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文檔簡介
1、食品酶學(xué)復(fù)習(xí)筆記1.酶的特性及其對食品科學(xué)的重要性1. 酶的特性及其對食品科學(xué)的重要性1) 酶的一般特性:酶的催化效率高(比一般反應(yīng)速度快106-1013倍)、酶作用的專一性(鍵專一性、基團專一性、絕對專一性、立體異構(gòu)專一性)、大多數(shù)酶的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)2) 酶對食品科學(xué)的重要性:a.酶對食品加工和保藏的重要性:例如葡萄糖氧化酶作為除氧劑普遍應(yīng)用于食品保鮮及包裝中,延長食品保質(zhì)期。b.酶對食品安全的重要性:利用酶的作用除去食品中的毒素。例如:利用乳糖酶預(yù)先處理乳制品。c.酶對食品營養(yǎng)的重要性:利用酶作用去除食品中的抗?fàn)I養(yǎng)素,提高食品營養(yǎng)價值,例如:谷類中的植酸為抗?fàn)I養(yǎng)因子。d.酶對食品分析的重
2、要性:酶法具有準確、快速、專一性和靈敏性強等特點,其中最大優(yōu)點就是酶的催化專一性強e. 酶與食品生物技術(shù):酶工程的主要研究內(nèi)容是把游離酶固定化,然后直接應(yīng)用于食品生產(chǎn)過程中物質(zhì)的轉(zhuǎn)化。2.酶:催化特定化學(xué)反應(yīng)的蛋白質(zhì)、RNA或其復(fù)合體。是生物催化劑,能通過降低反應(yīng)的活化能加快反應(yīng)速度,但不改變反應(yīng)的平衡點。絕大多數(shù)酶的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)。具有催化效率高、專一性強、作用條件溫和等特點。胞外酶:細胞內(nèi)合成而在細胞外起作用的酶胞內(nèi)酶:在細胞內(nèi)起催化作用的酶,這些酶在細胞內(nèi)常與顆粒體結(jié)合并有著一定的分布。多酶體系:在完整細胞內(nèi)的某一代謝過程中,由幾種不同的酶聯(lián)合組成的一個結(jié)構(gòu)和功能的整體,催化一組連續(xù)的
3、密切相關(guān)的反應(yīng)。同功酶:催化同一化學(xué)反,但由于結(jié)構(gòu)基因不同,因而酶的一級結(jié)構(gòu)、物理化學(xué)性質(zhì)以及其他性質(zhì)有所差別的一組酶。酶活力單位:用來表示酶活力大小的單位,通常用酶量來表示。1個酶活力單位是指在特定條件(25,其它為最適條件)下,在1分鐘內(nèi)能轉(zhuǎn)化1微摩爾底物的酶量,或是轉(zhuǎn)化底物中1微摩爾的有關(guān)基團的酶量。酶原:某些酶在細胞內(nèi)合成或初分泌時沒有活性,這些沒有活性的酶的前身稱為酶原,是不具有生物活性的蛋白質(zhì)。3.酶的發(fā)酵技術(shù)對培養(yǎng)基的要求酶主要有微生物產(chǎn)生。微生物的營養(yǎng)物質(zhì)有六大類要素,即水、碳源、氮源、無機鹽、生長因子和能源。1.碳源:碳素是構(gòu)成菌體成分的主要元素,也是細胞貯藏物質(zhì)和生產(chǎn)各種代
4、謝產(chǎn)物的骨架,還是菌體生命活動的能量的主要來源。2氮源:氮是生物體內(nèi)各種含氮物質(zhì),如氨基酸,蛋白質(zhì),核苷酸,和核酸等的組成部分。3.碳氮比:在微生物酶生長培養(yǎng)基中碳源和氮源的比例是隨生產(chǎn)的酶類,生產(chǎn)菌株的性質(zhì)和培養(yǎng)階段的不同而改變的。4.無機鹽:微生物酶生產(chǎn)和其他微生物產(chǎn)品生產(chǎn)一樣,培養(yǎng)基中需要有磷酸鹽及硫、鉀、鈉、鈣、鎂等元素存在。5.生長因子:微生物還需一些微量的像維生素一類的物質(zhì),才能正常生長發(fā)育,這類物質(zhì)統(tǒng)稱為生長因子(或維生素),其中包括某些氨基酸,維生素,嘌呤或嘧啶等。6. 產(chǎn)酶促進劑:產(chǎn)酶促進劑是指在培養(yǎng)基中添加某種少量物質(zhì),能顯著提高酶的產(chǎn)率,這類物質(zhì)稱為產(chǎn)酶促進劑。4.分離純
5、化酶有哪些常用方法,根據(jù)是什么? 酶的分離純化工作主要是,將酶從雜蛋白中分離出來或者將雜蛋白從酶溶液中除去?,F(xiàn)有的酶分離純化方法都是依據(jù)酶和雜蛋白在性質(zhì)上的差異而建立的。1、根據(jù)分子大小而設(shè)計的方法,如離心分離法、篩膜分離法、凝膠過濾法等。2、根據(jù)溶解度的大小分離的方法,如鹽析法,有機溶劑沉淀法,共沉淀法,選擇性沉淀法,等電點沉淀法。3、按分子所帶正負電荷的多少分離的方法,如離子交換分離法,電泳分離法,聚焦層析法等。4、按穩(wěn)定性差異建立的分離方法,如選擇性熱變性法,選擇性酸堿變性法,選擇性表面變性法等。5、按親和作用的差異建立的分離方法,如親和層析法,親和電泳法。5.酶分子修飾的方法及意義 通
6、過各種方法使酶分子的結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變,從而改變 酶的某些特性和功能的技術(shù)過程稱為酶分子修飾。 酶分子的修飾方法分為化學(xué)法、生物法和物理法?;瘜W(xué)法又可分為金屬離子置換法、肽鏈有限水解法、蛋白質(zhì)側(cè)鏈基團的小分子修飾法等。生物法是通過基因工程的手段改變蛋白質(zhì),即基于核酸水平對蛋白質(zhì)進行改造,利用基因操作技術(shù)對DNA或mRNA進行改造和修飾,以期獲得化學(xué)結(jié)構(gòu)更為合理的蛋白質(zhì)。物理法的特點是不改變酶的組成和基團,酶分子的共價鍵不發(fā)生變化。6.酶的動力學(xué)研究包括哪些內(nèi)容?以L-B圖式表示競爭性抑制、非競爭性抑制及反競爭性抑制的區(qū)別酶的動力學(xué)學(xué)說:酶動力學(xué)主要是研究各種因素對酶催化反應(yīng)速度的影響,這些因素包
7、括底物濃度、酶濃度、產(chǎn)物、pH、溫度、抑制劑和激活劑等。對反應(yīng)速度的影響,從而找到最有利的反應(yīng)條件從而提高酶催化反應(yīng)的效率以及了解酶在代謝過程中的作用和某些活性物質(zhì)的作用機制。競爭性抑制:Vmax不變,Km變大 非競爭性抑制:Km值不變,Vmax變小反競爭性抑制: Km及Vmax都變小7.可逆抑制和不可逆抑制的區(qū)別可逆的作用:抑制劑與酶的必須基團以非共價鍵的形式結(jié)合,是能用透析和過濾的物理方法去除抑制劑,使酶復(fù)活。抑制作用是可逆的。不可逆的抑制作用:抑制劑與酶的必須基團以共價鍵的形式結(jié)合,是不能用透析和過濾的物理方法去除抑制劑,使酶復(fù)活。抑制作用是不可逆的。在酶活力的系統(tǒng)中,不加抑制劑以反應(yīng)初
8、速度對酶濃度作圖,得到一條過原點的直線,加不可逆抑制劑,得到原點向右的直線。加可逆抑制劑,得到是通過原點,但斜率低于無抑制劑的。如果在不同抑制劑濃度下,對每個抑制劑濃度都作一條酶促反應(yīng)初速度與酶濃度關(guān)系曲線,不可逆抑制劑可以得到一組不通過原點的平行線,而可逆抑制劑得到一組通過原點但斜率不同的直線。8.固定化酶的優(yōu)點及其應(yīng)用實例優(yōu)點:1、固定化酶在較長時間內(nèi)可反復(fù)利用,使酶的使用效率提高,使用成本降低。2、固定化酶極易與反應(yīng)體系分離,產(chǎn)物溶液中沒有酶的殘留,簡化了提純工藝,而且產(chǎn)品吸收率高,質(zhì)量好3、在多數(shù)情況下,酶經(jīng)固定后,穩(wěn)定性提高4、具有一定的機械強度,可以用攪拌或裝柱的方式作用于底物溶液
9、,便于酶催化反應(yīng)的自動化和連續(xù)化操作。5、固定化酶的催化反應(yīng)更易控制。6、與游離酶相比,更適于多酶體系使用,不僅可利用多酶體系中的協(xié)同效應(yīng)使酶催化反應(yīng)速度提高,而且還可以控制反應(yīng)按一定速度進行。應(yīng)用實例:1,采用固定化葡萄糖異構(gòu)酶將葡萄糖轉(zhuǎn)化為果糖,制作成果葡糖漿。2用固定化黑曲霉乳糖酶處理牛奶生產(chǎn)脫乳糖牛奶。等等詳見書P1119.酶被固定化后的理化性質(zhì)的變化,對工業(yè)應(yīng)用的利弊?酶的活力在多數(shù)情況下比天然酶的活力低;個別情況下,會升高,主要由于固定化后的抗抑能力提高。固定化后酶的穩(wěn)定性一般比游離酶提高的多。固定化酶的反應(yīng)特性:(1)底物的特異性與底物分子量的大小有一定關(guān)系。在分子量大的時候發(fā)生
10、反應(yīng),分子量小的時候一般不發(fā)生反應(yīng)。(2)反應(yīng)的最適ph發(fā)生偏移,一般來時帶負電荷的載體制備的固定化酶偏高,帶正電荷的載體制備的固定化酶偏低。(3)最適反應(yīng)溫度偏高(4)固定化酶的米氏常數(shù)增大(5)最大的反應(yīng)速度與游離酶大多是相同的。只是一半優(yōu)點:(1)無需進行酶的分離和純化,減少酶的活力損失,減小成本。(2)可以進行多酶反應(yīng),且不需要添加輔助因子,不僅可以單一的酶發(fā)揮作用,而且可以利用所含的復(fù)合酶系完成一系列的催化反應(yīng)。(3)保持了酶的原始狀態(tài),穩(wěn)定性更高,對污染的抵抗力更好。4)細胞生長停滯時間短,細胞多反應(yīng)快。缺點:1)必須保持菌體的完整,防止自溶。2)必須抑制細胞內(nèi)蛋白酶對目的酶的分解
11、。3)細胞內(nèi)酶的存在影響副產(chǎn)物。4)載體細胞膜或細胞壁造成底物滲透和底物的障礙。10.比較淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、淀粉酶、異淀粉酶的作用位點(即水解鍵)及其產(chǎn)物?以支鏈淀粉為原料,制造果葡萄漿,需要哪些酶參加反應(yīng)?作用位點水解產(chǎn)物淀粉酶或液化酶不規(guī)則的分解淀粉、糖原類1,4糖苷鍵直鏈淀粉:麥芽糖、少量葡萄糖支鏈淀粉:麥芽糖、少量葡萄糖、異麥芽糖葡萄糖淀粉酶(糖化酶)從非還原性末端以葡萄糖為單位順次分解淀粉,糖原類的1,4糖苷鍵1,3糖苷鍵、1,6糖苷鍵(速度慢)以直鏈淀粉為底物時,產(chǎn)物葡萄糖以支鏈淀粉為底物時,不完全,有葡萄糖,可能還有-限制糊精,淀粉酶從非還原性末端以麥芽糖為單位,鳳姐淀粉糖原
12、類的1,4糖苷鍵直鏈淀粉:70%90%麥芽糖 支鏈淀粉:50%60%麥芽糖、極限糊精異淀粉酶1,6糖苷鍵麥芽糖,直鏈淀粉參與催化的酶有:淀粉酶、異淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、葡萄糖異構(gòu)酶11.果膠酶屬于哪類酶?其作用位點及其產(chǎn)物,在食品工業(yè)中如何合理和有效使用果膠酶果膠酶與纖維素酶相類似,是一類復(fù)合酶,包含多種組分,大致分為果膠水解酶、果膠裂解酶、果膠酯酶和原果膠酶等,它是指能夠分解果膠物質(zhì)的各種酶的總稱。名稱作用位點水解產(chǎn)物聚半乳糖醛酸酶PG半乳糖醛酸中-1,4糖苷鍵(1)分子內(nèi)部無規(guī)則的切斷-1,4糖苷鍵,生成相對分子質(zhì)量較小的寡聚半乳糖醛酸(2)從分子末端逐個切斷-1,4糖苷鍵,生成半乳糖醛酸
13、聚甲基半乳糖醛酸裂解酶(PMGL)(果膠裂解酶)果膠中分子中-1,4糖苷鍵(1)隨即切斷-1,4糖苷鍵,生成相對分子質(zhì)量較小的聚甲基半乳糖醛酸(2)從分子末端逐個切斷-1,4糖苷鍵,生成具有不飽和鍵的甲基半乳糖醛酸聚半乳糖醛酸裂解酶(果膠酸裂解酶)PGL貼近游離羧基的-1,4糖苷鍵半乳糖醛酸二聚體果膠酯酶(PE)甲酯中酯鍵果膠酸和甲醇作用位點:PG -1,4糖苷鍵、PMGL裂解貼近甲酯基的糖苷鍵、PGL裂解貼近游離羧基的糖苷鍵。果膠酶在食品工業(yè)中的應(yīng)用:果膠物質(zhì)存在于水果和蔬菜中,它的變化對于水果和蔬菜的結(jié)構(gòu)有重要影響。果膠酶能講解果膠物質(zhì),因而在食品加工中和保藏中起重要的作用。微生物果膠酶市
14、食品工業(yè)中使用量最大的制酶劑之一,主要應(yīng)用與果汁的萃取、澄清以及果酒釀造。在工藝過程中,添加果膠酶助劑能夠提高出汁率,加速果汁澄清,降低成本。同時,由于果膠酶降解果膠質(zhì),產(chǎn)品更易于吸收和儲存。12.簡述酶法低乳糖牛乳的生產(chǎn)工藝生鮮牛乳 檢驗牛乳中乳糖含量 85保持15秒 冷卻 加乳糖酶 攪拌 保持一定時間 取樣,檢驗水解后牛乳中乳糖含量 均質(zhì) 高溫滅菌 包裝 保 溫 出廠乳糖是哺乳動物乳汁中特有的糖類,牛乳中含乳糖6%-7%。由于乳糖不易發(fā)酵,溶解度低,在冷凍制品中易形成結(jié)晶而影響食品的加工性能。液態(tài)牛奶在通過管道進行超高溫瞬時殺菌時,乳糖的存在會產(chǎn)生膠狀物堵塞管道。如果在牛乳中加入乳糖酶,則
15、可使乳糖水解生成葡萄糖和半乳糖,不僅大大改善加工性能,而且更有利于乳酸發(fā)酵生產(chǎn)酸奶,克服“乳糖不耐癥”,提高乳糖消化吸收率,改善制品口味。此外,常作為廢水排除的乳清經(jīng)乳糖酶處理后,可供食用或作為飼料。13.蛋白酶分類?蛋白酶水解生產(chǎn)水解蛋白產(chǎn)生苦味的來源?分類:l按來源分:植物蛋白酶(菠蘿、木瓜、無花果)、動物蛋白酶(胃、胰蛋白酶、凝乳酶)、微生物蛋白酶(3942棲土曲霉蛋白酶、放線菌蛋白酶)2按PH值分:酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶3對底物作用方式分:內(nèi)肽酶(內(nèi)切酶)、外肽酶:(羧肽酶、氨肽酶)4按活性中心分:絲氨酸蛋白酶、巰基蛋白酶、金屬蛋白酶、羧基蛋白酶產(chǎn)生苦味的來源:水解蛋白酶的
16、苦味和蛋白質(zhì)原有的氨基酸組成有關(guān)。特別是蛋白質(zhì)中的疏水性氨基酸是導(dǎo)致蛋 白質(zhì)經(jīng)水解后產(chǎn)生苦肽的重要原因。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)處于天然狀態(tài)時,這些氨基酸埋藏在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的內(nèi)部,因而對蛋白質(zhì)的味道不會產(chǎn)生明顯的影響。在酶水解過程中,小肽的數(shù)量將增加,從而暴露了 這些疏水性氨基酸,當(dāng)它們同味蕾相作用時就產(chǎn)生了苦味。如果采取有控制的酶水解,使蛋白質(zhì)的水解反應(yīng)停止在某一個階段,使肽鍵具有足夠的長度將 疏水性氨基酸埋藏在它的結(jié)構(gòu)內(nèi)部,就能減少水解蛋白質(zhì)的苦味14.超氧化物歧化酶(SOD)的特性及作用原理特性:超氧化物歧化酶是一種金屬蛋白,他對熱表現(xiàn)出異常的穩(wěn)定性。PH的改變會引起酶蛋白與金屬輔因子結(jié)合狀態(tài)的改變但總體
17、來說,SOD對PH并不敏感,通常在PH5.3-9.5范圍內(nèi)對酶的活性影響不大。SOD對氰化物的敏感性不同,Cu-Zn-SOD對氰化物敏感,Mn-SOD卻抗氰化物。Cu-Zn-SOD中金屬輔因子的作用不同,Zn僅與酶分子的結(jié)構(gòu)有關(guān),而與催化活性無關(guān),而Cu卻與酶的催化活性有關(guān)。 SOD具有變性劑與還原劑的特性。電離輻射會產(chǎn)生超氧陰離子,SOD能清楚超氧陰離子,所以SOD具有抗輻射作用。作用原理:SOD是特殊的氧自由基清除劑。清除基體代謝過程中所產(chǎn)生的過量O2-,延緩由于自由基侵害而出現(xiàn)的衰老現(xiàn)象。如皮膚衰老色素沉淀,提高身體抵抗力等。SOD具有明顯的防曬效果。在電離輻射的間接作用下,生物體內(nèi)水分
18、子經(jīng)激發(fā)與電離后產(chǎn)生了包括超氧陰離子O2-在內(nèi)的自由基,二SOD是氧自由基專一清楚劑,在照射前供給外源性SOD,可有抗輻射效果。SOD有明顯的抗炎效果?;钚匝鯎p害時引起炎癥的主要原因,SOD是氧自由基清除劑,故SOD可作為抗炎藥。15.過氧化物酶作用機理:超氧化物歧化酶的作用機制:催化超氧陰離子的歧化反應(yīng)。H2O2+AH2Pod2H2O+A食品工業(yè)中的應(yīng)用:1:POD是果蔬成熟和衰老的指標(biāo),如蘋果氣調(diào)貯藏中,POD出現(xiàn)兩個峰值,一個在呼吸轉(zhuǎn)折(成熟),一個在衰老開始2:POD的活動與果蔬產(chǎn)品,特別是非酸性蔬菜在保藏期間形成的不良風(fēng)味有關(guān)3:POD屬于最耐熱的酶類,是果蔬加工中常被當(dāng)作熱處理是否
19、充分的指標(biāo)(速凍蔬菜)熱燙的灌裝或冷凍蔬菜在保藏期間產(chǎn)生不良風(fēng)味的原因:熱燙不徹底,POD殘留在被保藏食品中,在冰凍保藏后,質(zhì)量比酶完全失活時要高在熱失活中,POD聚集體,血紅素基暴露,導(dǎo)致非酶催化脂肪氧化16、多酚氧化酶作用的底物有哪些?如何利用和控制酶促褐變?作用底物有兒茶素、3,4二羥基肉桂酸酯、3,4二羥基苯丙氨酸和酪氨酸。有利:紅茶生產(chǎn)工藝; 有害:新鮮、冷凍、干制和罐藏產(chǎn)品的褐變。控制方法:(1)隔絕氧氣;(2)控制溫度;(3)控制PH;(4)加入抑制劑(抗壞血酸、檸檬酸、EDTA、果膠、氰化物)。1)、抑制劑對酶的抑制。利用CO、氰化物、銅鋅靈、二硫基丙醇、抗壞血酸及檸檬酸、苯甲
20、酸等抑制劑抑制酶的活性,因為多酚氧化酶是以Cu2+作為輔基的金屬蛋白,以上試劑對Cu2+|具有螯合作用。2)、與酶催化生成的反應(yīng)產(chǎn)物作用。同臨二酚氧化產(chǎn)物作用的還原劑,如抗壞血酸,SO2,偏重亞硫酸鹽。用醌偶合劑與醌作用,生成穩(wěn)定的無色化合物,如半胱氨酸,谷胱甘肽,SO2,偏重亞硫酸鹽。3)、消除酶作用的底物,與酚類底物作用的化合物有PVP,PVP能與酚類化合物強烈的發(fā)生締合作用。4)、熱燙處理酶,使酶失活。17、葡萄糖氧化酶對底物氧化形式在食品加工中應(yīng)用。(一)葡萄糖氧化酶的催化反應(yīng)三種形式:1.在沒有過氧化氫酶存在下,1mol葡萄糖氧化酶氧化時消耗1mol氧。2.在有過氧化氫酶存在下,1m
21、ol葡萄糖氧化酶氧化時消耗0.5mol氧。3.在有乙醇和過氧化氫酶存在下,過氧化氫同時被用于乙醇的氧化作用,此時,1mol分子葡萄糖氧化酶氧化時消耗1mol氧。(二)應(yīng)用包括四個方面:一是去葡萄糖,二是脫氧,三是殺菌,四是測定葡萄糖含量。1. 蛋類食品的脫糖保鮮葡萄糖氧化酶最重要的應(yīng)用之一就是防止美拉德反應(yīng),采用葡萄糖氧化酶脫糖后的蛋制品基本上不會發(fā)生褐變。2. 防止食品氧化葡萄糖氧化酶是一種理想的除氧保鮮劑,可有效防止食品因氧化而引起的質(zhì)量下降和變質(zhì)。另外葡萄糖氧化酶也可以有效地防止罐裝容器的氧化作用。(1)干鮮食品脫氧(2)酒類脫氧(3)飲料脫氧保鮮(4)蝦肉食品保鮮(5)穩(wěn)定食品乳狀液的
22、質(zhì)量3. 殺菌由于葡萄糖氧化酶能去除氧,所以能防止好氣菌的生長繁殖;同時由于產(chǎn)生過氧化氫,也可起到殺菌的作用。因此葡萄糖氧化酶可用于在特殊情況下防止微生物的繁殖。4. 葡萄糖氧化酶在食品分析中的作用因葡萄糖氧化酶能專一氧化葡萄糖,故可用于定量測定各種食品中的葡萄糖含量。葡萄糖氧化酶在食品加工中應(yīng)用還包括:改變轉(zhuǎn)化糖中葡萄糖和果糖的比例;降低玉米糖漿中葡萄糖的含量;加入到面粉中起催熟作用;加入到牛乳中起凝結(jié)作用;穩(wěn)定柑桔飲料及濃縮汁的質(zhì)量;保護肉制品及干酪的顏色等18.脂肪氧合酶作用條件及對食品質(zhì)量的影響。條件:專一催化含順,順-1,4-戊二烯的多不飽和脂肪酸和酯對食品質(zhì)量的影響:脂肪氧合酶的作用對焙烤食品的影響(生成具有芳香味的唐吉化合物,從而改進面粉的顏色和烘烤質(zhì)量)脂肪氧合酶的作用對于食品顏色、風(fēng)味和營養(yǎng)的影響(脂肪氧合酶直接間接的和肉類酸敗及高蛋白質(zhì)食品的不良風(fēng)味有關(guān)。對食品營養(yǎng)的影響主要是:它作用的產(chǎn)物對維生素A及維生素A原的破壞;它的作用減少了食品中必須不飽和脂肪酸的含量;酶作用的產(chǎn)物同蛋白質(zhì)的必需氨基酸作用,從而降低了蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價值及功能性質(zhì))19.舉例說明酶在淀粉類食品生產(chǎn)中的應(yīng)用酶在制糖工業(yè)中的應(yīng)用酶在焙烤類食品中的應(yīng)用酶在面條加工中的應(yīng)用酶在啤酒生產(chǎn)加工中的應(yīng)用以啤酒的生產(chǎn)工藝為例:(蛋白酶,-淀粉酶,糖化酶,茁酶多糖酶) 發(fā)芽的大麥磨碎制麥芽漿加啤酒
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