試驗(yàn)室常用溶液配制

1、實(shí)驗(yàn)室常用溶液的配置Amp+/Kan +:貯存液濃度為50mg/mL稱取500mg于10mL超純水中溶解，抽濾后1mL分裝到離心管中，于-30°C凍存X-gal :貯存濃度為20mg/mL稱取20mgX-gaI溶于1mL二甲基甲酰胺中，-30C中用錫箔紙包裹后避光保存，不需要過濾除菌IPTG :貯存濃度為0.84mol/L稱取2glPTG溶于8mL超純水中，用水定容到10mL,用0.22um的一次性濾過器過濾除菌，1mL 分裝到離心管中并于-30C保存CaCl2：貯存濃度為1moI/L稱取1.11gCaCI (或者CaCI:2H2O1.4698g)溶于8mL超純水中，定容到10mL，

2、用0,22um的一次 性濾過器過濾除菌，1mL分裝到離心管中，并于-30C保存LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨(Tyrtone) 10g/L酵母提取物(YeastExtraction) 5g/L氯化鈉10/L根據(jù)經(jīng)驗(yàn)用NaOH調(diào)節(jié)PH為7.2-7.6，然后高壓蒸汽滅菌，注意及時(shí)從滅菌鍋中取出無DNA酶的RNA酶：將胰 RNA 酶(RNA 酶 A)溶于 10mmol/LTris-Cl (PH7.5)、15mmol/LNaCl 中，配成 10mg/mL 的濃度，于100C加熱15min，緩慢冷卻至室溫，分裝成小份保存于-20 CBradford貯存液95% 乙醇 100mL88%磷酸 200mLG2500.3

3、5g室溫下可儲(chǔ)存，一般4CBradford工作液Bradford 貯存液 30mL雙蒸水425mL95% 乙醇 15mL88%磷酸 30mL儲(chǔ)存于4C超聲破碎緩沖液KCI300mM22.37gKH 2PO450mM6.81gEDTA1mM0.292g(EDTA-2Na-2H 2O)0.372g定容至1L，調(diào)pH至8.0包涵體洗滌液KCI300mM22.37gKH 2PO450mM6.81gEDTA5mM1.46g(EDTA-2Na-2H 2O)1.86g尿素2M120gTriton X-1000.5%5ml脫氧膽酸鈉鹽0.1%1g定容到1L調(diào)pH至8.0勻漿緩沖液(pH=7.5)成分：20mM

4、HEPES0.002moI=0.476g力卩入 0.952g1.5mMMgCl 20.00015mol=0.0036g 加入 0.0072g0.2mMEDTA0.00002mol=0.00584g 加入 0.01168g0.1MNaCl0.01mol=0.58g 加入 1.16g0.5mM 釩酸鈉 0.00005mol=0.0092g加入 0.0184g加100mL水進(jìn)行溶解，NaOH調(diào)pH至7.50.2mMDTT 總體積 500 Z加入 0.1 Z0.4mMPMSF 總體積 500 加入 201%SDS 力卩入 50yL0%SDS其中DTT和PMSF勻漿之前加入，SDS勻漿之后離心之前加入D

5、TT配成1M母液，溶于0.01M乙酸鈉（pH=5.2）中，過濾除菌PMSF 配成 10mM 母液，溶于異丙醇10* PBSNaCl80.0669gKCl2.0129gNa2HPO414.1960gKH2PO42.4496g水定容至1L，使用時(shí)稀釋10倍，用NaOH調(diào)pH至7.4343,137mMNaCl,and2.7mMKCl轉(zhuǎn)膜緩沖液（含有 SDS）1L 劑量甘氨酸 2.9gTris5.8gSDS0.37g甲醇 200mL水 800mL10 蛋白電泳緩沖液1L 劑量Tris 堿（Mr121.14）30.2g甘氨酸（Mr75.07）188gSDS（Mr288.38）10g加水至 1L用時(shí)稀釋

6、10倍即可30丙稀酰胺1L 劑量丙烯酰胺 290gN,N'-亞甲基雙丙稀酰胺10g溶于600ml蒸餾水中，加熱至37C溶解，補(bǔ)足體積至1L,過濾，且pH不大于7.01MTris-Cl （ pH6.8 ）60.55gTris堿溶解于400ml蒸餾水，溶解后調(diào)pH值，總體積為500ml1.5MTris-Cl （ pH8.8 ）90.83gTris堿溶解于400ml蒸餾水，溶解后調(diào)pH值，總體積為500ml。加約14.5ml濃鹽酸，再調(diào) 整到 500ml 體積1MDTT用20mL0.01mol/L乙酸鈉溶液（pH=5.2）溶解3.09gDTT，過濾除菌后分裝考馬斯亮藍(lán) R-250 染液在90

7、mL甲醇：水（1:1 ）和10mL冰乙酸混合液中溶解0.25g考馬斯亮藍(lán)R-250,過濾后室溫保存蛋白酶 K （20mg/mL）滅菌的50mMTris （pH8.0），1.5mM乙酸鈣溶解，配置成濃度為 20mg/mL的溶液，-20C保存流式緩沖液 PBS+5%FBS+0.02%sodiumazideWater45mL20%疊氮鈉50 uL10*PBS5mLFBS2.5mL文獻(xiàn)常見配方： PBS+0.5-1%BSA（5-10%FBS）+0.1%sodiumazide酸酐稱取50g重鉻酸鉀（KCrO4）溶于80mL雙蒸水中，90C中溶解2h,每半小時(shí)攪拌促進(jìn)溶解，溶解 完成后，加入 1000mL

8、 硫酸，分裝于 2 個(gè)瓶子中。注意使用過程中，如果其中一瓶的效果不好，不 要混合使用。使用 5次，就要重配。滴管酸酐中浸泡24h，自來水沖洗至無明顯可見顏色，自來水正反面各20遍，雙蒸水正反面各20遍,復(fù)印紙中包裹，烘干，加棉花塞和膠頭，單獨(dú)包裝，滅菌，烘干。雙抗（青霉素和鏈霉素）0.8g鏈霉素和80WU青霉素，一起溶于8mlPBS,單位分別為10A5ug/ml和10A5U/ml，然后稀釋 10倍，分別為10A4ug/ml和10A4U/ml，使用時(shí)，按照1%加入，分別為100ug/ml與100U/ml 嚴(yán)去甘 I 培養(yǎng)基 I2%FCS， 1%雙抗， 128uL/40mL 肝素鈉， RPMI16

9、40嚴(yán)去甘 II培養(yǎng)基 II0.1%FCS, 1%雙抗，128uL/40mL 肝素鈉，RPMI1640完全培養(yǎng)基10%FCS（ 5%FCS+5%魚血清），1%雙抗LPS稱取2mgLPS溶于1mLPBS中，0.22叩濾膜過濾，硅化離心管，-20C保存1*Turk 染液GentianVioler （結(jié)晶紫）50mgAceticAcid （冰乙酸） 5mLWater495mL1% 巴比妥鈉1g巴比妥鈉溶于100mL的PBS中，充分混勻，避光保存（80ug/g用量） 誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞所需溶液硫代硫酸鹽肉湯培養(yǎng)基 （Thioglycollatebroth）：稱取3g，加入到100ml純水中，高溫12

10、1C滅菌15min,然后冷卻到室溫，再重復(fù)2次，進(jìn)行老化 操作。此時(shí)已經(jīng)溶解，呈現(xiàn)透明溶液。沖洗液：RPMI1640+1% 雙抗培養(yǎng)基：RPMI1640+10%FBS+1% 雙抗氯化銨紅細(xì)胞裂解液（10X的儲(chǔ)存液）參考流式中文網(wǎng)80.2gNH4Cl（1.5M）8.4gNaHCO3（100mM）3.7gEDTA 二鈉（10mM）加水至900ml，然后用1M的HCI或1M的NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.4。最后加水至1升。 該10*的儲(chǔ)存液可在4C保存6個(gè)月。工作液的配制：在使用前蒸餾水稀釋 10倍即可。（1 份儲(chǔ)存液加上 9份水）。工作液用來裂解紅細(xì) 胞。不能以 <10*的濃度儲(chǔ)存，否則會(huì)形成碳

11、酸銨而失效。ACK 裂解液參考文獻(xiàn) Dynamicvariationincyclingofhematopoieticstemcellsinsteadystateandinflammation,JEM,2011ACK(Ammonium-Chloride-Potassium)LysingBufferAmmoniumChloride150mMMw53.5PotassiumBicarbonate10mMMw100.1EDTA0.1mMMw372.0ACKLysisBuffer(1L)Component Amount FinalConcentrationNH4Cl 8.3g0.15MKHCO3 1.0g

12、10mMEDTA 200ul0.5M 0.1mM addddH2Oto800ml,adjustpHto7.2-7.4,finalizevolumeto1LwithddH20RedBloodCellLysisUsingACKLysingBuffer1) CollectwholebloodbyvenipunctureinEDTA-treatedcollectiontubes.2) Pipette1mLEDTA-treatedwholebloodintoatubecontaining10-20mLofACKLysingBufferatroomtemper ature.3) Allowtheblood

13、sampleplusACKLysi ngBuffertoi ncubateatroomtemperaturefor3-5mi nu tes.Lysisofthere dcellsshouldbeevidentduringthisincubation.4) Collectthewhitebloodcellsbycentrifugationat300xgfor5minutesatroomtemperature.5) Aspiratethesupernatant,leavingapproximately50uLtoavoiddisturbingthepellet.6) Gentlymixthecellsandtheremainingfluid,thenadd5mLcoldphosphatebufferedsaline.7) Mixthecellsandphosphatebufferedsaline,andthencollectthecellsbyce