抗生素瓶用鋁塑組合蓋微生物方法驗證方案2013.04.02

1、抗生素瓶用鋁塑組合蓋微生物限度檢查方法驗證方案編碼：VP/QBV-13-T097-00頁碼：8 /7項目人員 ItemPersonnel部門/崗位Dept./Position簽名Signature日期Date方案起草Prepared byQC/檢驗員年 月 日 (Y) (M) (D) QA/驗證年 月 日 (Y) (M) (D) 方案審核Reviewed byQC/經(jīng)理 年 月 日 (Y) (M) (D)QA/副經(jīng)理 年 月 日 (Y) (M) (D)QA/經(jīng)理年 月 日 (Y) (M) (D)方案批準Approved by質(zhì)量受權(quán)人 年 月 日 (Y) (M) (D)頒發(fā)部門Issued b

2、yQA生效日期Effective Date 年 月 日 (Y) (M) (D)分發(fā)部門Distributed to QC制作備份：1份Copies prepared: 1pcs目 錄1.概述32.目的33.依據(jù)及參考文件34.驗證小組和各部門職責35.驗證時間安排46.驗證內(nèi)容47. 偏差處理及變更控制78.驗證結(jié)果評價內(nèi)容7附件1 ：培訓確認1附件2：文件檢查確認2附件3 ：設備確認結(jié)果3附件4 ：試驗器材確認結(jié)果4附件5 ：試驗用菌種確認結(jié)果4附件6：培養(yǎng)基確認結(jié)果5555附件7：試劑確認結(jié)果5附件8：器皿確認結(jié)果6附件9：總菌落數(shù)計數(shù)驗證結(jié)果記錄7附件10：檢驗記錄81. 概述抗生素瓶用

3、鋁塑組合蓋是本公司注射劑的包裝材料，規(guī)格有7.2mm、7.3 mm兩種，來源：湖北銀華藥用包裝材料有限公司。新建的206車間（粉針劑車間）軋蓋操作選擇在C級背景A級送風環(huán)境下進行，A級送風環(huán)境應當至少符合A級區(qū)的靜態(tài)要求。為減少潔凈區(qū)工序操作，現(xiàn)擬使用免消毒的鋁塑組合蓋用于生產(chǎn)，為避免鋁塑組合蓋對環(huán)境與產(chǎn)品質(zhì)量的影響，需修訂抗生素瓶用鋁塑組合蓋的質(zhì)量標準，增加其微生物限度檢查項，并同時進行微生物限度檢查方法驗證。A級區(qū)動態(tài)下表面微生物<1CFU/皿（55mm的接觸皿表面培養(yǎng)基面積約23.7cm2），而10個鋁塑組合蓋展開面積約94 cm2，約為1個接觸皿面積的4倍，所以擬定抗生素瓶用鋁塑

4、組合蓋的微生物限度標準為：總菌落數(shù)4CFU/不得過10個。由于初擬的微生物限度檢查采用鋁塑組合蓋浸漬洗脫法，實際采樣面積遠大于展開面積，所以本次擬定的質(zhì)量標準較為嚴格，可用于鋁塑組合蓋的微生物控制。初步擬定其檢驗方法為：取供試品3010個，加入300 100 ml的0.9%無菌氯化鈉溶液中，手工震蕩震搖1分鐘，使瓶蓋與液體充分接觸，制成供試液，取將供試液100ml，用薄膜過濾器全部過濾濾干，濾干后平行制備2張膜，將濾膜菌面朝上貼于胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，平行制備2皿，；同法制備2膜置沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上。胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基置置23302835倒置培養(yǎng)3天，培養(yǎng)結(jié)束后，轉(zhuǎn)移至3035

5、培養(yǎng)2天。；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基置2025倒置培養(yǎng)5天。本次驗證的抗生素瓶用鋁塑組合蓋使用的兩個規(guī)格，其總表面積相差很小，分別約為31.1 cm2與31.3 cm2，根據(jù)庫存情況選擇三批（不分規(guī)格）抗生素瓶用鋁塑組合蓋進行三次獨立驗證。2.目的通過微生物方法學驗證建立抗生素瓶用鋁塑組合蓋的微生物限度檢驗標準操作規(guī)程。3.依據(jù)及參考文件3.1中國藥典2010年版二部附錄XI J“微生物限度檢查法”3.2中國藥品檢驗標準操作規(guī)范2010年版“微生物限度檢查法”3.3現(xiàn)行版3歐盟藥典*歐洲藥典：非無菌產(chǎn)品微生物檢測：微生物計數(shù)試驗3.34藥品GMP指南2011年版“無菌藥品”3.4 5 SOP-QC

6、-0213-V01微生物限度檢查法3.5 6 SOP-QA-017-V02驗證管理規(guī)程4.驗證小組和各部門職責4.1驗證小組及對應職責職位姓名部門具體職責組長謝圣坤QC驗證總協(xié)調(diào)工作，并審核驗證的數(shù)據(jù)組員許維雅QC負責驗證方案和驗證報告的起草，負責驗證數(shù)據(jù)的收集，負責檢品的檢測與驗證記錄的填寫。常磊QC負責檢品的檢測與驗證記錄的填寫。辛海安朱利安劉利李艷姣彭艷妃QC監(jiān)督驗證過程實施及驗證過程中的偏差及OOS處理。吳東琴Q(mào)A負責驗證方案和驗證報告的起草、歸檔保存。監(jiān)督驗證過程實施及驗證過程中的偏差及OOS處理。4.2驗證委員會姓名職務職責顏杰質(zhì)量受權(quán)人1.負責驗證方案及報告的批準；2.負責驗證過

7、程中出現(xiàn)的偏差/OOS的批準放行。馬立如QA經(jīng)理1.負責驗證方案及報告的審核；2.負責驗證過程中出現(xiàn)的偏差/OOS的評估。張德志QA副經(jīng)理5.驗證時間安排時 間工作內(nèi)容2013年0304月方案起草、審批2013年03月04月標準確認、檢驗方法確認2013年04月完成報告6.驗證內(nèi)容6.1驗證前準備6.1.1培訓確認本次驗證內(nèi)容是否已對相關人員進行培訓，檢查確認結(jié)果記錄在附件1培訓確認。6.1.2文件確認本次驗證前驗證方案及相關指導的SOP是否已經(jīng)批準。檢查確認結(jié)果記錄在附件2文件檢查確認。如無相關文件，則需要增加發(fā)放。6.1.3儀器設備確認檢查所涉及的設備是否符合實驗要求，確認結(jié)果填寫在附件3

8、 設備確認結(jié)果中?？山邮軜藴剩涸O備應經(jīng)驗證，在校準有效期內(nèi)。6.1.4試驗器材確認檢查所涉用試驗器材，確認結(jié)果填寫在附件4試驗器材確認結(jié)果中，可接受標準：試驗器材各配件應齊全，無損壞。6.1.5試驗用菌種確認檢查所涉及的試驗用菌種是否符合實驗要求，確認結(jié)果填寫在附件5 試驗用菌種確認結(jié)果中?？山邮軜藴剩壕N形態(tài)特征應良好、菌種代數(shù)不得超過第五代。6.1.6培養(yǎng)基確認檢查所涉及的培養(yǎng)基是否符合實驗要求，確認結(jié)果填寫在附件6 培養(yǎng)基確認結(jié)果?？山邮軜藴剩号囵B(yǎng)基應在有效期內(nèi)。6.1.7試劑確認檢查所涉用試劑是否符合實驗要求，確認結(jié)果填寫在附件7試劑確認結(jié)果中?？山邮軜藴剩涸噭谟行趦?nèi)。6.1.8

9、器皿確認檢查所涉用器皿是否符合實驗要求。確認結(jié)果填寫在附件8器皿確認記錄中?？山邮軜藴剩阂话悴Ａ髅笠鬂崈簦瑹o破損，量器要進行校正。6.1.9驗證用培養(yǎng)基、緩沖液、平皿、刻度吸管應置121濕熱滅菌30分鐘。6.2驗證方法6.2.1 菌液制備：取金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、大腸埃希菌銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌接種至胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基中經(jīng)3035培養(yǎng)1824小時的新鮮培養(yǎng)物；白色念珠菌接種至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中經(jīng)2025培養(yǎng)2448小時的新鮮培養(yǎng)物。上述培養(yǎng)物分別加pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液10ml洗下菌苔轉(zhuǎn)移至空試管中作為菌懸液原液，用pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液進行10倍梯度稀釋至

10、含菌數(shù)50100cfu/ml的菌懸液。取金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中經(jīng)3035培養(yǎng)1824小時、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中經(jīng)2328培養(yǎng)2448小時，分別加入0.9%無菌氯化鈉溶液10ml洗下菌苔轉(zhuǎn)移至空試管中作為菌懸液原液，用0.9%無菌氯化鈉溶液進行10倍梯度稀釋至含菌數(shù)50100CFU/ml的菌懸液。取黑曲霉接種至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中經(jīng)2025培養(yǎng)57天的新鮮培養(yǎng)物，加入含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液10ml洗下孢子吸出，轉(zhuǎn)移至空試管中作為菌懸液原液，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯

11、80的pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液進行10倍梯度稀釋至含孢子數(shù)50100cfu/ml的孢子懸液。取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中經(jīng)2328培養(yǎng)57天，加入含0.05%（ml/ml）聚山梨酯的0.9%無菌氯化鈉溶液10ml洗下孢子吸出，轉(zhuǎn)移至空試管中作為菌懸液原液，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯的0.9%無菌氯化鈉溶液進行10倍梯度稀釋至含孢子數(shù)50100CFU/ml的孢子懸液。6.2.2菌液計數(shù)：分別取上述黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌大腸埃希菌5種的菌液1ml（50100CFU）加入培養(yǎng)皿，注入不超過45胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基1520ml，每種菌液作平行

12、2個平板，置23302835倒置培養(yǎng)3天，培養(yǎng)結(jié)束后，轉(zhuǎn)移至3035培養(yǎng)2天，測定菌數(shù)。分別取白色念珠菌、黑曲霉的菌液1ml加入培養(yǎng)皿，注入不超過45oC沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基1520ml，每種試驗菌平行制備2個平板，于2025倒置培養(yǎng)。6.2.3供試液制備：取供試品3010個，加入300 100 ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，手工震蕩震搖1分鐘，使瓶蓋與液體充分接觸，制成供試液。6.2.4總菌落數(shù)回收率測定：驗證試驗至少應進行3次獨立批次（3批樣品均不同批號）的平行試驗，并計算各試驗菌每次試驗的回收率。要求回收率不低于為50%20070%。具體擬定方法如下：6.2.4.1試驗組：將1ml驗證用

13、菌液（含50100CFU試驗菌）加入上述制備好的供試液中，混勻1分鐘。先將20ml 0.9%無菌氯化鈉溶液加入過濾器中，以潤濕濾膜，。再取將含菌的供試液全部100ml和1ml驗證用菌液（含50100CFU試驗菌）加入薄膜過濾器內(nèi)，濾干，每種菌平行制備2張膜，后將濾膜菌面朝上貼于胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，每種菌平行制備2皿，置2328倒置培養(yǎng)3天，培養(yǎng)結(jié)束后，轉(zhuǎn)移至3035培養(yǎng)2天，測定菌數(shù)。；同法制備2膜置沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上。胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基置3035倒置培養(yǎng)3天（必要時可以延長至5天）；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基置2025倒置培養(yǎng)5天（必要時可以延長至7天）。6.2.4.2菌液組：測

14、定所加的試驗菌數(shù)。6.2.4.3供試品對照組：制備方法同試驗組，不加驗證菌液。6.2.4.4稀釋劑對照組：用相應的稀釋液替代供試品，按試驗組的制備方法和菌落計數(shù)法測定菌數(shù)。試驗結(jié)果：結(jié)果見總菌落數(shù)計數(shù)驗證結(jié)果記錄6.2.4.5結(jié)果判斷：稀釋劑對照組的菌回收率均應不低于70%。若試驗組的菌回收率均不低于70%，則可按該供試液制備方法和計數(shù)法測定供試品的細菌、霉菌或酵母菌數(shù)；若任一次試驗中試驗組的菌回收率低于70%，采取加大沖洗量或其它方法重新驗證。注：試驗組回收率（%）=（試驗組平均菌落數(shù)供試品對照組平均菌落數(shù)）÷菌液組平均菌落數(shù)×100%稀釋劑對照組回收率（%）= 稀釋劑對

15、照組平均菌落數(shù)÷菌液組平均菌落數(shù)×100%6.2.4.6結(jié)果統(tǒng)計 實驗結(jié)果填寫在總菌落數(shù)計數(shù)驗證結(jié)果記錄。7. 偏差處理及變更控制確認過程中如果有任何偏差應及時記錄，分析原因，評價是否是重大偏差，并提出整改措施。偏差填寫偏差處理單，并將偏差復印件附于確認報告中。確認過程中是否有變更，如有變更將變更再確認報告中進行說明。8.驗證結(jié)果評價內(nèi)容對驗證結(jié)果進行綜合評價，內(nèi)容包括但不限于：確認實驗是否有遺漏；確認驗證過程中是否有偏差，偏差是否已經(jīng)采取糾偏措施和預防措施；確認記錄是否完整；是否需要進一步補充實驗。評價必須以書面形式寫出報告?？股仄坑娩X塑組合蓋微生物限度檢查方法驗證編碼

16、：R/QBV-13-T096T097-00頁碼：12 / 8附件1 ：培訓確認 培訓確認培訓人/日期培訓對象部門職責簽名謝圣坤QC驗證總協(xié)調(diào)工作，并審核驗證的數(shù)據(jù)彭艷妃QC監(jiān)督驗證過程實施及驗證過程中的偏差及OOS處理。常 磊QC負責檢品的檢測與驗證記錄的填寫。辛海安QC朱利安QC劉利QC袁文靜QC李艷姣QC吳東琴Q(mào)A負責驗證方案和驗證報告的起草、歸檔保存。監(jiān)督驗證過程實施及驗證過程中的偏差及OOS處理。評價：確認人/日期： QA復核人/日期：附件2：文件檢查確認文件檢查確認文件名稱文件編號是否已批準生測室管理規(guī)程SOP-QC-005-V02是 否培養(yǎng)基管理規(guī)程SOP-QC-017-V01是

17、否菌種管理規(guī)程SOP-QC-012-V02是 否QC脈動真空滅菌柜使用、維護標準操作規(guī)程SOP-QC-377-V00是 否培養(yǎng)箱使用和維護保養(yǎng)標準操作規(guī)程SOP-QC-303-V00是 否電子天平使用標準操作規(guī)程SOP-QC-317-V01是 否潔凈工作臺使用及維護保養(yǎng)標準操作規(guī)程SOP-QC-304-V00是 否生物安全柜使用、保養(yǎng)標準操作規(guī)程SOP-QC-0386-V00是 否Haier 藥品保存箱使用及保養(yǎng)標準操作規(guī)程SOP-QC-0395-V00是 否紅外電熱滅菌器使用、保養(yǎng)標準操作規(guī)程SOP-QC-0389-V00是 否評價：確認人/日期： QA復核人/日期： 附件3 ：設備確認結(jié)果

18、設備確認結(jié)果設備名稱型 號生產(chǎn)廠家及出廠編號有效期至編號確認編號？霉菌培養(yǎng)箱MJ-300BS-II上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司(0812240005)霉菌培養(yǎng)箱MJ-300BS-II上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司(1005240001)生化培養(yǎng)箱SPX-300BS-II上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司（0405011）電熱恒溫培養(yǎng)箱DHP-9162上海一恒科技有限公司（035184）脈動真空滅菌柜XG1.DTX-0.36B山東新華醫(yī)療器械股份有限公司（20100955）脈動真空滅菌柜XG1.DTS-0.24BXG1.DTX-0.36B山東新華醫(yī)療器械股份有限公司（2012202420100953）生

19、物安全柜BSC-1600A2蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司（J10060420）生物安全柜BSC-1600A2蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司（J10060421）生物安全柜BSC-1300A2蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司（J10050341）電子天平PB602-N梅特勒-托利多儀器有限公司（1201130089）電子天平GF-200日本AND（14678558）評價：確認人/日期： 復核人/日期：附件4 ：試驗器材確認結(jié)果試驗器材確認結(jié)果名稱型 號來 源檢查項目及標準檢查結(jié)果微孔濾膜孔徑0.45m，直徑50mm杭州高得泰林有限公司完整，無破損封閉式無菌檢查薄膜過濾器STV2、STV3型浙江寧海白石藥檢儀器廠完

20、整，潔凈，無破損評價：確認人/日期： 復核人/日期：附件5 ：試驗用菌種確認結(jié)果試驗用菌種確認結(jié)果菌種名稱及編號來 源保存方法及條件菌種代數(shù)（不得超過第五代）/形態(tài)特征金黃色葡萄球菌ATCC6538CMCC（B）26003美國菌種收集中心中國藥品生物制品檢定所培養(yǎng)基斜面2-8大腸埃希菌ATCC8739美國菌種收集中心培養(yǎng)基斜面2-8大腸埃希菌銅綠假單胞菌ATCC87399027CMCC（B）44102美國菌種收集中心中國藥品生物制品檢定所培養(yǎng)基斜面2-8枯草芽孢桿菌ATCC6633CMCC（B）63501美國菌種收集中心中國藥品生物制品檢定所培養(yǎng)基斜面2-8白色念珠菌ATCC10231CMCC

21、（F）98001美國菌種收集中心廣州市藥品檢驗所培養(yǎng)基斜面2-8黑曲霉ATCC16404CMCC（F）98003美國菌種收集中心廣州市藥品檢驗所培養(yǎng)基斜面2-8評價：確認人/日期： 復核人/日期：附件6：培養(yǎng)基確認結(jié)果培養(yǎng)基確認結(jié)果培養(yǎng)基名稱來 源檢查項目及標準批號/有效期至/檢查結(jié)果營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基北京三藥科技開發(fā)公司1.應在有效期內(nèi)2.應做適用性檢查胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基北京三藥科技開發(fā)公司1.應在有效期內(nèi)2.應做適用性檢查改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基北京三藥科技開發(fā)公司應在有效期內(nèi)沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基北京三藥科技開發(fā)公司1.應在有效期內(nèi)2.應做適用性檢查評價：確認人/日期： 復核人/日期：附件7：試劑

22、確認結(jié)果 試劑確認結(jié)果試劑名稱規(guī)格來 源檢查項目及標準批號/有效期至pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液250g/瓶北京三藥科技開發(fā)公司應在有效期內(nèi)氯化鈉500g/瓶廣州化學試劑廠應在有效期內(nèi)新潔爾滅溶液500ml/瓶廣東恒健制藥有限公司應在有效期內(nèi)洗必泰5kg/箱錦州九泰制藥有限責任公司應在有效期內(nèi)吐溫80500ml/瓶天津市大茂化學試劑廠應在有效期內(nèi)評價：確認人/日期： 復核人/日期：附件8：器皿確認結(jié)果 器皿確認結(jié)果容器名稱規(guī)格型號檢查項目及標準檢查結(jié)果培養(yǎng)皿9cm潔凈，無破損燒杯1000ml、500ml潔凈，無破損藍蓋瓶500ml、250ml、100ml潔凈，無破損試管18mm×1

23、80mm、30 mm×200mm潔凈，無破損刻度吸管10 ml 、5 ml、2 ml、1ml潔凈，無破損量筒500ml、100ml潔凈，無破損應校準評價：確認人/日期： 復核人/日期：附件9：總菌落數(shù)計數(shù)驗證結(jié)果記錄 總菌落數(shù)計數(shù)驗證結(jié)果記錄檢品名稱： 批號： 驗證日期： 檢驗方法：試驗菌種菌種編號菌液組（驗證加菌數(shù)）試驗組（檢品+驗證加菌數(shù)）稀釋劑對照組（稀釋劑+驗證加菌數(shù)）供試品對照組（檢品本底菌數(shù)）試驗組菌回收率%稀釋劑對照組菌回收率%皿1皿2平均皿1皿2平均皿1皿2平均皿1皿2平均金黃色葡萄球菌大腸埃希菌銅綠假單胞菌大腸埃希菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉備注：試驗組的回收率（%）=（試驗組平均菌落數(shù)供試品對照組平均菌落數(shù)）÷菌液組的平均菌落數(shù)×100%稀釋劑對照組的回收率（%）=稀釋劑對照組的平均菌落數(shù)÷菌液組的平均菌落數(shù)×100%回收率應不低于70%結(jié)果評定：檢驗人/日期： 復核人/日期： 附件10：檢驗記錄檢驗記錄品 名：抗生素瓶用鋁塑組合蓋 批 號：來 源： 實驗環(huán)境： 、RH %檢驗標準：中國藥典歐洲藥典201