企業(yè)公司生產(chǎn)車間sop無(wú)菌檢查操作規(guī)程10p

1、企業(yè)公司生產(chǎn)車間sop無(wú)菌檢查操作規(guī)程【最新資料，word文檔，可編輯】無(wú)菌檢查操作規(guī)程頒發(fā)部門接收部門韓作標(biāo)準(zhǔn)一 質(zhì)量文件編號(hào)文件頁(yè)數(shù)共7頁(yè)分發(fā)部門生效早期 制定人 審核人 批準(zhǔn)人制定日期 審核日期 批準(zhǔn)日期1.的：建立無(wú)菌檢查的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。2.范圍:適用于本廠質(zhì)監(jiān)科化驗(yàn)室對(duì)本廠生產(chǎn)的注射劑進(jìn)行無(wú)菌檢查。3.責(zé)任：化驗(yàn)員有責(zé)任按本操作規(guī)程操作，并對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果負(fù)責(zé)。4.定義：檢查法系指檢查藥品是否無(wú)的一種方法。5.內(nèi)容:5.操作設(shè)備：無(wú)菌操作室或超凈工作臺(tái)，無(wú)菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精燈等。5.1.1無(wú)菌室分無(wú)菌操作室和緩沖間。在緩沖間內(nèi)應(yīng)有洗手盆、干手器、無(wú)菌 衣放

2、置架及掛鉤、拖鞋等。無(wú)菌操作室應(yīng)具有空氣除菌過濾的層流裝置,局 部潔凈度100級(jí)超凈工作臺(tái)。緩沖間及操作室內(nèi)均設(shè)置能達(dá)到空氣消毒的紫外 光燈和照明燈，操作室或工作臺(tái)應(yīng)保持空氣正壓。5. 1. 2 無(wú)室應(yīng)每周和每次操作前用0. 1%新潔爾滅或2%甲酚液擦拭操作臺(tái)及可能污染的死角，開動(dòng)無(wú)菌空氣過濾器及紫外光燈殺菌1小時(shí)。在每次操作完 畢，同樣用2%甲酚或0. 1%新潔爾滅溶液擦拭工作臺(tái)面，用紫外光燈殺菌半小時(shí)。5.1.3無(wú)菌室的無(wú)菌程度檢查:無(wú)菌室在消毒處理后，無(wú)菌試驗(yàn)前及操作過程 中需檢查空氣中菌落數(shù)。取直徑90mm雙碟，在接種室內(nèi)點(diǎn)燃酒精燈，在酒精燈 旁，以無(wú)菌操作，將雙碟半開注入溶化的營(yíng)養(yǎng)瓊

3、脂培養(yǎng)基約20ml ,制成平板: 在35-37艾預(yù)培養(yǎng)48小時(shí)，證明無(wú)菌后將3個(gè)平板以無(wú)菌方式帶入無(wú)菌操作間的潔凈區(qū)域左、中、右各放1個(gè)；打開碟蓋扣置，平板在空氣中暴露30分鐘后 總數(shù)不得超過10個(gè)。將蓋蓋好，置35-37°c培養(yǎng)48小時(shí),出檢查，3個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)相加無(wú)菌操作臺(tái)面或超凈工作臺(tái)應(yīng)走期請(qǐng)有關(guān)部門檢測(cè)其潔凈度，應(yīng)達(dá)到100 級(jí)（一般用塵埃粒子計(jì)數(shù)儀），檢測(cè)塵埃粒徑的粒數(shù)不得超過3. 5個(gè)/ 升；空氣流量應(yīng)控制在0. 75-1. 0m3/s ；細(xì)菌菌落數(shù)平均1個(gè)，可根據(jù)無(wú)菌狀況 定期置換過濾器。5.1.4無(wú)菌室內(nèi)應(yīng)準(zhǔn)備好盛有消毒用5%甲酚的玻璃缸、酒精燈、火柴、銀子、7

4、5%酒精棉及拖鞋等。5. 2儀器、用具：5. 2.1真空泵、恒溫培養(yǎng)箱、生物顯微鏡、托盤天平（精度0. lg ）、抽濾瓶（500ml ）. 三角瓶（100、500 ml ）、移液管（1. 10ml ）、注射器（要求規(guī)格）、試管、雙 碟（9cm ）、注射針、鎘子、剪刀、白金耳、橡皮管、紗布、棉花（原棉）、不銹 鋼吸管筒、接種環(huán)、微孔濾膜（直徑約5cm ）,孑l徑應(yīng)在0. 45±0. 02pm ）載玻片、 灑精燈、取樣勺、吸耳球、噴霧瓶。5. 2. 2用具的包扎 5. 2. 2. 1移液管在移液管上端管內(nèi),松松地塞進(jìn)少許原棉,然后放入不銹鋼滅菌筒內(nèi)。5. 2. 2. 2 試管在管口塞上紗

5、布棉塞。5223無(wú)菌衣、褲、帽、口罩將洗凈的衣褲、帽子、罩配套后裝入布袋，扎緊袋口，再用牛皮紙包好。5. 2. 2. 4注射器洗滌干凈的注射器及注射針頭裝配好后，放入墊有紗布的帶蓋容器內(nèi)（飯 盒）一層層放好，上面蓋上紗布，然后蓋上容器的蓋子，用牛皮紙包好。5. 2. 2. 5 濾器將檢驗(yàn)合格后微孔濾膜先有水中浸泡濕潤(rùn),取出后固定在細(xì)菌過濾器的濾板 上，濾板下、濾膜上均用耐高溫墊圈墊好，上好濾器。在滅菌前濾器的螺勿 擰太緊，濾器上口用8層紗布及牛皮紙包扎，裝妥后放入容器內(nèi)，再將盛濾器的 容器蓋好蓋子，用牛皮紙包扎。5.2.3用具的滅菌將包扎好的用具，在121±0. 5°c蒸汽

6、滅菌柜中滅菌30分鐘，物品取出時(shí)切勿 立即置冷處，以免急速冷卻滅菌物品內(nèi)蒸汽冷凝造成負(fù)壓，易致染菌，應(yīng)置溫箱 或或加溫烘干。5. 3培養(yǎng)基、試劑:5. 3.1 般采用商品干燥培養(yǎng)基，臨用時(shí)按照使用說(shuō)明書進(jìn)行配制，需注意培養(yǎng)基 的pii值應(yīng)符合規(guī)走，否則必須校正后，滅菌使用。使用前，按要求分裝滅菌好的細(xì)菌培養(yǎng)基須經(jīng)30-35°c培養(yǎng)48小時(shí)，真菌培 養(yǎng)基須經(jīng)20-25°c培養(yǎng)72小時(shí)，證明無(wú)菌生長(zhǎng)后方可使用。制備的需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基應(yīng)半個(gè)月內(nèi)用完，在供試品接種前，培養(yǎng)基指 示劑氧化層的顏色不得超過培養(yǎng)基深度約1/5，否則須經(jīng)水浴煮沸加熱，只限加熱 次。5. 3. 2革蘭氏碘

7、液:先用3-5nil蒸f留水溶解2. 0g碘化鉀，再加入10g碘片，攪拌溶解后，加蒸 懈水稀釋至300ml ,搖勻。置密閉棕色瓶中備用。5. 3. 3結(jié)晶紫染色液：將結(jié)紫1. og溶解于20ml95%乙醇中后，與80ml 1%草酸披溶液相混合,靜置48 小時(shí)使用。此液穩(wěn)定，置密閉的棕色瓶中可儲(chǔ)存數(shù)月。5. 3. 4沙黃染色液:將02g沙黃溶解于10ml95%乙醇中,待完全溶解后再加蒸f留水至100mlo5. 3. 5生軽水:稱取9g氯化鈉，加水1000ml溶解，分裝后于121±0. 5°c濕熱滅菌30分鐘。 供作稀釋劑用。第4頁(yè)/共7頁(yè)5. 3. 6 75%乙醇量取無(wú)水乙醇

8、75ml,加水稀釋至100ml ,搖勻,即得。5. 3. 7 0. 1%新潔爾滅：量取5%新潔爾滅20ml，加水稀釋至約1000ml ,搖勻，即得。5. 4培養(yǎng)基靈敏度檢查:5. 4. 1新購(gòu)的干燥培養(yǎng)基或采用不同牌號(hào)原材料的新鮮培養(yǎng)基，其質(zhì)量均應(yīng)符 合靈敏度檢查要求。28001 的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜(1)取藤黃微球菌micrococcus lutcus cmcc ( b )面和白色念珠菌candida albicans cmcc ( f ) 98001 的真菌培養(yǎng)基瓊脂斜面 的新鮮培養(yǎng)物，分別用0. 9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成均勻的菌懸液；取生抱梭菌 clostridium sporogcncs cmc

9、c ( b ) 64941不含瓊脂的需氣、厭氣培養(yǎng)基新鮮 培養(yǎng)物，用滅菌毛細(xì)管將其吸至滅菌離心管內(nèi)，離心，棄去上清液，沉淀菌體用0. 9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成均勻菌懸液。然后以10倍系列稀釋后，制成1ml中含10-100個(gè)菌并計(jì)數(shù)。(2)取藤黃微球菌、生抱梭菌的需氣、厭氣培養(yǎng)基新鮮培養(yǎng)物，白色念珠菌的真菌培養(yǎng)基瓊脂斜面的新鮮培養(yǎng)物，取接種至霉菌培養(yǎng)基內(nèi)，20-25°c用0. 9%無(wú)菌氯化鈉溶液作10倍稀釋，制成lml中含10-100個(gè)菌并計(jì)數(shù)。將藤黃微球菌的上述或的稀釋液各lml，分別接種至每管裝量為9ml的 需氣、厭氣菌培養(yǎng)基3管，生抱梭菌的上述(1)或(2)的稀釋液各lml ,分別

10、接種至 每管裝量為12ml的需氣、厭氣菌培養(yǎng)基3管，白色念珠菌的上述(1)或(2)的稀釋液各lml ,接種至每管裝量為9ml的真菌培養(yǎng)基3管，以未接種的培養(yǎng)基作對(duì)照， 按規(guī)定的溫度培養(yǎng)5天并逐日記錄結(jié)果。結(jié)果判定：以每株菌接種后的培養(yǎng)基不得少于2管呈現(xiàn)生長(zhǎng)，即該培養(yǎng)基的靈 敏度檢查符合要求。5. 4. 2配制的培養(yǎng)基應(yīng)在涼暗處保存，一般不得超過2周，臨用前細(xì)菌和霉菌 培養(yǎng)基分別經(jīng)30-35°c和20-25°c培養(yǎng)不少于48小時(shí)和72小時(shí)，證明無(wú)菌生長(zhǎng) 后方可使用。5. 4. 3需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基在試管中裝量高度不得少于7cm ,其指示劑氧化層 不得超過培養(yǎng)基深度的1 /

11、5 ,否則須經(jīng)水浴煮沸10分鐘，但只限加熱一次。第5頁(yè)/共7頁(yè)無(wú)菌試驗(yàn)培養(yǎng)時(shí)間結(jié)束時(shí)，指示劑氧化層應(yīng)不超過培養(yǎng)基深度的/ 2。5. 5對(duì)照用菌液的制備：5. 5.1試驗(yàn)用菌種、菌種的復(fù)蘇、菌種的接種與保存等均應(yīng)按照抗生素微生物檢 定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程項(xiàng)下操作。5. 5. 2金黃色萄球菌菌液用接種環(huán)取金黃色葡萄球菌staphy-lococcus aureuscmcc( b )26003的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物少許，接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，在30-35°c培養(yǎng)16-18小時(shí)后，用滅菌生理鹽水稀釋成1:1065. 5. 3生抱梭菌菌液用接種環(huán)取生抱梭菌cmcc ( b ) 64941的需氣菌、

12、厭氣菌培養(yǎng) 基新鮮培養(yǎng)物1白金耳，接種至相同培養(yǎng)基內(nèi)，在30-35°c培養(yǎng)18-24小時(shí) 后，用滅菌生理鹽水稀釋成1:106。5. 5. 4白色念珠菌菌液用接種環(huán)取白色念珠菌cmcc ( f )98001的真菌瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物1白金耳，接種至真菌培養(yǎng)基內(nèi)，在20-25°c培養(yǎng)24小時(shí)后, 用滅菌生理鹽水稀釋成1:105。5. 5. 5上述制備的菌液，一般當(dāng)日使用。5. 6逬入無(wú)菌室的操作要點(diǎn): 5. 6.1根據(jù)試驗(yàn)程序，將用具物品搬入緩沖間,打開紫外光燈和空氣過濾裝置并使其工作1小時(shí)以上。5. 6. 2操作人員用肥皂水刷洗雙手，關(guān)閉緩沖間紫外光燈，逬入緩沖間內(nèi),關(guān)閉

13、第層門，用2%來(lái)蘇爾或0. 1%新潔爾滅溶液洗雙手，用消毒毛巾擦干，換上無(wú)菌衣、帽、口罩及消毒鞋。5. 6. 3關(guān)閉無(wú)菌室內(nèi)紫外光燈，進(jìn)入第二層門并將用具搬至無(wú)菌室內(nèi)，關(guān)閉無(wú)菌室門。5. 6. 4凡逬入無(wú)菌室后不應(yīng)再外出取物品，因此，在每次試驗(yàn)中所用物品必須計(jì)劃 好，并準(zhǔn)備好備用物品。從進(jìn)入第一層門直至無(wú)菌室內(nèi)，隨操作人員的進(jìn)入應(yīng)噴 霧2%來(lái)蘇爾或0. 1 %新潔爾滅溶液。5. 7檢查法:5. 7. 1無(wú)菌檢查法包括：直接接種法和薄膜過濾法。前者適用于非抗菌作用的供試品；后者適用于有抗菌作用的或大容量的供試品。5. 7. 2操作時(shí)，應(yīng)先用0. 1%新潔爾滅浸泡或擦拭容器表面后，以無(wú)菌的方法取

14、第6頁(yè)/共7頁(yè)內(nèi)容物。5. 7. 3凡無(wú)菌檢查中，均應(yīng)取相應(yīng)溶劑和稀釋劑同法操作，作陰性對(duì)照。5. 7. 4供試品制備：用滅菌銀取出注射器，在火焰旁將針芯插入針管并安上針頭，蓋為橡皮塞 時(shí)，用注射器在已消毒好的橡皮塞中心位置刺入吸取藥液。按規(guī)定須稀釋或滅 活的供試品，可直接或?qū)⑵績(jī)?nèi)供試液抽出至滅菌玻璃容器內(nèi)進(jìn)行滅活處理并稀 釋至規(guī)定的體積和濃度；抽取瓶中內(nèi)容液體時(shí)，應(yīng)將供試品倒置并使針頭在液 直1下。5. 7. 5直接接種法:按規(guī)走量取供試品，以無(wú)菌操作將該供試品分別接種于需氣菌、厭氣菌培養(yǎng) 基6管，其中1管接種金黃色葡萄球菌液lml，作陽(yáng)性對(duì)照，另接種于真菌培養(yǎng)基 5管。輕輕搖動(dòng)，使供試品與

15、培養(yǎng)基混合。需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基管置30-35°c. 真菌培養(yǎng)基管置20-25工培養(yǎng)7日。在培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)。 陽(yáng)性對(duì)照管在24小時(shí)內(nèi)應(yīng)有菌生長(zhǎng)，如在加入供試品后，培養(yǎng)基岀現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)7天后，不能從外觀上判斷有無(wú)微生物生長(zhǎng)，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培 養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，細(xì)菌培養(yǎng)2日，真菌培養(yǎng)3日，觀察是否再出 現(xiàn)渾濁或斜面有無(wú)菌生長(zhǎng)，或用接種環(huán)取培養(yǎng)液涂片，染色，用顯微鏡觀察是否 有菌。5. 7. 6薄膜過濾法：將微孑匕慮膜過濾裝置、抽濾瓶、排氣管與真空泵相連,真空泵可置無(wú)菌室外。取規(guī)定量供試品，按規(guī)定的方法處理后，加入0. 9%無(wú)菌氯化鈉溶液1

16、00ml中， 混合后，通過裝有孔徑不大于0. 45pm的薄膜過濾器，減壓抽干后，用0. 9%無(wú)菌 氯化鈉溶液沖洗濾膜3次，每次至少100ml ,取岀濾膜分成3等份，分別加入上述 二種培養(yǎng)基中，按規(guī)定溫度和時(shí)間培養(yǎng)。陽(yáng)性對(duì)照管應(yīng)根據(jù)供試品特性加入相應(yīng) 對(duì)照菌液lml （抗細(xì)菌藥物，以金黃色葡萄球菌為對(duì)照菌；抗厭氧 菌藥物，以生抱梭菌為對(duì)照菌；抗真菌藥物，以白色念珠菌為對(duì)照菌）。陽(yáng)性對(duì) 照管細(xì)菌應(yīng)在培養(yǎng)24-48小時(shí)，真菌應(yīng)在培養(yǎng)24-72小時(shí)有菌生長(zhǎng)。5. 8結(jié)果判斷：第7頁(yè)/共7頁(yè)當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照管顯渾濁并確有菌生長(zhǎng)，陰性對(duì)照管呈陰性時(shí)，可根據(jù)觀察所得 的結(jié)果判定：如需氣菌、厭氣菌及真菌培養(yǎng)基管均為澄清或雖渾濁但經(jīng)證明并非 有菌生長(zhǎng)，均應(yīng)判為供試品合格；如需氣菌、厭氣菌及真菌培養(yǎng)基管中任佢i 1管 顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，應(yīng)重