1200培訓(xùn)手冊

1、Agilent 1200 LC（中文版 B01.01）現(xiàn)場培訓(xùn)教材安捷倫科技有限公司 生命科學(xué)與化學(xué)分析儀器部培訓(xùn)目的: 基本了解1200LC硬件操作。 掌握化學(xué)工作站的開機，關(guān)機，參數(shù)設(shè)定學(xué)會數(shù)據(jù)采集數(shù)據(jù)分析的基本操作。培訓(xùn)準(zhǔn)備：1、儀器設(shè)備：Agile nt 1200LC G1310A :（單元泵）；G1312A二元泵）；G1311A四元泵）。 G1313A（標(biāo)準(zhǔn)型自動進(jìn)樣器）。 G1316A（柱溫箱）。 G1314A（VW 檢測器）。 G1362A（示差檢測器）。 色譜柱：Eclipse XDB-C18 150 x 4.6 mm, 5um colu mn P/N 993967-9022、

2、溶劑準(zhǔn)備: 色譜級純或優(yōu)級純乙腈或甲醇。 二次蒸餾水基本操作步驟:（一）、開機：1打開計算機進(jìn)入中文Win dows X畫面,并運行CAG Bootp Serve程序。2、打開1200 LC各模塊電源。3、 待各模塊自檢完成后，雙擊“nstrument 1 Online ”圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動與1200LC通訊，進(jìn)入的工作站畫面如下所示。方活on 序列伍，啊明理J 中晰 4T fliJWjQJD手陽圣*n；品于拎Ra|al_* F 曲 口前我i =1 * 1I定hgu # w-ERTJP.W淌出方攻扌百口機士 結(jié)鼻舛序寸攻riiTR|l|F3>44kr-V j疔弓十 菴營話仃| F ET

3、fl富療 序刑汕為十 止j |Fi H-F"T lil L I i4、從“視圖”菜單中選擇“方法和運行控制”畫面，點擊“視圖”菜單中的“顯示頂部工具欄”，“顯示 狀態(tài)工具欄”，“系統(tǒng)視圖”，“樣品視圖”，使其命令前有“V”標(biāo)志，來調(diào)用所需的界面。5、把流動相放入溶劑瓶中。6、打開沖洗閥。7、點擊“泵”圖標(biāo)，點擊“設(shè)置泵”選項，進(jìn)入泵編輯畫面。8 、設(shè)流速：5ml/min，點擊“確定”。9、點擊“泵”圖標(biāo)，點擊“控制”選項，選中“啟動”，點擊“確定”，貝療統(tǒng)開始沖洗，直到管線 內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止切換通道繼續(xù)沖洗，直到所有要用通道無氣泡為止。10、 點擊“泵”圖標(biāo)，點擊“控

4、制”選項，選中“關(guān)閉”，點擊“確定”關(guān)泵，關(guān)閉沖洗閥。11、點擊“泵”圖標(biāo)，點擊“設(shè)置泵選項”，設(shè)流速：1.0ml/min。12、點擊泵下面的瓶圖標(biāo)，如下圖所示（以單元泵為例）輸入溶劑的實際體積和瓶體積。也可輸入停泵的體積，點擊“確定”骨幫肋0D（二）數(shù)據(jù)米集方法編輯:1、開始編輯完整方法： 從“方法”菜單中選擇“編輯完整方法”項，如下圖所示選中除數(shù)據(jù)分析”外的三項, 點擊“確定”，進(jìn)入下一畫面。2、方法信息： 在“方法注釋”中加入方法的信息（如：測試方法） 點擊“確定”，進(jìn)入下一畫面?？?AciLcni-t才注和運疔JS制l*JEEK LC 片DEF LT. 5方?jīng)i:BEF_LC.上次運行

5、!£l*J序列：DBF_LC.SLOG確定HP泊iC ' d .!星 >|Q OE fr*»°°BO70 二BOM 40 ：3C120 IO因 Q O|匸曲SJ停止町問 后運冇旳間&ft丸壓：?T1-1溫廉I/* it .inVW皿號25.0254 :3、泵參數(shù)設(shè)定：（以四元泵為例） 在“流速”處輸入流量如1ml/min,在“溶劑B”處輸入80.0,（A=100-B-C-D）,也可“插入” 一行“時間表”，編輯梯度。在“壓力限”處輸入柱子的最大耐高壓，以保護(hù)柱子。點擊“確定”，進(jìn)入下一畫面。4、自動進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定：（以標(biāo)準(zhǔn)G1313

6、為例） 選擇合適的進(jìn)樣方式如圖所示，進(jìn)樣體積5.0ul ,洗瓶位置為6號?！皹?biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣”- 只能輸入進(jìn)樣體積，此方式無洗針功能?！跋瘁樳M(jìn)樣”-可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置，此方式 針從樣品瓶抽完樣品后，會在洗瓶中洗針。“使用進(jìn)樣器程序”-可以點擊“編輯”按鈕進(jìn)行進(jìn) 樣程序編輯點擊進(jìn)“確定”，進(jìn)入下一畫面。5、柱溫箱參數(shù)設(shè)定: 在“溫度”下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫度如：40度。并選中它，點擊“更多”鍵,如圖所示,選中“與左側(cè)相同”，使柱溫箱的溫度左右一致 點擊“確定”，進(jìn)入下一畫面6、VW檢測器參數(shù)設(shè)定：在“波長”下方的空白處輸入所需的檢測波長如254nm,在“峰寬(響應(yīng)時間)”下方點擊下拉 式箭頭

7、 選擇合適的響應(yīng)時間 如0.1min (2s)。 在“時間表”中可以“插入” 一行，輸入隨時間切換的波長，如1min ，波長=300nm點擊“確 定”，進(jìn)入下一畫面。7、RID檢測器參數(shù)設(shè)定： 色譜條件：進(jìn)樣體積:20ul 。光學(xué)單元溫度：“關(guān)閉”。極性：“正極性”。峰寬（響應(yīng)時間）:4s 。 如圖所示：“光學(xué)部件溫度”-若環(huán)境溫度控制在±2C,設(shè)定為“關(guān)閉”,若環(huán)境溫度不穩(wěn)定則設(shè)定 光學(xué)單元溫度為高于環(huán)境溫度5匱以防樣品在池中沉淀?！胺鍖挘憫?yīng)時間）”-大多數(shù)分析設(shè)為“ 4s” , 只有在高速分析下設(shè)為更短?！胺治龊笞詣友h(huán)”-在不進(jìn)行分析時可以讓流動相循環(huán)，節(jié)省流動相，檢測 器連

8、續(xù)運行，可隨時投入使用。 * 點擊RID圖標(biāo)，選擇RID Control : Heater設(shè)為On若要循環(huán)流動相,必須將“Recycling Valve” 設(shè)為ON手動purge參比池，將其設(shè)為On并輸入Purge時間。迪 9農(nóng) m-萬 fS fl-lili URTD :lii號 -mkann-t 1光學(xué)至件ifiELELUBd冋1¥吐時間（£*|35.0 劊 P盡正極性SJ 廣盤極性迥）纂蓉ilm后話行BJHIE-關(guān)組目rt| 50曠1礦3三| nRIU分折后 目動涮環(huán)卑寬卩冋應(yīng)時間Nfe保殍時間喪LL時阿«»|> D2min |'4廠二

9、機營T佰號L光學(xué)部舛溫度（II|確定1Q |職相宿勒（H|ii-WAHI |坦如白Iy如1二制吒L披性jyL半価后號（B）iKiFn另折1ST 目動刪呼冷廿.口i廠oj目如磁洛疣時間（Hl|3.00i峙站時間已| 2 GOrm-iSffitt5. DD£5. 0!. £00停止時創(chuàng)D in a xi,WD悒號254后運行時i町. VI 3. £1.扎100.0%繪大莊力400b«rM J-JE 力:DhrC： >! GB fra*irj在“運行時選項表”中選中“數(shù)據(jù)采集”，點擊“確定”i 運余畑to：；聞山二畳產(chǎn)立皿朮.止話_亠立蚌I巧JS行拄刪0

10、=0儀BiCO JT怯(NO 住劌CS) ISIESCVD 中就 g 劑助ODZT俵圧"酒項SSS 3DHF.LZ-. Ml±l運療力播亟|圈曰I冋岡嗣匹S1F_UC. Sw數(shù)is ；宋摞回l瞇!握愛fOfitil 目定趙的救珞出 析宏to IL運行后尙®應(yīng)咀DEFAULT. £匚：.d«AL 韜方菇和數(shù)跖炸存在一遠(yuǎn)兇硝垣 1卒側(cè) |i世肋如n 口ZO-|lu聲毆溫便:修止時問 后話行時間A：»KJ£ 力 母小伍力jdPl隠 JOt25.CmX/mi nrnin¥WB rtr號；EMr*i n*b«b-v

11、9、 點擊“方法”菜單，選中“方法另存為”，輸入一方法名，如“測試”，點擊“確定”10 從菜單“視圖”中選中“在線信號”，選中“信號窗口 1” ,然后點擊“改變”鈕,將所要繪圖的信號移到右邊的框中，點擊“確定”。(如同時檢測二個信號，則重復(fù)10,選中“信號窗口 2”。觀圖過中斷®幫助* 1234方怯和運行控制數(shù)據(jù)分析報吉版面設(shè)計 診斷窗輯信號圖畜可選信號(處選葩信部)"顯不.帀部工具欄(T)"顯示伏態(tài)工具欄$)內(nèi)VDC: 254 rm 處忸寺比伍號WD B:S4rfn處的來用歩出光梳正白柱盅蓿;遍度潔)柱溫蓿;逼度偌E)單元泵;逋遼A: 2S4 nrm坯的吸光度啟

12、N兌機處理副本00 改變訪問權(quán)限00.在線言號(0)信號窗口 1(1)7樣品觀圉0)*丟統(tǒng)觀圉(I) 儀器實際值(A) VWD掃描(N)信號窗口 2C2)-®nX 軸范園（0： i# ITi-|VWD A： 254 m EtMXlS類型；實測值 y軸范圉帕:iooo rjmAU化學(xué)工作站狀態(tài)0J)*命綠廳(C)工作日志(L壬二全單擊改變編輯信號圖譜”窗口，進(jìn)而選擇0 , 11所需的譜圖信號。鍵，即可彈出右側(cè)的憔分|濮器 廠昱二罐廿收賓臥記方1'舌設(shè)直廠使用才法設(shè)萱應(yīng)用于方法P ¥釉目動闊蹈閔碗埶巾匸需HftI11、從“運行控制”菜單中選擇“樣品信息”選項，如下圖所示

13、，輸入操作者名稱，如“安 裝工程師”；在“數(shù)據(jù)文件”中選擇“手動”或“前綴/計數(shù)器”。立件活肓揑制儀甜厲)方潔則 JrFU&)中斷ffiat) rw)D1FAULT. D:.抵址、141盛蠻：ml/minminVWD愷號milsXZ5. 254驗收標(biāo)拝aaarlH)確定 |取泊輛勒牡)|B畫星團(tuán)血MffiH Orr 品 set(sif&ffi cci：1視有警v就空口運荷林品書煩itn赴收転徉祥品盤邑lo并枳因子UJ： T內(nèi)標(biāo)av.y0秤秤因子(！!) 注釋m*Y £i fsJEl = XnirL e.xu.0xbI 1oorlrlsMIorln口 -2 - - O

14、4 s a O o 1齡據(jù)文件(QI燈 苑圾蟄甜1歸廠 乎動血!)向送ibn子目錄覽t廠E& 徑： E:Ckbtm221DATA拱作番址a (fit |守篠工蔣晞冉止時間 后運行時問A儀犬JE力SH-JH 力區(qū)別： 手動-每次做樣之前必須給出新名字,否則儀器會將上次的數(shù)據(jù)覆蓋掉。Pr 在 前綴/計數(shù)器-“前綴”框中輸入前綴，在“計數(shù)器”框中輸入計數(shù)器的起始位，儀器會自 動命名，如vwd數(shù)據(jù)0001, vwd數(shù)據(jù)0002 。12、點擊“確定”，從“儀器”菜單選擇“系統(tǒng)開啟”。13 等儀器準(zhǔn)備好，基線平穩(wěn)，從“運行控制”菜單中選擇“運行方法”，進(jìn)樣。(若無自 動進(jìn)樣器，則基線平穩(wěn)后，進(jìn)樣并

15、搬動手動進(jìn)樣閥，啟動運行。)(DAD, VW色譜圖如下所示：wJI國遇方注|ii5-CnD2QOC) 3t5.n CRJ 批如:理 CB) iffiEE m 中呀 UO Ufffth w|-| liEF_LC. MJ門的血L臥內(nèi)|pgFim. uL豐加並烽標(biāo)注R雀毎類曲廠化舍換茗稱0 n?峙站止w（i）標(biāo)注乎偉手侔屯櫛：Arial 字萍大小：&-RW腎忻escaga號列siflffl fs i Ina： I e uuftEil 13、做譜圖優(yōu)化:從“圖形”菜單中選擇“信號選項”，如下圖所示。從“范圍”中選擇“滿量 程”或“自動量程”及合適的時間范圍或選擇“自定義量程”調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行，直

16、到圖的 比例合適為止。點擊“確定”。文坤呂哩C： . . c!hL»（三）數(shù)據(jù)分析方法編輯:1、從“視圖”菜單中，點擊“數(shù)據(jù)分析”進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。2、從“文件”菜單選擇“調(diào)用信號”，選中您的數(shù)據(jù)文件名，如下圖所示。點擊“確 定”，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。立件佰息川國畫屈任Z1初始初賠I確走I 芒梢耶購IF面枚294 ?文蚌0 運廳婭慟血 儀器 方透00 序列 視00 W 中斷 刑助噸1005心倚1飛0050103 0 ODSonm.D 05-mQSD 0050106.D QOS-0201 D|啟動|蕪閉2G0S176T104.9U.U44H0.Z2329.9wa0.051S0.70728.5

17、29D.D36EI 7.妙n ZZ1H0 57國pCT_LC辛|顯示細(xì)蘿A力jmi：曲hi顯丞13 m： |«asu：s十l單獨哪城w.匚h曰曲5曲口"mln廣目宦私At程CLU l 口功;ajacsj-T-aWSW?消和肋凹網(wǎng)皓|LC®r 謹(jǐn)禪it- 諫迓： 掙止時問. 后話:行時間.A： fltKJE 力： 鍛小莊力：0.2000.000.00 100.0 -100Q對蘭有ifl*號eA.AdWadaIS LHEM32& 1IS DATA & DEMQ Pl HTM"3KL 蟲度itl/min nin VWD 值號：?SWMEH On

18、去和辻訂控制國"盜| s|£ “，"電舐栩色左般 CK機） 方法和仏和理口4、積分： 從“積分”菜單中選擇“積分事件”選項，如下圖所示。選擇合適的斜率靈敏度” ，“峰寬”，“最小峰面積”，“最小峰高”。 從“積分”菜單中選擇“積分”選項，則數(shù)據(jù)被積分。 如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。 點擊左邊“V”圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法。EKS-aiM.XI|lU扎4 Xar-MD, 300 *J童時叩 SJW (G)転 ffi»(H.：i扌irn理如 WfflnfJ心曲耐 »«ti tH從-宅Ir|I -1<-| .

19、 |-v | ,r I： |i|.|k-1P1筑 1旳.£StftNEJM%*WFMaoa品仲吃砒卡豪PFUanH&長維/NLI3100玨站!躍IF4*WttMOODIR甘柑AJnjtSftT舉件（I!5伽0 055*1ClFFf問機対事ft廉苗111747妙7i£h aWEo ra21為沁電HC&iii0 Ki732SE5i?e a2CBD*17 W45 637251衛(wèi)1C90B7時問5、打印報告:從“報告”菜單中選擇“設(shè)定報告”選項，進(jìn)入如下圖所示畫面。點擊“定量結(jié)果”框中“計算”右側(cè)的黑三角，選中“面積百分比”其它選項不變點擊“確定”DAJDB 氣,

20、Si <=ES4J1 Fezje 'I Flia CrBfi lJR吉缶批址理楓田 tyj *斷 g - frrRlj 04.1OOE-OiOi H|J| 嚴(yán)P.LC 13國昇三1 A丄1匚二IAa 111-壬_ II 口“叮藥_ |定JIL姑朋胞II【證II璨曰赫1戯總卿Ltf 攣 jyTXTL .EMFLlIL.DirjjQiL .C5Vd| ILg兇r丄i竝于百另比選jdrii+H誹列方式：!«XflKiAmSU.63旳_眼曽格式： 而莎菇7廠祥品W晝示在暉如（D 污加邑世團(tuán)轍LU兇而潘加ts対義耀胡壞iB r霸加q話坤un和農(nóng)未校正繚的jp.骨犧式 L童獨推齒&

21、amp;與校正聲一圮抿肯eiSffiwias口楓冋fli L摘內(nèi)山| 廠 i&priHiriefmi廠二IL不報皆時伺-0同阪5畸口 I0.0460.72929 963D 051Q 7U735 5?90.09GS0 C4 41 7 '?34 22130.6725 554 從“報告”菜單中選擇“打印報告”，則報告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機上, 則點擊“報告”底部的“打印”鈕。（四） 、關(guān)機: 關(guān)機前，先關(guān)燈，用相應(yīng)的溶劑充分沖洗系統(tǒng)。 退出化學(xué)工作站，依提示關(guān)泵，及其它窗口，關(guān)閉計算機 關(guān)閉Agile nt 1200各模塊電源開關(guān)。（五） 、Agilent 1200 L

22、C 維護(hù)保養(yǎng)：1、色譜柱長時間不用，存放時，柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑，兩端封死（如乙腈/甲醇適于反相色譜柱，正相色 譜柱用相應(yīng)的有機相）。2、手動進(jìn)樣器，當(dāng)使用緩沖溶液時，要用水沖洗進(jìn)樣口。3、流動相使用前必須過濾，不要使用多日存放的蒸餾水（易長菌。）4、帶seal-wash的1200，要配制90%水+10?異丙醇，開啟seal-wash清洗泵，溶劑不能干涸。5、注意事項見說明書，或由現(xiàn)場工程師介紹。* 注意：1、 本教材僅適用于現(xiàn)場工程師培訓(xùn)講解參考之用，內(nèi)容為工作站 現(xiàn)場培訓(xùn)的一般要求，請根據(jù)用戶的儀器配置及現(xiàn)場用戶的需 求進(jìn)行相應(yīng)的培訓(xùn)內(nèi)容增刪。2、 安捷倫公司對本教材可能存在的錯誤及其后果不承擔(dān)

23、任何法律 責(zé)任，我們適時推出新版本的培訓(xùn)教材，恕不另行通知。維護(hù)知識問答1、 為什么溶劑和樣品要過濾? 溶劑和樣品過濾非常重要，它會對色譜柱、儀器起到保護(hù)作用，消除由于污染對分析結(jié)果的影響。 色譜柱：由于填料顆粒很細(xì)，色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會使色譜柱和毛細(xì)管容易堵塞。 儀器：溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會增加進(jìn)樣閥的堵塞和磨損，同時也會增加泵頭內(nèi)的藍(lán)寶石活塞桿和活塞的 磨損。2、為什么HPLC用緩沖鹽時要加在線Seal-wash選項？HPLC 用緩沖鹽時, 由于泵頭內(nèi)的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現(xiàn)象, 析出的細(xì)小鹽粒非常堅硬, 它附著在藍(lán)寶 石活塞桿上,隨著藍(lán)寶石活塞桿的往復(fù)運動 ,容易

24、產(chǎn)生劃痕 ,并磨損密封墊,造成漏液等故障現(xiàn)象。在線 Seal-wash選項能有效的帶走可能存在的緩沖鹽結(jié)晶 緩沖鹽的濃度在O.lmol或大于O.lmol時,必須使用該 在線沖洗選項.清洗液配制：90%水+108異丙醇.該混合液可抑制菌類生長和減小水的表面張力，不能干涸。3、為什么 Agilent 12OOLC 的流動相管路非常細(xì)?在使用HPLC時,應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)”對分析結(jié)果的影響，由于樣品分子在液體流動相中的擴散系數(shù) 比在氣體中小45個數(shù)量級，液體流動相的流速也比氣相慢1-2 個數(shù)量級。因此，樣品進(jìn)入色譜柱后，在柱 子以外的任何死體積（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管、檢測器）中，樣品分子的擴散和

25、滯留，都會引起色譜峰的 展寬，而使柱效降低 。為使柱外效應(yīng)減之最小，獲得理想的分析結(jié)果， Agilent 1200LC 使用加工工藝難度 高的毛細(xì)管線作為流動相管路。毛細(xì)管線分類:0.17mn內(nèi)徑 綠色;0.12mm內(nèi)徑 紅色。PEEK 管線：內(nèi)徑0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm毛細(xì)管線優(yōu)點： 柔韌性好.*Agilent公司同時備有1/16in的粗外徑毛細(xì)管線適用于不同習(xí)慣的用戶,優(yōu)點是剛性好但柔韌性差一 些。4、流動相使用前為什么要脫氣？流動相使用前必須進(jìn)行脫氣處理，以除去其中溶解的氣體（如02,以防止在洗脫過程中當(dāng)流動相 由色譜柱流至檢測器時，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。氣泡會增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無法 分析。溶解的氧氣還會導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能若用FLD 可能會造成熒光猝滅。常用的脫氣方法比較： 氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。 加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染。抽真空脫氣法：易抽走有機相。超聲脫氣法：流動相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10- 15min,此法效果最差。在線真空脫氣法:Agilent1200LC真空脫機利用膜滲透技術(shù)，在線脫氣，智能控制，無需額外操作，成 本低，脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。5、如