DNA粗提取和鑒定實驗

1、、實驗原理 DNA主要存在于細胞核 DNA在 NaCl 溶液中的溶解度，是隨著 NaCl的濃度的變化而改變的。當 NaCl 的物質(zhì)的量 濃度為 molL時,DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在NaCl 溶液中的 DNA析出。 DNA不溶于酒精溶液，但是細胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以 進一步提取出含雜質(zhì)較少的 DNA。DNA遇二苯胺（沸水?。境伤{色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。二、實驗材料和用具雞血細胞液（ 510ml ）；體積分數(shù)為 95%的冷酒精溶液（實驗前置于冰箱內(nèi)冷卻24h）；蒸餾水；質(zhì)量濃度為 0 g/ml 的檸檬酸納溶液；質(zhì)量的濃度分別

2、為2mol/L 和 0015mol/L 的氯化納溶液（新教材不要求 0、 015 的濃度了，都是用的 2mol/L ）；二苯胺試劑；鐵架臺； 鑷子；水浴鍋；玻璃棒；濾紙；滴管；量筒（100ml，一個）；燒杯；（ 1000ml，一個， 50ml、100 ml 、500ml 各二個）；試管（ 20ml ，二個）；漏斗；試管夾；紗布。三、課前準備雞血細胞液取質(zhì)量濃度為 0 1g/ml 的檸檬酸納溶液（抗凝劑） 100ml，置于 500ml 燒杯中。注入新鮮 的雞血（約 180ml），同時用玻璃棒攪拌，使血液與檸檬酸納溶液充分混合，以免凝血。將 燒杯中的血液置于冰箱內(nèi)，精置一天，使血細胞自行沉淀。 （

3、也可以將血液倒入離心管內(nèi)， 用 1000r/min （轉(zhuǎn)每分）的離心機離心 2min ，血細胞沉淀于離心管底部。實驗時。用吸管 除去離心管上部的澄清液，就可以得到雞血細胞液。四、方法步驟 提取雞血細胞的細胞核物質(zhì) 將制備好的雞血細胞液 5 mL10mL，注入到 50 mL 燒杯中。向燒杯中加入蒸餾水 20 mL， 同時用玻璃棒充分攪拌 5 min，使血細胞加速破裂。然后，用放有1-2 層紗布的漏斗將血細胞液過濾至 1000mL。取其濾液。 溶解細胞核內(nèi)的 DNA將氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 mol/L 的溶液 40mL 加入到濾液中， 并用玻璃棒沿一個方向攪 拌 1min ，使其混合均勻，這時

4、 DNA在溶液中呈溶解狀態(tài) 。 析出含 DNA的粘稠物 沿燒杯內(nèi)壁緩緩加入蒸餾水，同時用玻璃棒不停地輕輕攪拌，這時燒杯中有絲狀物出現(xiàn)， 注意觀察絲狀物呈什么顏色。繼續(xù)加入蒸餾水，溶液中出現(xiàn)的粘稠物會越來越多。當粘稠 物不再增加時停止加入蒸餾水（這時溶液中氯化鈉的物質(zhì)的量濃度相當于mol L）經(jīng)驗值：需加約 570mL 蒸餾水，且分多次加入。將溶液中的 DNA 與其他雜質(zhì)分離，這一步驟是實驗成敗的關(guān)鍵。實驗中應該緩慢貼壁加入 蒸餾水，并輕輕地沿一個方向不停地均勻攪拌，以利于DNA分子的附著和纏繞。 濾取含 DNA的粘稠物 用放有多層紗布的漏斗，過濾步驟 3 中的溶液至 500mL 的燒杯中，含

5、DNA 的粘稠物被留在 紗布上，濾液丟棄。 將 DNA的粘稠物再溶解取 1 個 50 mL燒杯，向燒杯內(nèi)注入氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為2 molL的溶液 20mL。用鈍頭鑷子將紗布上的粘稠物夾至氯化鈉溶液中，用玻璃棒不停地攪拌，約 3 分鐘，使粘稠物 盡可能多地溶解于溶液中。 過濾含有 DNA的氯化鈉溶液取 1 個 100 mL 燒杯，用放有兩層紗布的漏斗過濾步驟 5 中的溶液。取其濾液， DNA溶于濾 液中。 提取含雜質(zhì)較少的 DNA 在上述濾過的溶液中，加入等體積的、冷卻的、體積分數(shù)為95 的酒精溶液 （使用冷卻的酒精，對 DNA的凝集效果較佳） ，并用玻璃棒攪拌，溶液中會出現(xiàn)含雜質(zhì)較少的白色

6、絲狀 物。用玻璃棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。這種絲狀物的主要成分就是DNA。 DNA 的鑒定取兩支 20 mL的試管，各加入氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為0015 mol L 的溶液 5 mL，將絲狀物放入其中一支試管中， 用玻璃棒攪拌， 使絲狀物溶解。 然后， 向兩支試管中各加入 4mlL 的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管置于沸水中加熱 5 min ，待試管冷卻后，觀察并且比 較兩支試管中溶液顏色的變化。五、討論 兩次使用蒸餾水第一次：細胞吸水脹破第一步第二次：使 DNA 黏稠物析出第三步 三次過濾第一次： DNA 存在于濾液里第一步第二次： DNA 被留在紗布上第四步第三次： DNA

7、存在于濾液里第六步過濾時使用的紗布層數(shù)與需用濾液或黏稠物有關(guān)，第二次要用其濾出的黏稠物有關(guān)，所以 要使用多層紗布，第一次和第三次均要用其濾液，使用的紗布為12 層 兩次析出第一次：用 mol L 的 NaCI 溶液含雜質(zhì)多第三步第二次：用冷卻的 95的酒精第七步 六次攪拌：第一、二、三、五、七、八步 其中除第八步外，其余均要朝一個方向攪拌，在第三、五步攪動還要輕緩，玻璃棒不要直 插燒杯底部，這樣才能保證得到完整的 DNA為什么反復地溶解與析出 DNA，能夠去除雜質(zhì)？答：用高鹽濃度的溶液溶解 DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)； 用低鹽濃度使 DNA析出， 能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。 因此， 通過反復溶解與析出 DNA，就能夠除去與 DN