ezh2在食管鱗癌組織中的表達(dá)及臨床意義

1、ezh2在食管鱗癌組織中的表達(dá)及臨床意義摘要：目的研究ezh2在食管鱗癌組織中的表達(dá)情況，探討其與食管鱗癌臨床 病理特征的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組化envision二步法檢測(cè)48例食管鱗癌組織 中ezh2和mel-18的表達(dá)情況。結(jié)果 食管鱗癌組織及相應(yīng)癌旁組織中ezh2 蛋白陽性表達(dá)率分別為79.2% ( 38/48 )和16.6% ( 8/48 ), mel-18蛋白陽性表達(dá) 率分別為18.7% (9/48 )和83.3% (40/48),兩組間相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p <0.05),食管鱗癌組織中ezh2蛋白的表達(dá)與患者的性別、年齡及腫瘤大小無關(guān) (p>0.05 )，而與腫瘤

2、的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度有關(guān)(p <0.05 ), ezh2和mel-18 蛋白的表達(dá)呈顯著負(fù)關(guān)聯(lián)(r二0.674, p <0.05)。結(jié)論 從蛋白水平證明ezh2 的異常表達(dá)可促進(jìn)食管癌的發(fā)生發(fā)展，并可能為食管癌的早期診斷提供新的手 段。關(guān)鍵詞：食管癌；ezh2;免疫組化染色expression of ezh2 in esophageal squamous cell carcinoma tissue and its clinical significanceabstract aim： to investigate the expressions of ezh2 proteins i

3、n esophageal squamous cell carcinoma(escc) tissue, and analyze the clinicopathological characteristics of both proteins in escc methods the expressions of ezh2 and mel-18 proteins were detected by immunohistochemistry in 48 escc tissue and 48 normal esophageal mucosa specimens. results the positive

4、expression rate of ezh2 in escc and normal esophageal mucosa tissue was792% and 16.6 %，and that of mel-18 was 18.7% and 83.3%, and there were significant differences(p<0.05). the expressions of ezh2 proteins were associated with tumor lymph node metastasis and differentiation of esophageal carcin

5、oma(p<0.05), but not with age, sex, and tumor size a negative association was noted between the expression of ezh2 and that of mel-18 in escc (r=-0.674, p <0.05) conclusion： the abnormal expressions of ezh2 may play an important role in the carcinogenesis and development of escc, which provide

6、s some new ways on early diagnosis for escckey words: esophageal squamous cell carcinoma; ezh2;immunohistochemistry食管癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，是嚴(yán)重危害人類生命和健康的疾 病，發(fā)病率近年來有上升的趨勢(shì)山。食管癌的病因和發(fā)病機(jī)制目前仍不明確，包 括一些癌基因、抑癌基因、細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的異常表達(dá)等。ezh2和melj8 基因?qū)儆诙嗍峄蚣易?polycoinb of genes, pcg), pcg在造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì) 胞及腫瘤干細(xì)胞的增殖、分化和腫瘤的發(fā)生中都發(fā)揮著關(guān)鍵

7、的作用。本研究采 用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)ezh2和mel-18蛋白在48例食管鱗癌組織及癌旁組織 中的表達(dá)，探討兩者在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用。1材料和方法1.1材料 本研究病理資料取自我院2008-2010年間住院手術(shù)的食管鱗癌患者， 每例手術(shù)標(biāo)本分別在食管鱗癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁5cm組織取材，全部病例術(shù)前均 未做化療、放療；其中男30例，女18例，年齡40-70(平均65.3)歲，高、中、 低分化分別為12、23、13例；有無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分別為36、12例。所有病例 均經(jīng)病理確診。sp試劑盒及dab顯色劑由福州邁新公司提供，兔抗人ezh2 多克隆抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，兔抗人me

8、l-18單抗購(gòu)自santa cruz biotechnology 公司。1.2免疫組織化學(xué)染色 標(biāo)本經(jīng)4%中性甲醛固定，石蠟包埋，切片厚34yn), 免疫組織化學(xué)采用envision二步法?？乖迯?fù)采用微波爐熱修復(fù)，其余染色步 驟按試劑盒說明進(jìn)行，dab顯色，蘇木精復(fù)染。陽性對(duì)照用已知陽性片，陰性 對(duì)照用pbs代替一抗。結(jié)果判斷：染色陽性信號(hào)呈棕黃色顆料，均定位于細(xì)胞 核，判定方法為在高倍鏡下觀察至少10個(gè)有代表性的高倍視野，腫瘤細(xì)胞中有 10%以上陽性細(xì)胞被判定為表達(dá)陽性。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用spss13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件分析，食管鱗癌臨床病 理參數(shù)與ezh2和melj8蛋白表達(dá)率之

9、間的比較采用咒2檢驗(yàn)，采用列聯(lián)系數(shù) 分析食管癌組織中兩種蛋白表達(dá)的關(guān)系，p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1食管鱗癌及癌旁正常黏膜組織中ezh2和melj8蛋白的表達(dá)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，在食管鱗癌中ezh2蛋白呈高表達(dá)，癌旁組織中無表 達(dá)或低表達(dá)，mel-18蛋白在食管鱗癌中無表達(dá)或低表達(dá)，癌旁組織中高表達(dá)(見圖1)。食管鱗癌組織及相應(yīng)癌旁組織中ezh2蛋白陽性表達(dá)率分別為79.2%(38/48 )和 16.6%(8/48), mel-18 蛋白陽性表達(dá)率分別為 18.7%(9/48)和 83.3%(40/48 ),兩組間相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),圖1:

10、a:ezh2蛋白在食管鱗癌組織中的免疫組化染色(x200)b:mel-18蛋白在食管鱗癌組織中的免疫組化染色(x200)fig 1 immunohistochcmixal staining showing ezh2 and mel-18 protein expression inescc tissues(x200)2.2 ezh2蛋白表達(dá)率與食管鱗癌的臨床病理特征關(guān)系ezh2蛋白在食管鱗癌組織的表達(dá)與患者的性別、年齡及腫瘤大小無關(guān)(p>0.05),而與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度有關(guān)(p<0.05),見表1。表1食管鱗癌組織中ezh2蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系tab 1 rela

11、tion between ezh1 protein expression and clinical characteristics ofescc(n,%)clinicalexpression of ezh2 proteinpathologic characteristicsnpositivenegativepositive rate(%)psexmale30246800.854female1814477.8age (year)<6035287800.816>601310376.9size<5cm3830878.90.942>5cm108280lymph node met

12、astasisno1267500.002yes3632488.8degree of differentiationhigh125741.6middle2320386.90.001low131301002.3食管癌中ezh2和mel-18蛋白表達(dá)的關(guān)系48例食管癌組織中ezh2蛋白陽性表達(dá)率為79.2%, mel-18蛋白在48例食管 癌中陽性表達(dá)率為18.7%, ezh2蛋白表達(dá)與mel-18蛋白的表達(dá)呈顯著負(fù)關(guān)聯(lián) (r二0.674, p <0.05 )3.討論ezh2和mel-18基因都屬于多梳基因家族中的一員，ezh2基因定位于人 類染色體7q35,參與轉(zhuǎn)錄抑制，調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖和

13、細(xì)胞周期。大量研究表 明其高表達(dá)可促進(jìn)癌細(xì)胞增殖，與惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，曹相玫等研究發(fā) 現(xiàn)ezh2在原發(fā)性肝癌組織中的表達(dá)率顯著高于正常肝組織，隨著原發(fā)性肝癌分 化程度的降低，ezh2陽性表達(dá)的強(qiáng)度和范圍明顯增強(qiáng)。也有研究發(fā)現(xiàn)ezh2在 胃癌中的表達(dá)水平高于正常組織，并認(rèn)ezh2基因可以促進(jìn)胃癌的發(fā)生發(fā)展。 國(guó)外的研究則表明ezh2高表達(dá)的結(jié)直腸癌患者預(yù)后比低表達(dá)患者差5omel-18 基因定位于染色質(zhì)17ql2,與其他多梳基因家族成員一樣，mel-18也參與了胚 胎發(fā)育，干細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的增殖、自我更新和分化過程。目前認(rèn)為mel-18是 一種新的抑癌基因，可能通過抑制cyclin d2活

14、性，阻滯細(xì)胞由g,向s期轉(zhuǎn)化, 導(dǎo)致dna合成受阻，進(jìn)而抑制腫瘤的發(fā)生。田永等研究發(fā)現(xiàn)，mel-18在 大腸癌組織中的陽性表達(dá)率低于癌旁正常大腸黏膜組織，其陽性表達(dá)率隨腫瘤浸 潤(rùn)程度加深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度的降低而下降，甚至出現(xiàn)表達(dá)缺失，提示了 mel-18可能在大腸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了抑制作用，也有研究提示mel-18陰 性表達(dá)的前列腺癌患者生存期更差岡。我們的研究發(fā)現(xiàn)48例食管鱗癌組織中有38例ezh2陽性表達(dá)，陽性率為 79.2% ;而癌旁組織中僅8例表達(dá)，陽性率為16.6%,提示了在食管癌中存在 ezh2基因表達(dá)的增高，從蛋白水平證明了 ezh2基因與食管癌的發(fā)生有關(guān)，同 時(shí)我們發(fā)現(xiàn)

15、癌旁組織中mel-18有40例表達(dá)，陽性率為83.3%,而48例食管鱗 癌組織中僅有9例mel-18陽性表達(dá)，陽性率為18.7%，這也進(jìn)一步提示mel-18 基因具備抑癌基因功能。我們的研究結(jié)果還提示ezh2陽性表達(dá)率與食管鱗癌患者年齡、性別、腫瘤 大小無關(guān)，與組織分化程度有關(guān)，組織分化程度越低，ezh2陽性表達(dá)率越高， 說明檢測(cè)其蛋白表達(dá)對(duì)判斷食管癌的惡性分化程度有一定意義。同時(shí)伴有淋巴結(jié) 轉(zhuǎn)移的患者，陽性表達(dá)率也增高，這表明ezh2蛋白的高表達(dá)促進(jìn)食管癌淋巴結(jié) 轉(zhuǎn)移，預(yù)示著較差的預(yù)后，這與王浩然等刃研究結(jié)果也是一致的。本研究還發(fā)現(xiàn) ezh2與mel-18蛋白在食管癌組織中的表達(dá)呈負(fù)關(guān)聯(lián)，推

16、測(cè)ezh2可能通過某 種調(diào)控機(jī)制或信號(hào)傳導(dǎo)通路抑制mel-18的表達(dá)，從而參與食管癌的進(jìn)展?？傊緦?shí)驗(yàn)表明ezh2可能成為提示食管癌分化程度和轉(zhuǎn)移能力的分子標(biāo) 志物，對(duì)食管癌的早期診斷及治療靶點(diǎn)的選擇具有一定參考價(jià)值。參考文獻(xiàn)1) 明幫春，駱志國(guó)，胡江等，放療聯(lián)合紫杉醇奈達(dá)鉗同期化療治療食管癌 的臨床分析,現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2013,21 (3 ): 559-5622) 李輝，劉媛，龔燕華.腫瘤干細(xì)胞與多梳家族，武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2010,19(9):746-7523) 曹相玫，王映梅，谷雨等，ezh2在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)及與分化和增 殖的關(guān)系 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2013, 21 (3 ): 453

17、-4564) he lj, cai my, xu gl, et al. prognostic significance of overexpression of ezh2 and h3k27me3 proteins in gastric cance匚 asianpac j cancer prev, 2012, 13(7):3173-3178.5) mimofi k, ogawa k, okamoto m，et al. clinical significance of enhancer of zeste homolog 2 expression in colorectal cancer cases. eur j surg oncol. 2005, 31: 376-3806) chun t, rho s b, byun h j> et al. the polycomb groupgene product mel-18 interacts with cyclin d2 and modulates its activity. febs lett, 2005, 579: 52755280.7) 田永，鄒艷芳，徐峰，大腸癌組織中mina53和mel