(hào)染色體正?？梢?jiàn)號(hào)染色體正?？梢?jiàn)2個(gè)綠色熒個(gè)綠色熒光信號(hào)，光信號(hào)，21 號(hào)染色體三體胎兒可見(jiàn)號(hào)

15、染色體三體胎兒可見(jiàn)3 個(gè)紅色熒光信號(hào)。個(gè)紅色熒光信號(hào)。fish用于用于產(chǎn)前診斷主要探針產(chǎn)前診斷主要探針 染色體數(shù)目異常是臨床上最主要的染色體病，染色體數(shù)目異常是臨床上最主要的染色體病，其中其中13號(hào)、號(hào)、18 號(hào)、號(hào)、21 號(hào)、號(hào)、x、y 染色體數(shù)目異常染色體數(shù)目異常最為常見(jiàn)，最為常見(jiàn)， 由于由于13，18，21，x 和和y 這這5 種染色種染色體的非整倍體異常約占所有染色體異常的體的非整倍體異常約占所有染色體異常的6580，占染色體異常導(dǎo)致出生缺陷的，占染色體異常導(dǎo)致出生缺陷的8595， 因此因此fish 用于快速產(chǎn)前診斷主要是針對(duì)這用于快速產(chǎn)前診斷主要是針對(duì)這5 種染種染色體設(shè)計(jì)使用熒光標(biāo)

16、記的探針。色體設(shè)計(jì)使用熒光標(biāo)記的探針。fish 用于產(chǎn)前診斷的指征用于產(chǎn)前診斷的指征a.妊娠婦女血清學(xué)篩查妊娠婦女血清學(xué)篩查 風(fēng)險(xiǎn)高危者（大于等于風(fēng)險(xiǎn)高危者（大于等于1/270)及臨界及臨界風(fēng)險(xiǎn)者風(fēng)險(xiǎn)者 (小于小于1/270至大于等于至大于等于1/1000）。）。b.妊娠婦女到預(yù)產(chǎn)期時(shí)高齡年齡妊娠婦女到預(yù)產(chǎn)期時(shí)高齡年齡35 歲。歲。c.雙親之一為易位攜帶者。雙親之一為易位攜帶者。d.不良孕產(chǎn)史。不良孕產(chǎn)史。e.超聲檢查胎兒異常者。超聲檢查胎兒異常者。fish敏感度和特異度均較高敏感度和特異度均較高 fish 用于產(chǎn)前診斷檢測(cè)的敏感度和特異度均較高。用于產(chǎn)前診斷檢測(cè)的敏感度和特異度均較高。 例例

17、1. 有報(bào)道有報(bào)道fish 檢測(cè)檢測(cè)4 500 例未培養(yǎng)羊水細(xì)胞，對(duì)于常例未培養(yǎng)羊水細(xì)胞，對(duì)于常染色體的敏感度為染色體的敏感度為92.6%，特異度為，特異度為100；性染色體敏；性染色體敏感度為感度為100，特異度為，特異度為99.9%。 例例2. tepperberg 等總結(jié)美國(guó)等總結(jié)美國(guó)25 個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用fish 檢檢測(cè)測(cè)5 348 例羊水資料，結(jié)果敏感度為例羊水資料，結(jié)果敏感度為99.6%，特異度為，特異度為99.98%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為99.8%，陰性預(yù)測(cè)值為，陰性預(yù)測(cè)值為99.96%。 例例3. caine 等回顧性分析等回顧性分析24 742 例例fish檢測(cè)

18、羊水間期細(xì)檢測(cè)羊水間期細(xì)胞的敏感度為胞的敏感度為99.54%，特異度為，特異度為99.97%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為99.54%，陰性預(yù)測(cè)值為，陰性預(yù)測(cè)值為99.97%； 由此可見(jiàn)，由此可見(jiàn)，fish 用于快速產(chǎn)前診斷的準(zhǔn)確性較高。用于快速產(chǎn)前診斷的準(zhǔn)確性較高。fish產(chǎn)前診斷技術(shù)臨床應(yīng)用產(chǎn)前診斷技術(shù)臨床應(yīng)用 染色體數(shù)目異常是引起新生兒先天性遺傳病染色體數(shù)目異常是引起新生兒先天性遺傳病的主要因素之一。傳統(tǒng)的羊水細(xì)胞培養(yǎng)、染色體的主要因素之一。傳統(tǒng)的羊水細(xì)胞培養(yǎng)、染色體核型分析是宮內(nèi)產(chǎn)前診斷胎兒染色體疾病的主要核型分析是宮內(nèi)產(chǎn)前診斷胎兒染色體疾病的主要方法方法, 但該方法所需時(shí)間長(zhǎng)、技術(shù)難度

19、大、易受但該方法所需時(shí)間長(zhǎng)、技術(shù)難度大、易受培養(yǎng)條件的影響。對(duì)未經(jīng)培養(yǎng)的羊水間期細(xì)胞進(jìn)培養(yǎng)條件的影響。對(duì)未經(jīng)培養(yǎng)的羊水間期細(xì)胞進(jìn)行熒光原位雜交檢測(cè)行熒光原位雜交檢測(cè), 快速診斷胎兒常見(jiàn)的三體快速診斷胎兒常見(jiàn)的三體型及性染色體數(shù)目異常型及性染色體數(shù)目異常, 具有快速、簡(jiǎn)便、敏感、具有快速、簡(jiǎn)便、敏感、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。fish產(chǎn)前診斷技術(shù)臨床應(yīng)用價(jià)值產(chǎn)前診斷技術(shù)臨床應(yīng)用價(jià)值 正常情況下羊水失敗率約為正常情況下羊水失敗率約為0.5%， 超過(guò)妊娠超過(guò)妊娠24 周后培養(yǎng)失敗率升至周后培養(yǎng)失敗率升至10%。fish 檢測(cè)的成功檢測(cè)的成功率率2002 年后陸續(xù)有大樣本研究報(bào)道了較為一致的年后

20、陸續(xù)有大樣本研究報(bào)道了較為一致的成功率，約為成功率，約為95%98。后隨著商品化探針的。后隨著商品化探針的上市，操作程序規(guī)范化后失敗率大大降低。傳統(tǒng)上市，操作程序規(guī)范化后失敗率大大降低。傳統(tǒng)核型分析最少需要核型分析最少需要15 ml 羊水標(biāo)本，而羊水標(biāo)本，而fish 只只需需35 ml 羊水。羊水。fish產(chǎn)前診斷技術(shù)在國(guó)外應(yīng)用產(chǎn)前診斷技術(shù)在國(guó)外應(yīng)用 fish 技術(shù)最先在美國(guó)用于產(chǎn)前診斷，而到技術(shù)最先在美國(guó)用于產(chǎn)前診斷，而到2000 年鑒于年鑒于fish 技術(shù)具有高度的敏感性和特異技術(shù)具有高度的敏感性和特異性，美國(guó)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)會(huì)（性，美國(guó)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)會(huì)（ acmg ）宣布）宣布fish 技技術(shù)可以

21、用于常見(jiàn)染色體數(shù)目異常的確診。此后，術(shù)可以用于常見(jiàn)染色體數(shù)目異常的確診。此后，fish 技術(shù)在一些發(fā)達(dá)國(guó)家被廣泛用于快速產(chǎn)前診技術(shù)在一些發(fā)達(dá)國(guó)家被廣泛用于快速產(chǎn)前診斷。檢測(cè)結(jié)果一般可以在斷。檢測(cè)結(jié)果一般可以在2448 h 就可以獲得，就可以獲得，且檢測(cè)結(jié)果與核型分析結(jié)果的一致性可以達(dá)到且檢測(cè)結(jié)果與核型分析結(jié)果的一致性可以達(dá)到99.5以上。以上。產(chǎn)前診斷技術(shù)臨床應(yīng)用價(jià)值產(chǎn)前診斷技術(shù)臨床應(yīng)用價(jià)值 在過(guò)去在過(guò)去30 年中視核型分析為產(chǎn)前診斷的年中視核型分析為產(chǎn)前診斷的“金金標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)”。fish 技術(shù)與核型分析相比，可快速得到技術(shù)與核型分析相比，可快速得到結(jié)果，該優(yōu)勢(shì)能彌補(bǔ)其在診斷準(zhǔn)確性方面的欠缺，結(jié)

22、果，該優(yōu)勢(shì)能彌補(bǔ)其在診斷準(zhǔn)確性方面的欠缺，特別是隨著特別是隨著fish 探針的商品化及實(shí)驗(yàn)方法日臻完探針的商品化及實(shí)驗(yàn)方法日臻完善，善，fish 的可靠性逐步證實(shí)，間期細(xì)胞核的可靠性逐步證實(shí)，間期細(xì)胞核fish 技術(shù)可以提供可靠的產(chǎn)前診斷結(jié)果，結(jié)果直觀且技術(shù)可以提供可靠的產(chǎn)前診斷結(jié)果，結(jié)果直觀且便于解釋，滿足了臨床的需要，有利于臨床決策便于解釋，滿足了臨床的需要，有利于臨床決策和減輕孕婦過(guò)于焦慮的情緒。和減輕孕婦過(guò)于焦慮的情緒。fish 與母源細(xì)胞污染與母源細(xì)胞污染 羊膜腔穿刺時(shí)母源細(xì)胞污染可影響標(biāo)羊膜腔穿刺時(shí)母源細(xì)胞污染可影響標(biāo)本質(zhì)量，導(dǎo)致誤診發(fā)生。建議發(fā)生嚴(yán)重母本質(zhì)量，導(dǎo)致誤診發(fā)生。建議發(fā)

23、生嚴(yán)重母血污染時(shí)不要進(jìn)行血污染時(shí)不要進(jìn)行fish 檢測(cè)。影響檢測(cè)。影響fish 結(jié)果的母體細(xì)胞來(lái)源羊膜腔穿刺中母體的結(jié)果的母體細(xì)胞來(lái)源羊膜腔穿刺中母體的淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞， 這些細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)不會(huì)生這些細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)不會(huì)生長(zhǎng)。出現(xiàn)母體細(xì)胞污染的原因很大程度上長(zhǎng)。出現(xiàn)母體細(xì)胞污染的原因很大程度上與臨床標(biāo)本采集時(shí)操作有關(guān)。因此臨床羊與臨床標(biāo)本采集時(shí)操作有關(guān)。因此臨床羊膜腔穿過(guò)程中應(yīng)盡量避開(kāi)胎盤(pán)穿刺，對(duì)最膜腔穿過(guò)程中應(yīng)盡量避開(kāi)胎盤(pán)穿刺，對(duì)最初抽出的初抽出的24 ml 羊水改行其他檢測(cè)。羊水改行其他檢測(cè)?；袅鳟a(chǎn)與染色體異常稽留流產(chǎn)與染色體異常 孕早期胚胎染色體異常是稽留流產(chǎn)最重孕早期胚胎染色體異

24、常是稽留流產(chǎn)最重要的原因的原因之一，自然流產(chǎn)中胚胎染色體異要的原因的原因之一，自然流產(chǎn)中胚胎染色體異常占常占50%左右，而胚胎染色體數(shù)目異常，包括整左右，而胚胎染色體數(shù)目異常，包括整倍體和非整倍體，為其發(fā)生的重要因素。倍體和非整倍體，為其發(fā)生的重要因素。fish應(yīng)用于流產(chǎn)胚胎絨毛應(yīng)用于流產(chǎn)胚胎絨毛 絨毛染色體檢查是診斷胎兒染色體異常的可絨毛染色體檢查是診斷胎兒染色體異常的可靠依據(jù)。由于絨毛染色體制備成功率易受其取材靠依據(jù)。由于絨毛染色體制備成功率易受其取材時(shí)間及標(biāo)本質(zhì)量的影響，常造成標(biāo)本分裂相少或時(shí)間及標(biāo)本質(zhì)量的影響，常造成標(biāo)本分裂相少或染色體形態(tài)不佳等狀況，給診斷帶來(lái)困難。而染色體形態(tài)不佳等

25、狀況，給診斷帶來(lái)困難。而fish 分析無(wú)需作細(xì)胞培養(yǎng)及顯帶分析，僅作細(xì)胞分析無(wú)需作細(xì)胞培養(yǎng)及顯帶分析，僅作細(xì)胞計(jì)數(shù)，其優(yōu)勢(shì)是不僅適用于分裂中期的染色體，計(jì)數(shù)，其優(yōu)勢(shì)是不僅適用于分裂中期的染色體，也適用于間期核及細(xì)胞周期的所有階段。也適用于間期核及細(xì)胞周期的所有階段。fish應(yīng)用于流產(chǎn)胚胎絨毛應(yīng)用于流產(chǎn)胚胎絨毛 選用選用13、16、18、21、22、x和和y染色體上染色體上的探針對(duì)未培養(yǎng)的絨毛組織進(jìn)行熒光原位雜交來(lái)診的探針對(duì)未培養(yǎng)的絨毛組織進(jìn)行熒光原位雜交來(lái)診斷染色體異常，雜交信號(hào)明亮斷染色體異常，雜交信號(hào)明亮,敏感度高敏感度高,特異性特異性強(qiáng)，克服了流產(chǎn)絨毛組織易污染導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)不成強(qiáng)，克服了

26、流產(chǎn)絨毛組織易污染導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)不成功，核型分析困難等導(dǎo)致結(jié)果難出的尷尬局面。功，核型分析困難等導(dǎo)致結(jié)果難出的尷尬局面。fish應(yīng)用于流產(chǎn)胚胎絨毛應(yīng)用于流產(chǎn)胚胎絨毛 胎兒自身的遺傳學(xué)異常才是導(dǎo)致早期流產(chǎn)胎兒自身的遺傳學(xué)異常才是導(dǎo)致早期流產(chǎn)的主要原因，絨毛染色體的主要原因，絨毛染色體fish分析可對(duì)自然流分析可對(duì)自然流產(chǎn)的原因及時(shí)作出遺傳學(xué)方面的判斷，尤其是產(chǎn)的原因及時(shí)作出遺傳學(xué)方面的判斷，尤其是對(duì)高危因素的流產(chǎn)絨毛常規(guī)行染色體對(duì)高危因素的流產(chǎn)絨毛常規(guī)行染色體fish檢測(cè)檢測(cè)是有必要的。對(duì)習(xí)慣性自然流產(chǎn)的高危因素及是有必要的。對(duì)習(xí)慣性自然流產(chǎn)的高危因素及其臨床絨毛染色體的分析研究，不僅能夠?yàn)榛渑R床絨毛染色體的分析研究，不僅能夠?yàn)榛袅鳟a(chǎn)的病因?qū)W研究提供理論依據(jù)，而且對(duì)患留流產(chǎn)的病因?qū)W研究提供理論依據(jù)，而且對(duì)患者再次妊娠的治療也具有指導(dǎo)作用，因此開(kāi)展者再次妊娠的治療也具有指導(dǎo)作用，因此開(kāi)展流產(chǎn)胚胎絨毛組織的流產(chǎn)胚胎絨毛組織的fish染色體檢查是相當(dāng)有染色體檢查是相當(dāng)有意義的。意義的。流產(chǎn)胚胎絨毛流產(chǎn)胚胎絨毛fish圖圖16號(hào)染色體探針信號(hào)三個(gè)（綠色）22號(hào)染色體探針信號(hào)三個(gè)（紅色）流產(chǎn)胚胎絨毛流產(chǎn)胚胎絨毛fish圖圖13號(hào)染色體探針信號(hào)三個(gè)（綠色）21號(hào)染色體探針信號(hào)三個(gè)（紅色）流產(chǎn)胚胎絨毛流產(chǎn)胚胎絨毛