細(xì)菌,酵母,霉菌的形態(tài)與菌落特征觀察

1、實(shí)驗(yàn)四、細(xì)菌，酵母，霉菌的形態(tài)與菌落特征觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康募?xì)菌：觀察食品中常見(jiàn)細(xì)菌的平板菌落特征，了解細(xì)菌的菌落在細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢定上的重要性酵母菌：1.學(xué)習(xí)并掌握觀察酵母菌的形態(tài)及出芽繁殖的基本方式 2.學(xué)習(xí)區(qū)分酵母的死活細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法 3.觀察酵母的平板菌落特征，了解酵母菌的菌落在真菌形態(tài)學(xué)檢定上的重要性霉菌：1.學(xué)習(xí)并掌握觀察四類常見(jiàn)霉菌形態(tài)特征的基本方法 2.掌握青霉，曲霉的小室栽片培養(yǎng)法，以便更好地觀察其個(gè)體形態(tài) 3.觀察霉菌的平板菌落特征，了解霉菌的菌落特征在絲狀真菌形態(tài)學(xué)檢定上的重要性二、實(shí)驗(yàn)原理1 細(xì)菌：將單個(gè)微生物細(xì)胞或多個(gè)同種細(xì)胞接種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)適宜條件培養(yǎng)，以母細(xì)胞為中

2、心，在有限空間中大量繁殖，擴(kuò)展成一堆肉眼可見(jiàn)的有一定形態(tài)構(gòu)造的子細(xì)胞群落，成為菌落。若將某一純種細(xì)胞大量密集接種于固體培養(yǎng)基表面，菌體生長(zhǎng)的各菌落連接成片，稱為菌苔。各種細(xì)菌在平板上生成的菌落均具有一定特征，對(duì)細(xì)菌的分類，鑒定有重要意義，菌落主要用于微生物的分離，純化，鑒定，計(jì)數(shù)等研究和選種，育種等實(shí)際工作中。2 酵母菌：以出芽繁殖為主要特征的不運(yùn)動(dòng)的單細(xì)胞真核微生物，其細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)有明顯分化，個(gè)體大小比常見(jiàn)細(xì)菌大幾倍甚至幾十倍，酵母菌的形態(tài)通常有球狀，卵圓狀，橢圓狀，柱狀，或香腸狀等多種。酵母菌的無(wú)性繁殖主要有芽殖，裂殖與產(chǎn)生擲孢子和厚垣孢子。有性繁殖通過(guò)結(jié)合產(chǎn)生子囊孢子。酵母菌的母細(xì)胞在

3、一系列的芽殖后若長(zhǎng)大的子細(xì)胞與母細(xì)胞不分離，就會(huì)形成藕節(jié)狀的假菌絲，稱假絲酵母。 美藍(lán)是一種無(wú)毒的弱氧化劑染料，其氧化型呈藍(lán)色，還原型呈無(wú)色。用美藍(lán)對(duì)酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o(wú)色的還原型。因此，具有還原能力的酵母活細(xì)胞為無(wú)色，而死細(xì)胞或代謝作用微弱的衰老細(xì)胞則呈藍(lán)色或淡藍(lán)色，故可用美藍(lán)鑒別細(xì)胞的死活。但應(yīng)注意美藍(lán)的濃度不宜過(guò)高（一般以0.05%濃度為宜），染色時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則對(duì)細(xì)胞活性有影響。酵母菌在固體培養(yǎng)基上的菌落比細(xì)菌較大而厚（凸起）。其表面光滑而濕潤(rùn)（有的酵母菌老齡時(shí)成干燥而皺縮狀），質(zhì)地柔軟而黏稠，容易用接

4、種環(huán)挑起，不透明，顏色多為乳白色或奶油色，少數(shù)為紅色。菌落的顏色、光澤、質(zhì)地、表面和邊緣形狀等特征都是酵母菌分類、鑒定的依據(jù)。3 霉菌：有復(fù)雜的菌絲體組成，分為基內(nèi)菌絲或營(yíng)養(yǎng)菌絲，氣生菌絲或繁殖菌絲，有范志菌絲產(chǎn)生孢子。觀察霉菌的形態(tài)常有三種方法：乳酸石炭酸棉藍(lán)浸片法、小室載玻片法、玻璃紙培養(yǎng)法。乳酸石炭酸棉藍(lán)浸片法，是將培養(yǎng)物置于乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液中，制成霉菌制片。由于霉菌菌絲較粗大，置于水中觀察時(shí)，菌絲容易收縮變形，故常用乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液制片使細(xì)胞不會(huì)變形，染液的藍(lán)色能增強(qiáng)反差，并具有防腐、防干燥、防止孢子飛散作用。但用接種針（或小鑷子）挑取菌絲體時(shí)，菌體各部分結(jié)構(gòu)在制片時(shí)易被破壞，

5、不利于觀察其完整形態(tài)。霉菌在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)成棉絮狀（毛霉），蜘蛛網(wǎng)狀（根霉），絨毛狀（曲霉）和地毯狀（青霉）的菌落。其繁殖方式多為無(wú)性繁殖和少數(shù)有性繁殖霉菌的菌絲體及其菌落形態(tài)特征是霉菌分類，鑒定的重要依據(jù)。三、實(shí)驗(yàn)材料1 菌種：大腸桿菌、酵母菌、根霉、青霉、黑曲霉。2 試劑：0.1%美藍(lán)染色液、乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液。3 儀器與其他用具：光學(xué)顯微鏡、接種環(huán)、酒精燈、載玻片、蓋玻片、鑷子。4、 實(shí)驗(yàn)步驟1 細(xì)菌的菌落特征觀察。2 （1）酵母菌死活細(xì)胞的鑒別：在載玻片中央加1滴美藍(lán)染色液，然后按無(wú)菌操作以接種環(huán)挑取少量酵母菌苔與染色液混勻，染色23min。染色液不宜過(guò)多或過(guò)少，否則在加蓋玻片時(shí)菌

6、液溢出或有氣泡。另取一清潔蓋玻片，將一邊與菌液接觸，以45度角緩慢覆蓋菌液。將制片先用低倍鏡，再用高倍鏡觀察，區(qū)分死細(xì)胞（藍(lán)色）、活細(xì)胞（無(wú)色）、老齡細(xì)胞（淡藍(lán)色）。（2）酵母菌的菌落特征觀察。3 （1）霉菌的形態(tài)觀察：乳酸石炭酸棉藍(lán)浸片法。在載玻片上滴1滴乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液，用接種環(huán)（或鑷子）從霉菌菌落邊緣挑取少量已產(chǎn)孢子的菌絲，置于載玻片上的染液中，小心地將菌絲分散開(kāi)。蓋上蓋玻片（勿壓入氣泡和移動(dòng)蓋玻片，以免影響觀察），置于低倍鏡和高倍鏡下觀察三類霉菌內(nèi)容如下：1 根霉：用低倍鏡觀察孢子囊梗、囊軸等，用高倍鏡觀察孢子囊孢子的形狀、大小。2 曲霉：在高倍鏡下觀察菌絲有無(wú)隔膜，分生孢子著生位

7、置，辨認(rèn)分生孢子梗、頂囊、小梗和分生孢子。3 青霉：在高倍鏡下觀察菌絲有無(wú)隔膜，分生孢子梗、副枝、小梗和分生孢子的形狀等。 （2）霉菌的菌落特征觀察。5、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1 大腸桿菌的菌落特征觀察：小菌落（直徑12mm），菌落邊緣整齊，圓形，表面有光澤、濕潤(rùn)、光滑、呈灰白色。2 （1）酵母菌死活細(xì)胞的鑒別：無(wú)色為活細(xì)胞，藍(lán)色為死細(xì)胞。（高倍鏡下的酵母菌）（2） 酵母菌的菌落特征觀察：小菌落（直徑12mm），菌落表面光滑、濕潤(rùn)、粘稠，易挑起，菌落質(zhì)地均勻，正反面和邊緣、中央部位的顏色一致。（酵母菌的孟加拉紅平板）3 . （1）霉菌的形態(tài)觀察。1 根霉：可觀察到孢子囊梗、囊軸。（低倍鏡下）（高倍鏡下）2

8、 曲霉：可觀察到分生孢子梗、頂囊、分生孢子。3 青霉：可觀察到分生孢子梗、小梗等。（2） 霉菌的菌落特征觀察。根霉：蔓延生長(zhǎng)，充滿整個(gè)培養(yǎng)基，白色蜘蛛網(wǎng)狀。（根霉在PDA培養(yǎng)基上）黑曲霉： 局限生長(zhǎng)，直徑23cm，結(jié)構(gòu)疏松，絨毛狀，邊緣生長(zhǎng)稀疏，呈白色，中央部分顏色暗綠，反面白色。（黑曲霉在孟加拉紅培養(yǎng)基上）青霉： 局限生長(zhǎng)，直徑1cm左右，菌落絨狀、厚實(shí)，中央呈淺灰綠色，反面暗黃色。 （青霉在PDA培養(yǎng)基上）6、 思考題（第52頁(yè)）7. （1）你主要根據(jù)哪些形態(tài)特征來(lái)區(qū)分根霉和毛霉，青霉和曲霉？列表比較它們?cè)谛螒B(tài)結(jié)構(gòu)上的異同。菌落特征菌體形態(tài)特征菌落顏色菌落大小菌落組織形狀菌落表面形狀根霉白色遍布整個(gè)培養(yǎng)基蜘蛛網(wǎng)狀疏松的菌絲有假根，有匍匐菌絲，有囊托，無(wú)囊領(lǐng)毛霉白色大菌落棉絮狀緊密的菌絲有假根，無(wú)匍匐菌絲，無(wú)囊托，有囊領(lǐng)青霉淺灰綠色較小菌落絨狀厚實(shí)分生孢子梗頂端呈掃帚狀曲霉邊緣呈白色，中央部分顏色暗綠較大