高效液相色譜基礎(chǔ)

1、高效液相色譜基礎(chǔ)HPLC包括：泵輸送流動(dòng)相-動(dòng)力系統(tǒng)六通閥/進(jìn)樣針的進(jìn)樣-進(jìn)樣系統(tǒng)色譜柱的分離-分離系統(tǒng)檢測(cè)器（紫外/熒光/示差折光/MS檢測(cè)器）的檢測(cè)-檢測(cè)系統(tǒng)記錄積分設(shè)備的記錄數(shù)據(jù)計(jì)算（電腦工作站）數(shù)據(jù)分析和記錄系統(tǒng)HPLC的整個(gè)系統(tǒng)工作描述的整個(gè)系統(tǒng)工作描述 我們的HPLC是通過(guò)管路連接這各個(gè)部件按，流動(dòng)相在泵的驅(qū)動(dòng)下，流經(jīng)色譜的全系統(tǒng)到達(dá)廢液，我們可以把它理解成傳輸帶。樣品經(jīng)過(guò)了流通閥，進(jìn)入色譜系統(tǒng)，在流動(dòng)相的帶領(lǐng)下，進(jìn)入色譜柱進(jìn)行分離。被分離的樣品中各個(gè)成分，進(jìn)入檢測(cè)器，被檢測(cè)。由記錄儀記錄檢測(cè)信號(hào)，流經(jīng)廢液?；蛘弑皇占?。泵泵高效液相色譜的壓力莫名的增大，一般認(rèn)為是色譜系統(tǒng)被污染而堵

2、，解決方法：查看各個(gè)部件，或者用過(guò)濾過(guò)的異丙醇清洗流路Purge閥閥（更換流動(dòng)相和排除流動(dòng)相中氣泡時(shí)開(kāi)啟） 一般我們更換流動(dòng)相和排除流動(dòng)相中的氣泡，需要高流速，快速地更換流動(dòng)相和排除氣泡。那么，我們首先是開(kāi)purge閥，這樣流路走的是一條進(jìn)廢液的路，不會(huì)進(jìn)入色譜柱系統(tǒng)，用5-9mL/min的流速快速更換流動(dòng)相和排除氣泡。更換好并且氣泡沒(méi)有了，那么要停泵，關(guān)閉閥門，以正常流速開(kāi)啟泵（例如1.0ml/min）。則流動(dòng)相能夠進(jìn)入各個(gè)色譜系統(tǒng)中。試劑中固體顆粒/流動(dòng)相中氣泡污染色譜系統(tǒng)流動(dòng)相配制好后，還需要以下兩步使用微濾膜，共三種規(guī)格：水系（常用0.45m，過(guò)濾細(xì)菌用0.22 m）有機(jī)系（甲醇 乙腈 四氫呋喃）水系-有機(jī)系（適于混合溶劑）過(guò)濾脫氣真空脫氣超聲波脫氣吹He脫氣加熱脫氣進(jìn)樣進(jìn)樣（一）自動(dòng)進(jìn)樣安排樣品次序，開(kāi)動(dòng)sequence run （二）手動(dòng)進(jìn)樣1、六通閥轉(zhuǎn)至load狀態(tài)注入樣品PS：樣品一定要大于三倍定量環(huán)體積進(jìn)去，已保證定量環(huán)中充滿著樣品，避免進(jìn)樣誤差2、轉(zhuǎn)到inject狀態(tài)PS：HPLC用平頭針 GC用尖頭針?lè)蛛x系統(tǒng)分離系統(tǒng)樣品（混合物）注入色譜儀后，由于性質(zhì)不同被分離成兩個(gè)峰檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器（UV-VIS）熒光檢測(cè)器（FD）示差折光檢測(cè)器（RI）-測(cè)試沒(méi)有紫外集團(tuán)的物質(zhì)，如：糖MS檢測(cè)器