諾麗果汁在重度吸煙者體內(nèi)的抗氧化活性研究(西沙諾麗酵素)

1、·抗氧化活性· 諾麗的保健功效國(guó)際最新研究進(jìn)展論文集Chemistry Central Journal, 2009, 3: 13-17. 諾麗果汁在重度吸煙者體內(nèi)的抗氧化活性研究諾麗果汁在重度吸煙者體內(nèi)的抗氧化活性研究Mian-Ying Wanga, M Nawal Lutfiyyab,c, Vicki Weidenbacher-Hoperd, Gary Andersone, Chen X Suf and Brett J Westf(aUIC醫(yī)學(xué)院病理系，羅克福德，美國(guó)；b曼尼托巴大學(xué)社區(qū)健康科學(xué)學(xué)院醫(yī)學(xué)系，溫尼伯，加拿大；c溫尼伯地區(qū)保健局，溫尼伯，加拿大；dUIC醫(yī)學(xué)院

2、家庭及社區(qū)醫(yī)學(xué)系，羅克福德，美國(guó)；eUIC醫(yī)學(xué)院病理學(xué)系，羅克福德，美國(guó)；f巴戟天控股有限公司研究發(fā)展部，普羅沃，美國(guó))摘要：研究方法諾麗果汁經(jīng)動(dòng)物體外和體內(nèi)試驗(yàn)顯示具有抗氧化活性。本研究以285名重度吸煙者為研究對(duì)象，以常用的安慰劑為臨床對(duì)照試驗(yàn)，對(duì)大溪地諾麗果汁（TNJ）在人體中的抗氧化活性進(jìn)行了為期30天的臨床研究。參與研究的重度吸煙者被隨機(jī)分為3個(gè)小組，即對(duì)照組（每日攝取118 mL安慰劑）、實(shí)驗(yàn)組1（每日攝取29.5 mL諾麗果汁）、實(shí)驗(yàn)組2（每日攝取29.5 mL諾麗果汁），并對(duì)三個(gè)組實(shí)驗(yàn)前后血液中超氧陰離子自由基（SAR）和脂質(zhì)過(guò)氧化物（LOOH）含量進(jìn)行測(cè)定與比較。研究結(jié)果經(jīng)過(guò)

3、30天的臨床實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組2的供試者體內(nèi)的SAR平均由0.26 ± 0.14mol/mL下降至0.19 ± 0.10 mol/mL，LOOH平均由0.53 ± 0.19mol/mL下降至0.40 ± 0.10 mol/mL；實(shí)驗(yàn)組3的供試者體內(nèi)的SAR平均由0.26 ± 0.22mol/mL下降至0.18 ± 0.11 mol/mL，LOOH平均由0.55 ± 0.21mol/mL下降至0.40 ± 0.14 mol/mL；而在對(duì)照組供試者體內(nèi)SAR和LOOH含量沒(méi)有發(fā)生明顯的變化。研究結(jié)論諾麗果汁在重度吸煙者體

4、內(nèi)具有抗氧化活性，與該研究領(lǐng)域先前相關(guān)的研究結(jié)果相符。1前言吸煙會(huì)導(dǎo)致人體產(chǎn)生大量的氧離子自由基，引發(fā)一系列與吸煙相關(guān)的疾病。據(jù)研究統(tǒng)計(jì)，人們每吸一口煙，大約會(huì)產(chǎn)生1017個(gè)氧化分子，這些氧化分子在體內(nèi)被激發(fā)活化，形成血液中的脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，如脂質(zhì)過(guò)氧化物（LOOH）及超氧化物陰離子自由基(SAR)。由此可見(jiàn)，吸煙會(huì)大大增加血液中脂質(zhì)過(guò)氧化物（LOOH）及超氧化物陰離子自由基(SAR)的含量。誘導(dǎo)脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程在很大程度上依賴于細(xì)胞膜上多不飽和脂肪酸的自由基反應(yīng)，不飽和鍵自催化或酶解進(jìn)一步形成脂質(zhì)過(guò)氧化物。脂質(zhì)過(guò)氧化物的產(chǎn)生能夠迅速分解醛和烯醇等DNA結(jié)合因子，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞的內(nèi)源性損傷已有研究

5、報(bào)道，水果和蔬菜是人體抗氧化物質(zhì)的主要來(lái)源。流行病學(xué)研究也證明，水果和蔬菜的攝取可能能夠幫助吸煙者減少因自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化作用所引起的機(jī)體細(xì)胞損傷。諾麗是一種生長(zhǎng)在世界上許多熱帶地區(qū)的常綠灌木或小喬木，具有較長(zhǎng)的使用歷史，在一些太平洋島國(guó)及東南亞地區(qū)，諾麗被當(dāng)?shù)氐娜藗円暈橹匾氖称芳八幤焚Y源?，F(xiàn)有許多關(guān)于諾麗保健功效的研究報(bào)道，其中也包括提高人體免疫力及抗氧化活性等方面。歐洲聯(lián)盟批準(zhǔn)認(rèn)可的諾麗產(chǎn)品大溪地諾麗果汁（TNJ）已被一些國(guó)家的運(yùn)動(dòng)員日常保健使用，以其機(jī)體的抗氧化能力，從而提高運(yùn)動(dòng)耐力。此外，也有研究報(bào)道表明大溪地諾麗果汁能夠用于由于四氯化碳引起的小鼠肝損害細(xì)胞的修復(fù)。因此在先前研究的基

6、礎(chǔ)上，有理由相信諾麗果汁能夠減輕吸煙者由于自由基產(chǎn)生及脂質(zhì)過(guò)氧化所導(dǎo)致的機(jī)體細(xì)胞損傷，為了證明這一科學(xué)預(yù)測(cè)，我們對(duì)諾麗果汁在重度吸煙者體內(nèi)的抗氧化活性進(jìn)行本項(xiàng)研究。2實(shí)驗(yàn)方法本研究試驗(yàn)方案已得到伊利諾伊州立大學(xué)羅克福德醫(yī)學(xué)院倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)，本研究符合赫爾辛基宣言，所有參與者的均已簽署知情同意書。成人重度吸煙者被招募參加本研究。招募標(biāo)準(zhǔn)為：年齡18至65歲，吸煙者每天吸煙20支以上，吸煙史超過(guò)一年，并沒(méi)有同時(shí)使用，或在過(guò)去三個(gè)月中使用處方藥或抗氧化維生素，飲食中可以包括水果和蔬菜。男性和女性供試者比例相同。本研究使用大溪地諾麗果汁（TNJ），安慰劑則由葡萄和藍(lán)莓果汁以及天然奶酪混合成。研究中

7、，供試者被隨機(jī)分配到三個(gè)組中，即對(duì)照組（每日攝取118 mL安慰劑）、實(shí)驗(yàn)組1（每日攝取29.5 mL諾麗果汁）、實(shí)驗(yàn)組2（每日攝取29.5 mL諾麗果汁）。各組的男性對(duì)女性的比例為1:1。實(shí)驗(yàn)組1的供試者每日清晨空腹飲用29.5 mL諾麗果汁；實(shí)驗(yàn)組2的供試者每日早、晚空腹各飲用59 mL諾麗果汁。各組按照上述相應(yīng)方法連續(xù)服用30天。 臨床試驗(yàn)前后后，分別采集每位供試者10毫升血液，離心處理以收集血漿，用以檢測(cè)SAR和 LOOH含量，進(jìn)而將實(shí)驗(yàn)前后的數(shù)值進(jìn)行比較，以示差異。供試者血液中的SAR含量可由四氮唑硝基藍(lán)（TNB）檢測(cè)法確定：SAR與TNB反應(yīng)生成甲臜藍(lán)，其光吸收波長(zhǎng)為602 nm。

8、SAR水平的降低將導(dǎo)致甲臜藍(lán)合成減少，吸光度下降。LOOH的測(cè)定可采用無(wú)色亞甲基藍(lán)法（LMB）。血漿樣品加入LMB試劑后在室溫下靜置5分鐘，在血紅蛋白的存在下，LOOH無(wú)色亞甲藍(lán)被氧化亞甲基藍(lán)，其光吸收波長(zhǎng)為660nm。測(cè)定此吸收波長(zhǎng)處的吸光度，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算得到LOOH的濃度。針對(duì)本研究所得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，以顯示供試者在臨床試驗(yàn)前后血液中超氧化物陰離子自由基(SAR)及脂質(zhì)過(guò)氧化物（LOOH）監(jiān)測(cè)指標(biāo)的差異。各組試驗(yàn)完成率均高于73%，且各實(shí)驗(yàn)組內(nèi)沒(méi)有較大的數(shù)據(jù)波動(dòng)。所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均進(jìn)行平均值及標(biāo)準(zhǔn)方差的計(jì)算，以確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。3結(jié)果與討論實(shí)驗(yàn)對(duì)象

9、，即重度吸煙者身體狀況、生理指征及性別比例等基本接近，其中白人占80 - 89，非裔美國(guó)人占9.418，各組的平均年齡從37至43歲不等，每人每日平均吸煙量為26-29根。臨床試驗(yàn)中，沒(méi)有因諾麗果汁及安慰劑引起的毒副作用。實(shí)驗(yàn)前后供試者體內(nèi)的超氧化物陰離子自由基(SAR)及脂質(zhì)過(guò)氧化物（LOOH）值參見(jiàn)表1，實(shí)驗(yàn)開始前，各組之間SAR和LOOH值相對(duì)接近，對(duì)照組在實(shí)驗(yàn)前后SAR和LOOH含量沒(méi)有發(fā)生明顯的變化。與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組供試者體在臨床試驗(yàn)后體內(nèi)SAR的水平均有所降低，實(shí)驗(yàn)組1（每日攝取29.5 mL諾麗果汁）與實(shí)驗(yàn)組2（每日攝取29.5 mL諾麗果汁）的重度吸煙供試者血液中SAR分別

10、下降了26.9%和30.8%，LOOH水平在兩組實(shí)驗(yàn)組供試者血液中分別下降了24.5%和27.3%。表1 重度吸煙者試驗(yàn)前后血液中自由基水平安慰劑29.5 mL TNJ118 mL TNJSerum SAR (mol/mL)試驗(yàn)前0.23 ± 0.150.26 ± 0.140.26 ± 0.22試驗(yàn)后0.21 ± 0.170.19 ± 0.100.18 ± 0.11Serum LOOH (mol/mL)試驗(yàn)前0.58 ± 0.220.53 ± 0.190.55 ± 0.21試驗(yàn)后0.59 ± 0

11、.210.40 ± 0.100.40 ± 0.14超氧化物陰離子自由基(SAR)及脂質(zhì)過(guò)氧化物（LOOH）在男性和女性供試者體內(nèi)變化的比較見(jiàn)表2。LOOH的下降水平在每組男性和女性中以及兩實(shí)驗(yàn)組之間基本上是相同的，通過(guò)該結(jié)果還可以表明TNJ諾麗果汁每日劑量為29.5毫升，是其抗氧化作用的閾值。表2 男性與女性重度吸煙者試驗(yàn)前后血液中自由基水平SAR (mol/mL)LOOH (mol/mL)29.5 mL TNJ118 mL TNJ29.5 mL TNJ118 mL TNJFemale試驗(yàn)前0.26 ± 0.140.26 ± 0.240.52 ±

12、; 0.230.53 ± 0.16試驗(yàn)后0.19 ± 0.100.18 ± 0.120.39 ± 0.110.39 ± 0.14Male試驗(yàn)前0.25 ± 0.140.26 ± 0.210.53 ± 0.160.57 ± 0.25試驗(yàn)后0.19 ± 0.100.19 ± 0.120.40 ± 0.100.40 ± 0.11值得一提的是，對(duì)照組供試者所攝取安慰劑中包含葡萄和藍(lán)莓果汁等水果的成分物質(zhì)，這些水果已被證明具有抗氧化作用，因此，雖然作為試驗(yàn)對(duì)照，但仍然可以與諾

13、麗果汁在抗氧化作用方面進(jìn)行一定的比較。臨床試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組供試者血液中的SAR至未顯示明顯的差異，可能與安慰劑中存在抗氧化物質(zhì)成分相關(guān)，其具有清除SAR的作用。安慰劑中葡萄和藍(lán)莓果汁等水果的成分物質(zhì)雖然在本臨床試驗(yàn)中使得對(duì)照組體內(nèi)SAR值略有下降，但由于其清除能力有限，不足以降低重度吸煙者血液中的SAR水平。因此，將其設(shè)置為對(duì)照組，不會(huì)影響諾麗果汁在重度吸煙者體內(nèi)降低SAR水平作用的事實(shí)。本研究中，諾麗果汁對(duì)血漿LOOH濃度的影響作用效果顯著，臨床試驗(yàn)結(jié)束后檢測(cè)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組供試者血液中LOOH水平較實(shí)驗(yàn)前明顯下降。SAR在超氧化物歧化酶（SOD）的作用下被轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化物H2O2，而多不飽和脂肪酸的羥基自由基經(jīng)氧化作用形成脂質(zhì)過(guò)氧化物。實(shí)驗(yàn)組供試者LOOH 降低的水平強(qiáng)于SAR，顯示出諾麗果汁抗氧化作用的潛在目標(biāo)靶點(diǎn)存在一定的