DNA 合成實驗室的建立

1、建立建立DNA合成平臺所需要的儀器及試劑耗材合成平臺所需要的儀器及試劑耗材一一般要求二DNA 合成部分三DNA 合成后處理部分四寡核苷酸純化部分五寡核苷酸檢測部分一，一， 一般要求一般要求建立oligo 寡核苷酸合成實驗室一般原則如下。1， 房間：一般情況下，需要5個房間或?qū)⒎块g分割為7個獨立工作區(qū)域，房間要求通風(fēng)狀態(tài)良好。1.1 合成間用于寡核苷酸的合成，包括合成柱裝填及合成。1.2 氨解間（區(qū)域）：用于合成產(chǎn)物的氨解及濃縮。1.3 純化間（區(qū)域） ：合成產(chǎn)物的純化，純化方式為固相萃取，HPLC及電泳。電泳所需面積較大。1.4 純度檢測間（區(qū)域） ：用于測定合成產(chǎn)物的純度。1.5 定標(biāo)及打印

2、間：用于測定合成產(chǎn)物的OD值，分裝，打印標(biāo)簽，貼標(biāo)。1.6 辦公室1.7 試劑準(zhǔn)備間（區(qū)域）：如需自行配制試劑，可選擇手套箱。2，人員：3-4人3，合成管理：推薦使用專業(yè)實驗室管理軟件，內(nèi)容應(yīng)包含試劑管理，客戶管理，訂單管理等內(nèi)容。二， DNA 合成部分最好使用獨立房間，請注意溫度和濕度。最好使用獨立房間，請注意溫度和濕度。1， 儀器儀器DNA 合成儀，空調(diào)，除濕機，真空干燥箱（oven），UPS穩(wěn)壓電源，層流柜或通風(fēng)櫥，氣瓶，計算機等。除除DNA 合成儀外，其它均可由用戶自備。合成儀外，其它均可由用戶自備。u環(huán)境要求：干燥，實驗室潔凈，明亮，最好是凈化實驗室，但不可直曬。u溫度要求：室溫。u

3、供氣系統(tǒng)：高純氬氣或氮氣（壓力3個大氣壓）。合成合成合成合成合成合成合成合成合成合成2.試劑及耗材如需自行配制試劑，可單獨劃定區(qū)域放置手套箱，不宜離合成間太遠。冷藏或冷凍保存的試劑須回復(fù)室溫后使用。冷藏或冷凍保存的試劑須回復(fù)室溫后使用。2.1 DNA 合成試劑：合成試劑：脫保護劑脫保護劑： deblocking reagent， 3%TCA/DCM或3%TCA/DCE,用于合成過程中脫去堿基中的DMT 保護基團。活化劑活化劑：activator，包括acitvator， activator 42等，濃度一般選擇0.25M，用戶活化堿基單體。蓋帽試劑蓋帽試劑A，CapA，蓋帽試劑蓋帽試劑B，Ca

4、pB：用于封閉未參加延長反應(yīng)的CPG。氧化劑：使延長鏈形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。氧化劑氧化劑，溶解用乙腈（DNA合成級，水分含量10ppm），用于溶解單體。洗脫乙腈洗脫乙腈（水分含量30ppm）A,T,C,G 單體：在低于單體：在低于10 條件下保存，最好冷凍保存。條件下保存，最好冷凍保存。CPG(controlled pore glass)載體載體：手套箱2.2 DNA 合成用耗材合成用耗材 注射器注射器：20ml一次性注射器，配長針頭，用于溶解堿基時吸取溶解用乙腈，使用時可在真空干燥箱（使用時可在真空干燥箱（oven）中）中40干燥后使用。干燥后使用。 濾片濾片：用于封閉合成柱。 合成柱合成柱：有些和

5、程序需要購買合成柱，有些合成儀無需購買合成柱。 活化分子篩，3A, 用于堿基溶液及活化劑溶液防水，乙腈脫水。三、DNA 合成后處理部分最好使用獨立房間。最好使用獨立房間。1，儀器 真空泵，離心濃縮儀（帶制冷），高速離心機，移液器，水浴鍋?；蜻x用專用裂解架。 如合成產(chǎn)物為RNA，需配置冷凍干燥機。2， 試劑耗材飽和氨水（32%），0.2ml 薄壁管，1.5ml 旋蓋微量離心管。四、寡核苷酸純化部分 合成的寡核苷酸常用的純化方式脫鹽、BioRP / OPC純化、PAGE純化、HPLC純化。1， 脫鹽或OPC純化固相萃取 正壓/負(fù)壓固相萃取裝置，真空泵，固相萃取小柱，注射器等 加液方式可選用移液工作

6、站，連續(xù)移液器。OPC純化，測OD值2，HPLC純化可選用任何品牌HPLC。蠕動泵須有連續(xù)梯度功能。進樣池要求能達到1m,純化柱可選用C18反向柱或陰離子交換柱。（1） 儀器及配套儀器及配套HPLC, 寡核苷酸純化柱超聲波清洗器。（2）液相色譜純化試劑：）液相色譜純化試劑：試劑選擇原則：固體試劑為色譜純，液體試劑為分析純。試劑選擇原則：固體試劑為色譜純，液體試劑為分析純。主要試劑：冰醋酸(glacial acetic acid)，四乙胺（TEA），如需純化G含量較高的寡核苷酸，需六氟異丙醇（HFIP），乙腈（HPLC級），純凈水主要耗材：量筒，移液器，槍頭，抽濾裝置及針筒式濾器，進樣針，收集管等。液相色譜液相色譜液相色譜液相色譜電泳電泳96通道毛細管電泳