干細(xì)胞儲存的相關(guān)知識

1、干細(xì)胞儲存什么是干細(xì)胞2干細(xì)胞的來源2干細(xì)胞的基本特性3為什么提倡臍帶干細(xì)胞和臍帶血干細(xì)胞同時保存？4概述臍帶和胎盤的應(yīng)用5自體儲存臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的重要性？7為什么提倡臍帶干細(xì)胞和臍帶血干細(xì)胞同時保存？8人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的分離9儲存間充質(zhì)干細(xì)胞需要做哪些檢測？10如何儲存臍帶間充質(zhì)干細(xì)的？10胎盤干細(xì)胞儲存11什么是干細(xì)胞干細(xì)胞(stem cells, SC)是一類具有自我復(fù)制能力(self-renewing)的多潛能細(xì)胞，在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞。根據(jù)干細(xì)胞所處的發(fā)育階段分為胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell，ES細(xì)胞)和成體干細(xì)胞(somatic stem

2、 cell)。根據(jù)干細(xì)胞的發(fā)育潛能分為三類：全能干細(xì)胞(totipotent stem cell,TSC)、多能干細(xì)胞(pluripotent stem cell)和單能干細(xì)胞(unipotent stem cell)。干細(xì)胞(Stem Cell)是一種未充分分化，尚不成熟的細(xì)胞，具有再生各種組織器官和人體的潛在功能，醫(yī)學(xué)界稱為“萬用細(xì)胞”。干細(xì)胞即為起源細(xì)胞。簡單來講，它是一類具有多向分化潛能和自我復(fù)制能力的原始的未分化細(xì)胞，是形成哺乳類動物的各組織器官的原始細(xì)胞。干細(xì)胞在形態(tài)上具有共性，通常呈圓形或橢圓形，細(xì)胞體積小，核相對較大，細(xì)胞核多為常染色質(zhì)，并具有較高的端粒酶活性。干細(xì)胞的來源干細(xì)

3、胞的來源較為豐富，來自胚胎的干細(xì)胞統(tǒng)稱為胚胎干細(xì)胞，來自成年個體組織(新生兒在內(nèi))的干細(xì)胞統(tǒng)稱成體干細(xì)胞。常見的有四種來源：胚胎(主要用于基礎(chǔ)研究);胎盤及其附屬物;骨髓;成體組織(包含外周血)。目前用于臨床干細(xì)胞來源主要有三種：自體外周血、自體骨髓、胎盤及其附屬物。對比骨髓、外周血來源的干細(xì)胞，胎盤中的干細(xì)胞含量相當(dāng)豐富，增殖和分化能力更強(qiáng)。胎盤作為胎兒分娩后的廢棄物，采集簡便易行，不會引起母親和新生兒任何不適的感覺或產(chǎn)生任何不良的影響。干細(xì)胞的基本特性胚胎干細(xì)胞的分化性   胚胎干細(xì)胞具有萬能分化性(pluripotency)功能，特點(diǎn)是可以細(xì)胞分化(Cell

4、ular differentiation)成多種組織的能力，但無法獨(dú)自發(fā)育成一個個體。它可以差轉(zhuǎn)成為外胚層、中胚層及內(nèi)胚層三種胚層的成員，然后再差轉(zhuǎn)成為人體的220多種細(xì)胞種類。萬能分化性是胚胎干細(xì)胞與在成年人體內(nèi)可找到的多功能干細(xì)胞的主要分別：多功能干細(xì)胞只能差轉(zhuǎn)成為某幾種特定的細(xì)胞種類。在無外界提供差轉(zhuǎn)的刺激之下(即可在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下生長)，胚胎干細(xì)胞在經(jīng)過多重細(xì)胞分裂之后，仍然能保有萬能分化性。成人干細(xì)胞能否保有萬能分化性，直到現(xiàn)在仍然有爭議。不過，有研究已示范了萬能干細(xì)胞可以從成纖維細(xì)胞集叢產(chǎn)生出來。   成體干細(xì)胞的可塑性   

5、越來越多的證據(jù)表明，當(dāng)成體干細(xì)胞被移植入受體中，它們表現(xiàn)出很強(qiáng)的可塑性。通常情況下，供體的干細(xì)胞在受體中分化為與其組織來源一致的細(xì)胞。而在某些情況下干細(xì)胞的分化并不遵循這種規(guī)律。1999年Goodell等人分離出小鼠的肌肉干細(xì)胞，體外培養(yǎng)5天后，與少量的骨髓間質(zhì)細(xì)胞一起移植入接受致死量輻射的小鼠中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肌肉干細(xì)胞會分化為各種血細(xì)胞系。這種現(xiàn)象被稱為干細(xì)胞的橫向分化（trans-differentiation）。關(guān)于橫向分化的調(diào)控機(jī)制還不清楚。大多數(shù)觀點(diǎn)認(rèn)為干細(xì)胞的分化與微環(huán)境密切相關(guān)?？赡艿臋C(jī)制是，干細(xì)胞進(jìn)入新的微環(huán)境后，對分化信號的反應(yīng)受到周圍正在進(jìn)行分化的細(xì)胞的影響，從而對新的微環(huán)境中

6、的調(diào)節(jié)信號做出反應(yīng)。為什么提倡臍帶干細(xì)胞和臍帶血干細(xì)胞同時保存？臍帶血造血干細(xì)胞和臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞功能和用途有所不同，前者能分化成各種血細(xì)胞， 主要用于治療血液和免疫系統(tǒng)疾病，而后者本身不造血，但可提供良好的造血細(xì)胞生長的微 環(huán)境。最近科學(xué)研究證明，采用臍帶回充質(zhì)干細(xì)胞和臍帶血造血干細(xì)胞共同移植的方法，能 明顯改善和加快造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的重建，顯著提高血液病治療效果。間充質(zhì)干細(xì)胞可抑制造血干細(xì)胞移植后的免疫排斥( 造血干細(xì)胞移植中對生命最大的威脅之一)，提高移植成活率及病人主存質(zhì)量。目前間充質(zhì)干細(xì)胞在臨床上已經(jīng)被成功的用來防治造血干細(xì)胞移植后的免疫排斥反應(yīng)。概述臍帶和胎盤的應(yīng)用臍帶和胎盤的應(yīng)

7、用歷史可追溯到十六世紀(jì)，我國著名古醫(yī)書本草綱目中就有用新生兒臍帶、胎盤入藥的記載，中國古人素來有保存和應(yīng)用嬰兒臍帶和胎盤的傳統(tǒng)。生命科學(xué)的最新成果表明：臍帶組織中含有豐富的間充質(zhì)干細(xì)胞！這種細(xì)胞在臍帶組織中含量大、質(zhì)量優(yōu)、純凈度高，咦成功地用于多種疾病的治療。1995 年，美國Lazarus 等使用間充質(zhì)干細(xì)胞治療造血系統(tǒng)惡性疾病 1999 年，美國Horwitz 等用間充質(zhì)干細(xì)胞治療小兒成骨不全和1型膠原缺乏 2002 年，美國0·N·Koc 等用間充質(zhì)干細(xì)胞治療粘多糖病 2003 年，意大利Mazzini等用間充質(zhì)干細(xì)胞治療肌營養(yǎng)不良性側(cè)索硬化癥 2003 年，法國Fo

8、uillard 等用間充質(zhì)干細(xì)胞治療再生障礙性貧血 2005 年，美國Lee 等用間充質(zhì)干細(xì)胞治療股骨頭壞死 2005 年，韓國Oh Young Bang 等用間充質(zhì)干細(xì)胞治療腦中風(fēng) 2005 年，俄羅斯州M·F·Rasulov 等用間充質(zhì)干細(xì)胞治療皮膚燒傷 2005 年，美國Lazarus等用間充質(zhì)干細(xì)胞與造血干細(xì)胞共移植治療血液病取得較好療效 2006 年，中韓Dianiifang 等將間充質(zhì)干細(xì)胞用于外科整形 2007 年，美國Mohamadneiad 等用間充質(zhì)千細(xì)胞治療肝硬化 2007 年，美國Neuhuber 等用間充質(zhì)干細(xì)胞治療脊髓損傷 2007 年，日本Oh

9、nishi s，OhgushiH 等用間充質(zhì)干細(xì)胞治療心力衰竭 2007 年，瑞典Ringden·O 等用間充質(zhì)干細(xì)胞治療出血性膀胱炎、腹膜炎 2007 年，西班牙Gregorio Maranon醫(yī)院用間充質(zhì)干細(xì)抱成功治療心絞痛和冠狀動脈損傷 2007年，美國Osiris公司報道，間充質(zhì)干細(xì)胞作為挽救性藥物治療兒科晚期GVHD，療效顯著 2007 年，美國食品與藥品監(jiān)督管理局( FDA ) 批準(zhǔn)間充質(zhì)干細(xì)胞用于GVHD、潰瘍性腸炎的一線治療間充質(zhì)干細(xì)胞具有向多種類型細(xì)胞分化的能力，可以分化為神經(jīng)、心臟、肝臟、骨、軟骨、肌鍵、脂肪、上皮等 多種細(xì)胞。這種多向分化的能力給人類多種疾病的治

10、療提供了重要的原材料。 作為種子細(xì)胞它可應(yīng)用于修復(fù)/ 替代受傷或病變的多種組織器官，可治療心血管疾病(冠心病、心衰等)，神經(jīng)系統(tǒng)疾病(脊髓損傷、老年癡呆、帕金森氏癥、腦癱等)，骨組織病(骨質(zhì)疏松、軟骨損傷、肌腱損傷等)，自身免疫性疾病 (系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病等)，肝硬化、角膜損傷， 燒燙傷，缺血性血管病和腫瘤等多種疾病，從而為目前一些無法有效治愈的重大疾病提供了嶄新的治療方案。隨著干細(xì)胞科學(xué)和醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用范圍將會進(jìn)一步擴(kuò)大，屆時人的生存質(zhì)量和壽命也會大幅度提高。自體儲存臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的重要性？間充質(zhì)干細(xì)胞是繼胚胎千細(xì)胞、造血干細(xì)胞之后的又一科研熱點(diǎn)，己成為二十一世紀(jì)治

11、療多系統(tǒng)疾病的“實(shí)用型干細(xì)胞”。近年來逐步應(yīng)用于心血管疾病、肝硬化、骨和肌 肉退行性疾病、腦及脊髓神經(jīng)損傷、老年癡呆、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和硬皮病等疾病的治療，并可應(yīng)用于醫(yī)學(xué)美容及人體保健，具有廣泛的應(yīng)用前景。既往間充質(zhì)千細(xì)胞多取自成人骨髓，存在數(shù)量少、來源受限、采集過程痛苦等弊端；而一根臍帶提取的間充質(zhì)千細(xì)胞的數(shù)量相當(dāng)于成人5000毫升骨髓中的間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)量，且質(zhì)量優(yōu)、活性高、更純凈，可多次使用，是理想的間充質(zhì)千細(xì)胞來源。 科學(xué)研究提示親緣關(guān)系越近于細(xì)胞治療效果越好，儲存臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞不但為新生兒提供了健康的保障，家庭成員亦可應(yīng)用，同時新生兒可獲得一份保額為30余萬元的健康醫(yī)療保險；如與臍帶血

12、干細(xì)胞同時保存，新生兒父母還可超值兼得一份價值13 萬元的家庭康樂綜合險，可謂資源、資金雙保險。 為什么提倡臍帶干細(xì)胞和臍帶血干細(xì)胞同時保存？臍帶血造血干細(xì)胞和臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞功能和用途有所不同，前者能分化成各種血細(xì)胞， 主要用于治療血液和免疫系統(tǒng)疾病，而后者本身不造血，但可提供良好的造血細(xì)胞生長的微 環(huán)境。最近科學(xué)研究證明，采用臍帶回充質(zhì)干細(xì)胞和臍帶血造血干細(xì)胞共同移植的方法，能 明顯改善和加快造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的重建，顯著提高血液病治療效果。間充質(zhì)干細(xì)胞可抑制造血干細(xì)胞移植后的免疫排斥( 造血干細(xì)胞移植中對生命最大的威脅之一)，提高移植成活率及病人主存質(zhì)量。目前間充質(zhì)干細(xì)胞在臨床上已經(jīng)被成

13、功的用來防治造血干細(xì)胞移植后的免疫排斥反應(yīng)。人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的分離：從4冰箱中取出無菌袋裝的胎盤，用75%的酒精擦拭袋子表面，放在超凈工作臺內(nèi)的托盤中，取出胎盤，用剪子剪掉臍帶。胎盤的處理：1.剝離羊膜。2.剪取羊膜下的組織，靠近臍帶周圍，約5厚，有韌性，顏色均勻的組織(注意避開血管)。3.把剪下來的組織放入加有0.5ml高濃度抗生素的PBS液中，浸泡10min，倒掉浸泡液。4.用PBS液反復(fù)清洗組織，去除血跡，同時剪去組織的血管，筋索等結(jié)締組織，清洗至漂洗液無色為止，倒掉漂洗液，用移液槍吸去多余的液體。5.用剪刀仔細(xì)將組織反復(fù)剪碎，直至成13左右或更小的的組織塊。6.將組織塊分裝到2個50

14、ml的離心管中，每個離心管中加入5-7.5ml，編號，加PBS液至50ml，上下顛倒混勻，靜置，使組織塊自然沉淀到管底，棄去上清。用PBS液反復(fù)漂洗至上清無色。7.最后一次清洗用HBSS液，便于酶的消化作用。8.用移液槍向每個離心管中加入3ml的膠原酶，消化細(xì)胞間的膠原蛋白。9.用移液槍向每個離心管中加入70微升的DNA酶。10.用HBSS定容至30ml，上下顛倒混勻，加上管口塞子，封口。11.37水浴1h,每隔10min搖動離心管，使組織塊與酶充分接觸。12. 用75%酒精擦拭離心管，拿入超凈臺內(nèi)，去封口，加HBSS定容至50ml.13. 依次過100目的細(xì)胞篩，200目的細(xì)胞篩。14. 用移液器吸取組織液分裝到4個離心管中，放入離心機(jī)中，1000r/min，離心4min,棄上清。15. 向一個離心管中加入適量的培養(yǎng)液，混勻，轉(zhuǎn)入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，編號，37，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。16. 向剩下的3個離心管中加入凍存液，混勻后，共6ml,加入6個凍存管中，每個管中1ml.17. 用逐漸降溫的方法將細(xì)胞凍存起來。儲存間充質(zhì)干細(xì)胞需要做哪些檢測？ 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞樣本：梅毒螺旋體、艾滋病病毒(