表皮下自身免疫性大皰病相關(guān)抗原

1、淺談?wù)? 綜述了表皮下自身免疫性大皰病表皮基底膜帶相關(guān)抗原的研究進(jìn)展，有bpag1、bpag2、?型膠原、?型膠原、板層素5和6、97kd蛋白、450kd蛋白、120kd蛋白、45kd蛋白、200kd蛋白、105kd蛋白、100kd和145kd蛋白等。討論它們各自在發(fā)病中的作用，并就研究方向提出展望。 揭示表皮下自身免疫性大皰病皮膚病相關(guān)抗原的生物學(xué)活性，為闡明這類(lèi)疾病的發(fā)病機(jī)制及診斷和鑒別診斷提供了依據(jù)?，F(xiàn)就此類(lèi)抗原研究進(jìn)展作一綜述。 （一）bpag1：已知bpag1（230kd）是半橋粒的主要成分之一，研究發(fā)現(xiàn)其和橋斑蛋白?及網(wǎng)蛋白（plectin）具有同源性，屬于同一基因家族1。guo

2、等2對(duì)去除bpag1基因小鼠進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)雖然半橋粒存在，但缺乏細(xì)胞內(nèi)錨斑樣結(jié)構(gòu)，并且發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)骨架粘附消失。說(shuō)明bpag1在維護(hù)半橋粒的完整性及細(xì)胞內(nèi)骨架連接系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用。 （二）bpag2（180kd）：也是半橋粒的成分之一，跨越基底細(xì)胞膜，與胞外成分如板層素、纖粘素等相連接，并橫跨透明層3。最近通過(guò)免疫電鏡研究發(fā)現(xiàn)它甚至達(dá)到致密層4。同時(shí)發(fā)現(xiàn)它在半橋粒中受到基底細(xì)胞胞漿內(nèi)部分多肽的介導(dǎo)，而且似乎還受到整合素4的調(diào)節(jié)5。最近有學(xué)者用抗bpag2抗體被動(dòng)轉(zhuǎn)移給小鼠，成功地誘導(dǎo)出表皮下水皰形成的動(dòng)物模型，并且發(fā)現(xiàn)其病理機(jī)制有賴(lài)于補(bǔ)體的激活和中性粒細(xì)胞在基底膜帶（bmz）的聚集6。多

3、數(shù)學(xué)者認(rèn)為bpag2在大皰性類(lèi)天皰瘡（bp）的發(fā)病中處于始動(dòng)地位。 （三）?型膠原：獲得性大皰性表皮松解癥（eba）患者循環(huán)性自身抗體（主要是igg）識(shí)別的表位是?型膠原的非膠原氨基端區(qū)（noncollagenous amino-terminal domain, nc1）7。免疫印跡發(fā)現(xiàn)eba靶抗原是分子量為290kd的糖蛋白，它由兩個(gè)145kd區(qū)域組成，一個(gè)為膠原性多肽，另一個(gè)為富含碳水化合物的非膠原性多肽。由角朊細(xì)胞和成纖維細(xì)胞產(chǎn)生，是錨絲纖維的主要成分，在表皮基底膜和其下真皮組織粘附中發(fā)揮著重要作用。 （四）97kd蛋白：免疫印跡證實(shí)大部分線型iga大皰病（lad）患者血清循環(huán)自身抗體i

4、ga能識(shí)別表皮提取物中，分子量為97kd的蛋白質(zhì)。一般認(rèn)為它是lad的靶抗原，但在bmz中的定位有分歧。多數(shù)學(xué)者通過(guò)免疫電鏡研究證實(shí)位于半橋粒下方的透明層內(nèi)8；但也有學(xué)者認(rèn)為該蛋白位于致密板下方；還有學(xué)者認(rèn)為兩者兼而有之9。因它在磷酸鹽緩沖液中易于提取，說(shuō)明這種靶抗原在bmz中的粘著力并不強(qiáng)，有關(guān)它的生物學(xué)活性尚待進(jìn)一步研究。 （五）450kd蛋白：fujiwara等10報(bào)道1例bp患者的血清抗體與bmz中的450kd抗原結(jié)合。并發(fā)現(xiàn)此種蛋白抗原可由人角朊細(xì)胞和人鱗狀上皮癌細(xì)胞表達(dá)，免疫印跡證實(shí)該患者的血清僅與450kd的基底膜提取物結(jié)合，此抗原在電泳時(shí)比板層素泳動(dòng)還慢，它的cdna已被克隆，

5、核苷酸序列研究揭示它有一個(gè)編碼92個(gè)氨基酸的單個(gè)開(kāi)放閱讀框架。從其cdna推導(dǎo)出的氨基酸序列和目前已知的其它bmz中的靶抗原明顯無(wú)同源性，而屬于網(wǎng)蛋白家族11。 （六）105 kd蛋白：stephanie等12報(bào)道1例典型的bp患者，1m nacl鹽裂后直接免疫熒光檢查示在鹽裂后的真皮側(cè)和表皮側(cè)均有廣泛的igg沉積，免疫印跡證實(shí)該自身抗原為105 kd的蛋白質(zhì)。金標(biāo)免疫電鏡研究顯示它位于bmz的透明層，并且位于板層素的上面。據(jù)此推測(cè)這種抗原可能是介導(dǎo)免疫性大皰病的一種新的抗原物質(zhì)，或是和bp自身抗原有關(guān)的一種共存抗原。有趣的是lawrence等13對(duì)這種靶抗原進(jìn)一步研究揭示其在n端和taa（一

6、種腫瘤相關(guān)抗原）有同源序列，但和其它bmz成分如板層素亞單位等無(wú)同源性，并且推測(cè)這種物質(zhì)可由角朊細(xì)胞和成纖維細(xì)胞所產(chǎn)生。 （七）100kd和145 kd蛋白：近來(lái)報(bào)道1例4歲女性lad患兒，全身泛發(fā)性水皰，愈后無(wú)瘢痕形成14。直接免疫熒光檢查發(fā)現(xiàn)：iga在bmz線狀沉積；鹽裂皮膚間接免疫熒光檢查顯示iga型抗體結(jié)合在表皮側(cè)；免疫電鏡研究揭示iga沉積在透明層。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)正常人成纖維細(xì)胞和djm-1細(xì)胞（來(lái)源于人皮膚鱗狀上皮癌細(xì)胞）可表達(dá)此種抗原 ，但以成纖維細(xì)胞表達(dá)量較豐富。利用培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞進(jìn)行免疫沉淀研究發(fā)現(xiàn)該患兒的血清iga至少可沉淀兩種特異性的分子物質(zhì)：100 kd和145 k

7、d蛋白。他們據(jù)此推測(cè)這兩種蛋白質(zhì)可能是該患兒血清抗體的靶抗原，并且認(rèn)為100 kd蛋白和目前所知的97 kd蛋白可能是同一物質(zhì)，而145 kd抗原未見(jiàn)報(bào)道，也可能是如wojnarowska所報(bào)道的285 kd靶抗原的亞單位，但此兩種可能均缺乏證據(jù)。 （八）板層素5和6：板層素受體作為整合素家族的配體，廣泛地存在于細(xì)胞外基質(zhì)中，由三個(gè)亞單位組成，位于bmz上的板層素主要是板層素1、5、6。目前所知ralinin、epiligrin、nicein、bm600等和板層素5是同一種物質(zhì)，而kkalinin可能就是板層素6。最近有學(xué)者報(bào)道板層素5和6可被一組瘢痕性類(lèi)天皰瘡（cp）患者的循環(huán)自身抗體igg

8、所識(shí)別15。lawrence等16進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)此組cp患者血清igg主要識(shí)別600kd蛋白（板層素6），也識(shí)別400kd蛋白（板層素5），但較弱。因此他們建議給此類(lèi)患者命名為抗板層素性cp。 （九）200kd蛋白：zillikens等17報(bào)道1例口服四環(huán)素和秋水仙素后致皮膚粘膜快速進(jìn)展的緊張性水皰形成患者。組織病理類(lèi)似于皰疹樣皮炎；直接免疫熒光檢查見(jiàn)igg和c3在bmz線狀沉積；用鹽裂或吸皰法分離皮膚間接免疫熒光檢測(cè)見(jiàn)igg型自身抗體結(jié)合在真皮側(cè)，主要是igg4。用表皮或真皮提取物進(jìn)行免疫印跡揭示igg和200kd的真皮抗原提取物結(jié)合；免疫電鏡發(fā)現(xiàn)金顆粒沉積于bmz透明層的下部?；仡櫸墨I(xiàn)da

9、vis等于1991年曾報(bào)道3例類(lèi)天皰瘡樣扁平苔蘚患者血清自身抗體igg與鹽裂后皮膚表皮側(cè)的靶抗原成分結(jié)合，免疫印跡證實(shí)該靶抗原分子量也為200kd。它們是否為同一種bmz成分，及在病譜中的作用等尚有待進(jìn)一步的探討。 （十）45kd蛋白：多數(shù)學(xué)者認(rèn)為眼cp特異性靶抗原是分子量為45kd的蛋白質(zhì)。pazderka18對(duì)一組眼cp患者循環(huán)性自身抗體進(jìn)行了研究：鹽裂皮膚間接免疫熒光檢查發(fā)現(xiàn)igg或iga結(jié)合在表皮側(cè)；免疫印跡證實(shí)igg或iga識(shí)別45kd的表皮提取物成分，但不識(shí)別bpag1、bpag2及97kd的蛋白質(zhì)分子。 （十一）120kd蛋白：marinkovich等19報(bào)道部分lad患者血清中

10、抗體iga結(jié)合120kd表皮提取物成分。用鹽裂皮膚間接免疫熒光檢查發(fā)現(xiàn)抗體在表皮側(cè)沉積，并且廣泛地存在于角膜，口腔粘膜等處。在體外實(shí)驗(yàn)中用單克隆抗體123（能特異性識(shí)別這種靶抗原成分但不識(shí)別bmz其它抗原）能誘導(dǎo)表皮和真皮的分離。免疫電鏡揭示這種自身抗原位于錨絲纖維中，但免疫印跡，免疫沉淀研究證實(shí)它又不同于板層素1、5、6等。推測(cè)這種物質(zhì)在維持表皮和真皮粘附中起著重要作用，現(xiàn)命名為lad-1。 （十二）?型膠原：已知?型膠原是bmz成分之一，稱(chēng)為膜膠原。它主要存在于bmz的致密板中，與其它非膠原成分如板層素、纖粘素、氨基葡聚糖等組成復(fù)合物，從而在細(xì)胞的分化、生長(zhǎng)、再生及平衡，基底膜穩(wěn)定等方面起

11、著重要作用。最近有人報(bào)道1例表皮下水皰形成的eba患者血清抗體igg能識(shí)別185kd真表皮連接蛋白提取物，這種蛋白質(zhì)也能被兔特異性抗?型膠原抗體所識(shí)別20。從185kd印跡帶上洗脫下來(lái)的igg抗體用鹽裂皮膚間接免疫熒光檢測(cè)示其結(jié)合于真皮側(cè)。用包埋后間接免疫電鏡研究發(fā)現(xiàn)這種抗體沉積在bmz的致密層。據(jù)此認(rèn)為這種靶抗原是?型膠原，并對(duì)具有抗?型膠原抗體的“eba”命名為：抗?型膠原水皰性表皮松解癥。 綜上所述，近年來(lái)對(duì)表皮下皰病bmz靶抗原研究進(jìn)展較快，取得了一定的成果，如bpag1、bpag2分別被確定為bp的兩個(gè)主要的靶抗原，均位于半橋粒上，而bpag2是個(gè)跨膜糖蛋白，研究表明bpag2還是個(gè)

12、信息分子，并且認(rèn)為在bp的發(fā)病中處于始動(dòng)地位。有關(guān)bp兩個(gè)主要自身抗原目前已經(jīng)明確，包括它們?cè)诮M織中的位置，分子量大小，氨基酸序列以及編碼基因的染色體定位等。有關(guān)eba靶抗原亦即?膠原cdna也被揭示。此外，450kd和97kd真表皮連接蛋白提取物也被多數(shù)學(xué)者認(rèn)為分別是眼cp和lad的靶抗原，在致病機(jī)理中發(fā)揮著重要作用。 雖然在bmz上發(fā)現(xiàn)了許多新的自身抗原，但由于缺乏重復(fù)實(shí)驗(yàn)以及對(duì)它們的序列沒(méi)有完全弄清，加之各實(shí)驗(yàn) 室條件不同，一些分子量相似的靶抗原成分尚未確定它們之間的關(guān)系等，尚待深入研究。縱觀近十余年來(lái)的成果，必將在不遠(yuǎn)的將來(lái)有可能隨著分子免疫學(xué)、分子遺傳學(xué)以及電子顯微技術(shù)的發(fā)展，能完全

13、揭示bmz中的自身抗原分子及各自的生物學(xué)活性，為進(jìn)一步闡明自身免疫性大皰病的病理機(jī)理提供線索。這仍將是這一領(lǐng)域未來(lái)幾年的研究方向。   參考文獻(xiàn) 1 tamai k et al. dermatology, 1994;189(suppl 1):27-33 2 guo et al. cell, 1995;81:233-243 3 bedane c et al. j invest dermatol, 1997;108:901-907 4 masunaga t et al. j invest dermatol, 1997;109:200-206 5 borradori l et al. j

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