鉑類抗癌配合物的高效液相色譜法研究進展

1、化學(xué)研究與方法綜述題 目： 鉑類抗癌配合物的高效液相 色譜法研究進展 院 - 系： 理 學(xué) 院 專 業(yè)： 化 學(xué) 年 級： 2011級 學(xué)生姓名： 何 宣 鵬 學(xué) 號： 201101020132 日 期： 2014年6月 鉑類抗癌配合物的高效液相色譜法研究進展何宣鵬云南省紅河學(xué)院理學(xué)院 蒙自 661199 摘要： 鉑類抗癌藥物是目前臨床治療惡性腫瘤最有效的藥物之一，近10 年來，其應(yīng)用和研究得到了迅速的發(fā)展。鉑類抗癌配合物的化學(xué)分析方法主要有熾灼殘渣檢查法、高效液相色譜法、薄層層析法、紫外分光光度法及毛細管電泳法等，其中，高效液相色譜法( HPLC) 因分析速度快、分離效率高、檢測靈敏度高、檢

2、測自動化、適用范圍廣等優(yōu)點，已成為近年來鉑類抗癌配合物化學(xué)分析最常用的手段。針對目前已進入臨床應(yīng)用及部分正進行臨床試驗的鉑類抗癌配合物的HPLC方法進行了綜述。關(guān)鍵詞： 分析化學(xué) 鉑類抗癌配合物 HPLC方法 研究進展Research Progress of the HPLC Method for Anti- cancer Platinum Complexes He Xuan PengSchool of Science, Honghe University, Mengzi, Yunnan 661199,P.R.ChinaAbstract: Platinum complexes are one

3、of the most effective anti -cancer agents currently used in clinical treatments of cancer patients.The past decade has witnessed rapid developments in this field and some modern chemical analytical methods have also applied to determination of these agents.The methods include residue on ignition met

4、hod，HPLC，TLC，UV- Vis spectrophotometry and capillary electrophoresis,among which HPLC is the most frequently used because it has many advantages，such as fast analytical speed，high separation efficiency and detection sensitivity，automatic detection and wide- range application.The present paper summar

5、ized the HPLC for clinically approved platinum drugs as well as some platinum complexes under clinical investigation.Keywords: Analytical Chemistry, Platinum Anti-Cancer Complexes, HPLC Method, Research Progress自從Rosenberg等發(fā)現(xiàn)順鉑類配合物對細胞繁殖具有抑制活性而可作為抗腫瘤藥物后，人們對鉑類配合物的研究就一直沒有中斷，以期待發(fā)現(xiàn)療效更高、適用范圍更廣、毒副作用更低、更經(jīng)濟的

6、藥物品種1。迄今為止，人們已經(jīng)合成了數(shù)千種鉑類化合物，但作為抗腫瘤藥進入臨床試驗的僅30 多種，其中20 多種因抗腫瘤活性弱或毒性過強而被淘汰2，而批準上市的僅有順鉑( Cisplatin) 卡鉑( Carboplatin)、奈達鉑( Nedaplatin) 、奧沙利鉑( Oxaliplatin)、舒鉑( Sunpla) 和洛鉑( Lobaplatin) ，特別是順鉑和卡鉑，是目前臨床上使用最廣的抗癌藥物之一，是治療許多腫瘤的首選藥物。據(jù)最新統(tǒng)計，現(xiàn)臨床使用的聯(lián)合化療方案中，有50% 的方案是以順鉑或卡鉑為主藥，或有它們參與配伍。同時，奧沙利鉑、奈達鉑、舒鉑和洛鉑正逐漸得到醫(yī)生和患者的認識，也

7、將成為治療癌癥的重要藥物 3。近年來，各種現(xiàn)代分析手段在藥物分析中的應(yīng)用日趨廣泛，受到了藥物分析工作者的關(guān)注。藥物化學(xué)分析的常用手段有光度分析法、質(zhì)譜法、色譜法、毛細管電泳法和其他分析方法等4。鉑類配合物作為一類無機抗癌藥物，涉及的主要化學(xué)分析手段有熾灼殘渣法、高效液相色譜法( HPLC) 、薄層層析法、紫外分光光度法及毛細管電泳法等。其中，高效液相色譜法因分析速度快、分離效率高、檢測靈敏度高、檢測自動化、適用范圍廣等優(yōu)點，已成為近年來鉑類抗癌配合物化學(xué)分析最常用的手段。本文就目前已進入臨床及部分正進行研究的鉑類抗癌配合物的高效液相色譜法作一簡述。1 鉑類抗癌配合物的常規(guī)高效液相色譜法高效液相

8、色譜法是在20 世紀60 年代末期，在經(jīng)典液相色譜法和氣相色譜法的基礎(chǔ)上，發(fā)展起來的新型分離技術(shù)。經(jīng)過近50 年的發(fā)展，現(xiàn)在HPLC法在分析速度、分離效能、檢測靈敏度和操作自動化方面，都達到了和氣相色譜法相媲美的程度，并保持了經(jīng)典液相色譜對樣品適用范圍廣，可供選擇的流動相種類多和便于用作制備色譜等優(yōu)點5。HPLC 法近年來發(fā)展相當(dāng)迅速，中國藥典1985 年第一次將其作為一種藥物分析方法載入藥典，當(dāng)時只有8 個品種規(guī)定使用HPLC 法檢測，而到1995 年版藥典已達到113個品種，2000版藥典則達到了282個品種，在藥典收錄的所有分析方法中，HPLC 是發(fā)展最快的一種6-7。據(jù)美國藥典22 版

9、載，HPLC 在含量測定方法中也位居第一。HPLC 主要用于鉑類抗癌配合物主含量和相關(guān)雜質(zhì)的檢測。1.1 順鉑順鉑為經(jīng)典的無機抗癌藥物，化學(xué)名為順式-二氯二氨合鉑( ) 。順鉑的HPLC 法主要有柱前衍生化法、離子交換色譜法、反相液相色譜法等，其中以反相液相色譜法居多。H.HASSON 等采用柱前衍生化法測定順鉑含量，在2 mL 順鉑水溶液( 0.75 mg /mL) 中加入1 mL鄰苯二胺水溶液( 1.8 mg /mL) ，于100 加熱20min，得到藍色沉淀，過濾，用水洗滌之后將沉淀溶解在100 mL 二甲基甲酰胺中。將產(chǎn)物用C18 柱( 300mm×4.6 mm，10m) 測

10、定，流動相是三氯甲烷，流速V = 1 mL / min，檢測波長 = 703 nm，保留時間3min，檢測靈敏度達到0.4g /mL 8。郁韻秋等采用- Bondapak NH2柱測定順鉑注射液的含量，以85% 的乙腈- 水溶液為流動相，腺嘌呤作內(nèi)標，流速1.5 mL /min，檢測波長210 nm，順鉑和內(nèi)標的保留時間分別是3.15 和4.46 min，最低檢測限為3 ng /10L9。樂云峰等為了研究順鉑氯化鈉注射液有關(guān)物質(zhì)的檢查方法，建立了類似的HPLC 法，區(qū)別為流動相的比例是75% 的乙腈- 水，流速1.2 mL /min10。胡榮峰等同樣以Hypersil-NH2色譜柱為固定相，但

11、是流動相與郁韻秋等的不同，采用0.1% 的NaCl 溶液( 用冰醋酸調(diào)pH = 3. 80) ，流速0. 8 mL /min，檢測波長210 nm，直接測定順鉑注射液中順鉑的含量，實驗需要避光操作。順鉑和反鉑的保留時間分別為3.37 和5.51 min，最低檢測限為6 ng /10L11。唐星等為了考察pH 值、氯化鈉濃度、溫度及光照對順鉑水溶液穩(wěn)定性的影響，采用HPLC 法進行測定，同樣采用了-Bondapak NH2柱，流動相則是乙腈- 水- 95% 乙醇( 73: 12: 15) ，檢測波長214nm，流速0.5 mL /min，室溫下測定。順鉑的保留時間是6.4 min12。美國藥典3

12、2 版收錄了順鉑的HPLC 法，主含量測定同樣采用氨基柱( 4.0 mm×30 cm) ; 流動相為乙酸乙酯: 甲醇: 二甲基甲酰胺: 水= 25:16: 5:5; =310 nm; V = 2 mL /min; 溶液用二甲基甲酰胺配制。相關(guān)物質(zhì)三氯氨鉑離子測定用L14 色譜柱( 帶強堿性季銨基的陰離子交換柱) ; 流動相是0.4 g /L 的硫酸銨溶液( pH = 5.9 ± 0.1) ; = 209 nm; V = 2 mL /min; 溶液用食鹽水配制，其限量是1.0%。反鉑測定采用L9 柱( 強酸性陽離子交換柱，4.6 mm×25cm) ; 流動相為0.1

13、8 mol /L 磷酸二氫鉀溶液( 用磷酸調(diào)節(jié)pH = 3.2) ; 柱溫T = 45; = 254 nm; V = 2mL /min; 溶液用食鹽水配制，限量是2.0%13。劉明潔和劉祝東分別采用此方法來測定注射用順鉑含量和順鉑凍干粉的含量14-15。 黃天木等則是采用ODS 柱作為固定相，以1%的甲醇水為流動相，柱溫30，流速1 mL/min，檢測波長210 nm，以尿苷為內(nèi)標解決了順鉑、反鉑、鉑B、一、二水合鉑同時定量分析問題，檢測限小于10- 6mg /mL16 。1.2 卡鉑卡鉑，1，1- 環(huán)丁二羧酸二氨合鉑() 的簡稱，屬于第二代鉑類抗腫瘤藥物。黃天木研究了4 種離子對試劑對卡鉑及

14、順鉑保留值的影響，4種離子對試劑分別是四甲基氯化銨( TMAC) 、四乙基溴化銨( TEAB) 、四正丁基溴化銨( TBAB) 和十六烷基三甲基溴化銨( HTAB) 。除TMAC 外，順鉑的保留值都隨離子對試劑濃度升高而增大; 卡鉑則呈拋物線下降。順鉑和卡鉑都有偶極矩，同離子對試劑可構(gòu)成與離子對相似的離子-偶極作用物，在C18 柱上有較大的保留值。但卡鉑的配體中有烷基，體積比順鉑大，疏水表面積也較大，故保留行為與順鉑不同。最終的色譜條件是:YWG- C18 柱( 5. 0×200 mm，10 m) ，流動相為5mmol /L HTAB:CH3OH = 65:35，流速1 mL /mi

15、n，檢測波長225 nm，柱溫30，以NaCl 作內(nèi)標，溶液用9mg /mL 的NaCl 水溶液配制。測得順鉑的檢出限是0.23g/mL，卡鉑是75 ng/mL17 。 黃天木還研究了順鉑和卡鉑在Mieropak AX-5( 4×300 mm) 色譜柱( 四烷基銨鍵和硅膠柱)上的保留行為，采用了2 種流動相:0.15 mol/L 的NaCl水溶液和0.1 mol/L 的NaAc-MeOH( 2:3)溶液，流速1 mL /min，檢測波長210 nm，柱溫30，溶液用生理鹽水配制。其中以0.15 mol /L 的NaCl 水溶液作流動相時測得的卡鉑和順鉑回收率較好。順鉑和卡鉑與強陰離子

16、交換柱通過離子-偶極作用而被保留，隨著鹽濃度的增大，離子強度增大，抑制了鉑配合物同固定相的離子-偶極作用，保留下降。隨著流動相中甲醇比例的加大，流動相中鹽濃度降低，離子抑制作用減弱，保留增大，但是隨著甲醇比例增大，順鉑的峰形變差，不適于定量測定18 。 Michelle A.Allsopp 等為了考察卡鉑在含有氯離子或其它親核離子的水溶液中的分解情況，通過HPLC 法進行測定，以Spherisorb ODS 柱( 250×4.9mm，5m) 為固定相，流動相是0. 02 mol /L 的磷酸鹽緩沖液，流速1 mL /min，采用外標法定量19。 黃衛(wèi)平等用純水作流動相，采用外標法和內(nèi)

17、標法測定卡鉑及其制劑的含量，獲得了滿意的結(jié)果。固定相選用YWG - C18 柱( 250 mm×4.6 mm，5m) ，流動相流速1 mL /min，檢測波長210 nm，柱溫30，靈敏度是0. 08 AUFS。其中內(nèi)標法以尿苷為內(nèi)標。內(nèi)標法和外標法測定含量的結(jié)果相近，故可根據(jù)實際情況從這兩種方法中選擇20。 Anupama Mittal 等建立了同時測定卡鉑和紫杉醇的方法，采用了Inertsil ODS - 3V 柱( 250 mm×4.6 mm，5m) ，以10% 乙腈- 水為流動相，柱溫35，檢測波長227 nm，流速1 mL /min，卡鉑的保留時間是4.3 min

18、21 。中國藥典2005 版收錄了卡鉑的HPLC 法，以C18 柱為固定相，水為流動相，流速2 mL /min,檢測波長229 nm。主含量采用內(nèi)標法測定，以尿苷為內(nèi)標; 有關(guān)物質(zhì)采用不加校正因子的主成分自身對照法測定，各雜質(zhì)的總含量不得超過2%22。馬張英等采用此方法測定了卡鉑粉針和水針劑的含量，劉放等用來研究卡鉑及其制劑的穩(wěn)定性，但流速和檢測波長與藥典不同，流速均采用1 mL /min，劉放采用210 nm 作為檢測波長23-24。美國藥典32 版同樣收錄了卡鉑的HPLC 法，但與中國藥典不同。美國藥典中的卡鉑主含量測定采用氨基柱( 4.0 mm×30 cm) ; 流動相為乙腈:

19、水= 87:13，=230 nm，V=2 mL/min，溶液用水配制，并要求在2h內(nèi)使用。相關(guān)物質(zhì)1，1- 環(huán)丁二羧酸測定采用ODS 柱( 4.0 mm×30 cm);流動相為硫酸四丁基氫銨水溶液( 8.5 g 硫酸四丁基氫銨溶于80 mL水中加3.4 mL 磷酸，用10 mol/L 氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH =7.55，取20 mL，加水880 mL):乙腈= 90:10， = 220nm，V = 2 mL /min，溶液用流動相配制，其限量是0.5%13。 蔡梅等建立了同時測定注射用卡鉑和奈達鉑含量的方法。由于鉑類抗癌藥物的結(jié)構(gòu)中均有伯胺基或仲胺基與金屬元素鉑相連，作者采用了氨基柱作為分

20、析柱，借助胺基和色譜柱填料間的作用，增加其在色譜柱上的保留行為，使得卡鉑和奈達鉑有效分離。流動相采用0. 01 mol /L 枸櫞酸( 用三乙胺調(diào)節(jié)pH= 6.0) : 乙腈( 70:30) ，檢測波長210 nm。此方法還可以用于奧沙利鉑和舒鉑的含量測定25。 Robbin B Burns 等建立了卡鉑及其類似物DWA2114R( 見圖1) 的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用( LC -MS) 方法，并比較了質(zhì)譜( MS) 和紫外光譜( UV) 2種檢測方法的檢測限( LOD)。分離這兩種抗癌配合物所采用的色譜條件為: Waters Bondapak ODS 柱( 3.9 mm i. d.×15

21、0 mm，10 m) ，采用二組分梯度洗脫: 首先是100% 水，持續(xù)6 min; 之后1 min 內(nèi)由100%水梯度到75水-25%甲醇，并持續(xù)8 min; 隨后用體積比為0. 02% 的甲酸水溶液代替水; 流動相流速是0.5 mL /min，其中1 /10 的流動相進入質(zhì)譜;檢測波長210nm。在此條件下卡鉑的保留時間是5.3 min，DWA2114R 是11. 9 min。檢測限測定時采用與分離不同的流動相，測定MS 檢測限時，卡鉑的流動相為0. 02% 的甲酸水溶液: 甲醇= 95 :5，DWA2114R 的流動相是0.02% 的甲酸水溶液: 甲醇= 75: 25; 測定UV 檢測限時

22、，卡鉑的流動相是水: 乙腈= 98: 2，而DWA2114R 的流動相是水:乙腈=90: 10。在這幾個色譜條件下，卡鉑和DWA2114R的保留時間都在5 min 左右，測定結(jié)果表明，LC -MS 的檢測限明顯比LC - UV 的低26。 M Macka 等在溶劑生成的離子交換色譜柱上，通過離子強度梯度的方法分離順鉑、卡鉑、反鉑及順鉑的水合物等幾種鉑類配合物( 見圖2) 。色譜柱采用C18 柱( 4×250 mm，7.5 m) ，柱溫30，檢測波長210 nm，流動相由兩組分組成: A 為2 mmol /L 辛烷磺酸鈉，B 為2 mmol /L 辛烷磺酸鈉和0.5 mmol /L磷酸

23、二氫鈉，可以采用等度洗脫方法，即90% A 和10%B( pH = 4.53) ，或者梯度洗脫方法: 10%B，04min; 之后由10%B 梯度到100%B，48 min，并持續(xù)到9 min; 最后100% B 梯度到10%B，99.1 min。流速1.5 mL /min，離子交換固定相由C18 柱長時間(約4 h) 通流動相至保留時間不改變的辦法生成。在等度洗脫中，由、組成的混合物的色譜圖顯示出帶電配合物和的保留時間受離子強度的影響很大，配合物在少于30% B 的流動相作用下， 10 min 內(nèi)無法被洗脫下來，中性的和的保留時間則不受影響。在含50%B 的流動相的等度洗脫下，混合物達到基線

24、分離，順鉑保留時間約1.5 min，卡鉑3.5 min，但對一些實際樣品，如順鉑和環(huán)丁二羧酸反應(yīng)生成的一些產(chǎn)物的峰會干擾的色譜峰，梯度洗脫則不會產(chǎn)生干擾25。圖1 DWA2114R 的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structure of DWA2114R圖2 鉑類配合物的結(jié)構(gòu)式Fig.2 Chemical structures of platinum complexes1.3 奈達鉑奈達鉑，順式- 乙醇酸- 二氨合鉑() ，是第二代鉑類抗癌藥物，1995年6月在日本首次上市28 ，目前國內(nèi)也于2001 年仿制成功并批準上市。畢同香等建立了奈達鉑的HPLC法，色譜柱采用Spherisor

25、b NH2柱( 300×4 mm ,10m );流動相是40 mmol /L 磷酸二氫鉀- 乙腈(8:2)流速0.8mL/min，檢測波長= 210 nm，溶液用水配制。奈達鉑的出峰時間約5 min，在主峰前有一雜質(zhì)峰29。 陳祥峰等建立了測定注射用奈達鉑含量及有關(guān)物質(zhì)的HPLC 法，采用Shim - pack CLC - ODS 不銹鋼柱( 150 mm×4.6 mm，5m) ，以甲醇- 0. 01 mol /L 枸櫞酸溶液( 用三乙胺調(diào)節(jié)pH = 6. 0) ( 30:70) 為流動相，流速0.7 mL /min，檢測波長220 nm，柱溫30，溶液用流動相配制。在此條

26、件下，奈達鉑約5min 出峰，最低檢測限是20 ng /10L。有關(guān)物質(zhì)采用不加校正因子的自身對照法測定30。1.4 奧沙利鉑 奧沙利鉑( 或草酸鉑) 是一種穩(wěn)定的水溶性鉑類烷化劑，全稱是草酸- ( 反式-L-1，2 - 環(huán)己二胺) 合鉑，溶解度介于順鉑與卡鉑之間。1996 年在法國首次上市。 李軍依等建立了測定奧沙利鉑及其相關(guān)雜質(zhì)的HPLC 法，采用的色譜條件為: C18 柱( 250×4.6mm，5m) ; 流動相: 甲醇: 水= 5:95; 波長: 主成分測定用250 nm，有關(guān)物質(zhì)用205 nm; V = 1 mL /min;溶液用流動相配制; 有關(guān)物質(zhì)的測定采用主成分自身對

27、照法。其中，有關(guān)物質(zhì)草酸的測定采用其它色譜條件: C18 柱( 150×4.6 mm，5 m) ; 流動相: pH =6.0的磷酸緩沖液( 取1.36 g 磷酸二氫鉀，加10%氫氧化四丁基銨10 mL，加水溶解至1000 mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH = 6.0) ：乙腈= 80: 20; 波長210 nm; T =40; V = 1 mL /min; 溶液用水配制，且現(xiàn)配現(xiàn)用31。劉穎等采用同樣的方法測定注射用奧沙利鉑中的草酸含量32。圖3 奧沙利鉑相關(guān)雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)式Fig.3 Chemical structures of oxaliplatin and related substances

28、任鵬及黃毅嵐等同樣采用了C18 柱( 150×4.6mm，5m) 測定奧沙利鉑及其相關(guān)物質(zhì)的含量，流動相是甲醇-水( 5: 95) ，流速1 mL /min，柱溫25，檢測波長250 nm。奧沙利鉑保留時間約5 min，檢測限為3 ng /10L33-34。陳紅梅采用類似的方法測定奧沙利鉑原料藥含量，流動相比例為甲醇: 水= 10:90 35。 歐洲藥典6.0 版和英國藥典2008 版收錄了相同的奧沙利鉑的HPLC 法，主含量測定的色譜條件為: C18 柱( 250×4.6 mm，5m) ，柱溫40，流動相: 乙腈: 磷酸鹽緩沖液( 取0.6 mL 磷酸，加水稀釋至1000

29、 mL，用氫氧化鈉溶液和磷酸調(diào)節(jié)pH = 3.0)= 1:99，流速1.2 mL /min，檢測波長210 nm。除奧沙利鉑的對映體外，另還有A、B、C 三個相關(guān)雜質(zhì)要檢測( 見圖3) ，其中雜質(zhì)C 的色譜條件與主成分的一樣，其限度是0.1%。雜質(zhì)A 的色譜條件是: C18柱，柱溫40，流動相: 乙腈: 磷酸鹽- 離子對溶液(取10 mL 320 g /L 的氫氧化四丁基銨溶液，加1.36g 磷酸二氫鉀，加水稀釋至1000 mL，用H3PO4調(diào)節(jié)pH = 6.0) = 2：8，流速2 mL /min，檢測波長205 nm，雜質(zhì)限度0.1%。雜質(zhì)B 的流動相為: 乙腈: 磷酸鹽-離子對溶液( 取

30、1.36 g KH2PO4和1 g 庚烷磺酸鈉，溶于1000 mL 水中，并用H3PO4調(diào)節(jié)pH = 3.0 ±0.5) = 2:8，流速2 mL /min，檢測波長215 nm，雜質(zhì)限度0.1%?？偟碾s質(zhì)( 包括A、B、C 及其它雜質(zhì))限度是0.3%36-37。 傅萍等對注射用奧沙利鉑中有關(guān)物質(zhì)的測定方法進行了探討，采用了歐洲藥典( EP 6.0) 和英國藥典( BP，2005 年版) 中雜質(zhì)C 的HPLC 法的流動相以磷酸溶液-乙腈( 99 1) ，對檢測波長、色譜柱進行了篩選，以確定下來的色譜條件對奧沙利鉑的降解產(chǎn)物、檢測限進行檢測，并與國家藥品監(jiān)督管理局標準WS1-( X-0

31、90)-2003ZHPLC 法，以甲醇-水( 91) 為流動相，檢測波長250 nm 進行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用EP 6.0 和BP( 2005 年版) 中奧沙利鉑雜質(zhì)C的HPLC法對注射用奧沙利鉑的雜質(zhì)的檢出率明顯高于現(xiàn)有國家標準。證明現(xiàn)有國家標準不能有效地對奧沙利鉑雜質(zhì)進行檢出，需對該檢查方法進行重新論證38 。1.5 舒鉑 舒鉑又名銥鉑或庚鉑，1999 年在韓國上市，化學(xué)名為順式- 雙( 氨甲基) -異丙基-二氧戊環(huán).丙二酸合鉑() ，其水溶性好，穩(wěn)定性高，主要用于胃癌和肺癌的治療。 和雪峰等建立了舒鉑的HPLC 法，所采用的色譜條件為: C18 柱( 250×4.6 mm，5m)

32、 ; 流動相:甲醇:水= 40: 60; 波長210 nm; V = 1 mL /min; 溶液用流動相配制; 有關(guān)物質(zhì)采用不加校正因子的主成分自身對照法。舒鉑的保留時間約7 min，檢測限是0.015 mg /mL39。朱思思等也采用同樣的方法測定舒鉑及其相關(guān)物質(zhì)的含量40 。1.6 舒鉑 洛鉑，又名樂鉑或絡(luò)鉑，2001 年在中國首次上市，化學(xué)名二( 氨甲基)-環(huán)丁烷.乳酸合鉑()。 J.Welink 等建立了洛鉑的2 個非對映異構(gòu)體LP-D1 和LP - D2 的HPLC 法，采用Hypersil ODS柱( 250 mm×4.0 mm，5m) ，流動相為乙腈-磷酸二氫鈉水溶液(

33、 1.36 g KH2PO4溶于9737 mL 水中，用5 mol /L 的KOH 調(diào)節(jié)pH = 6.4) -三乙胺( 26:973.7:0.3) ，流速1 mL /min，檢測波長210 nm。溶質(zhì)從柱中洗脫下來后，用乙腈- 磷酸二氫鈉水溶液( 1.36 g KH2PO4溶于799.7 mL 水中，用5 mol /L的KOH 調(diào)節(jié)pH = 6.4)-三乙胺( 200:799.7:0.3) 以1mL /min 流速沖2 min。LP-DI 保留時間24.0 min，LP -D2 是25.5 min41。趙振東等通過正交實驗建立了洛鉑中乳酸含量的測定方法: 采用bnpac A S9-HC 陰離子

34、分析柱，檢測器為抑制性電導(dǎo)檢測器，柱溫30，淋洗液是1.5 mmol /L Na2CO3和1.8 mmol /L NaHCO3混合液，V = 0.8 mL /min，檢測池溫度30，在此條件下，乳酸保留時間約7.2 min。在配制淋洗液時速度要快，盡可能少暴露在空氣中，超聲波脫氣10 min 后用氮氣保護，以免使用過程中空氣中的二氧化碳溶入水中產(chǎn)生碳酸根，干擾乳酸保留時間42。1.7 賽特鉑 賽特鉑，全稱順式-二氯-反式-乙酸( 氨環(huán)己胺) 合鉑() ，于20 世紀80 年代末期合成，目前仍在作III臨床試驗43。馬張英等建立了賽特鉑膠囊含量測定的HPLC法，色譜條件為C18 柱( 250 &

35、#215;4.6 mm，5m) ; 流動相: 甲醇:水:2% 醋酸= 50: 35:15; V = 1 mL /min; 波長260 nm; 柱溫30; 賽特鉑保留時間8.1 min，溶液用水配制，盡可能放在28的冰箱內(nèi)保存，減少冰箱外暴露時間44 。劉祝東建立了賽特鉑原料藥及其雜質(zhì)的HPLC法，采用外標法定量。色譜條件為ODS 色譜柱( 150mm×4.6 mm，5m) ，以乙腈: 水( 2025:75 80)為流動相，流速0.8 mL /min，210 nm 處檢測，選擇溶解樣品的溶劑時發(fā)現(xiàn)，以1：1 的乙腈- 水為樣品溶劑時，樣品溶解速度較快，所得峰形好，且在24 h 內(nèi)穩(wěn)定4

36、5 。1.8 順式-3，5 二異丙基水楊酸根-( 1R，2R 環(huán)已二胺) 合鉑() ( saliplatin)順式-3，5 二異丙基水楊酸根- ( 1R，2R 環(huán)已二胺) 合鉑( ) 是一種新合成的鉑類抗癌配合物，保留了順式氨基配位和二價鉑離子作為藥效基團，以3，5-二異丙基水楊酸作為離去基團，改善了化合物的親脂性，從而促進其跨膜吸收，提高生物利用率。初步藥理藥效學(xué)實驗結(jié)果證實，該新型鉑配合物較之卡鉑有更高的抑制腫瘤活性和更低的毒性，具有良好的研發(fā)前景，現(xiàn)已進入開發(fā)階段46 。 1.9 順二氯一氨( 4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧自由基) 合鉑(II) (簡稱HJ5)HJ5是一種

37、含穩(wěn)定氮氧自由基的鉑配合物，有很好的脂溶性及易穿透細胞膜的特點。生物學(xué)試驗顯示它具有較高的抗癌活性和較低的毒性47 。劉洋等建立了HJ5的HPLC 法，色譜條件為C18柱( 150×4.6 mm，5 m) ; 流動相: 乙腈:水= 10: 90;V = 0.8 mL /min; 波長210 nm; 柱溫25; 樣品用9g /L 的氯化鈉溶液配制，穩(wěn)定時間為2 h。HJ5的保留時間約為7.2 min，最低檢出限為0.07 g /10L47。2 鉑類抗癌配合物的手性分離目前已批準上市的6 種鉑類抗癌藥物中其中3種為手性藥物，它們是奧沙利鉑、舒鉑和洛鉑。手性藥物的光學(xué)異構(gòu)體一般具有不同的藥

38、理和毒理作用，要求作為相關(guān)雜質(zhì)來測定，因此需要建立手性分離和分析的方法。2.1 奧沙利鉑 劉祝東等采用反相手性CHIRALCEL OD-RH色譜柱( 甲苯氨甲酰纖維素衍生化合物鍵合硅膠，150 mm×4.6 mm，5m) 分離奧沙利鉑及其對映體，流動相采用乙腈-乙醇( 60:40，V /V) ，流速0.3 mL /min，甲醇為樣品溶劑，檢測波長250 nm。奧沙利鉑及其對映體的保留時間分別是8. 2 和10. 4 min，兩者之間分離度為348 。 張建華等為了測定奧沙利鉑中左旋異構(gòu)體的含量，建立了手性分離方法，色譜柱為Chiralcel OC-H，流動相為甲醇-乙醇( 68 :3

39、2) ，檢測波長250nm，溶液用水配制。結(jié)果奧沙利鉑與左旋異構(gòu)體之間的分離度大于2.0，最低檢測限為1.5 ng /10L49。余邦良等采用相同的色譜柱，用水和流動相2種溶劑溶解樣品，考察溶劑對色譜峰的影響，發(fā)現(xiàn)用水溶解時，奧沙利鉑和奧沙利鉑外消旋體分離度為1.4，峰形不好，有倒峰; 而用流動相溶解時，奧沙利鉑和左旋異構(gòu)體的分離度為3.4，色譜圖峰形好,理論板數(shù)和分離度均符合要求50。歐洲藥典6.0 和英國藥典2008 版中測定奧沙利鉑左旋異構(gòu)體采用Chiralcel OC 柱( 250×4.6mm) ，柱溫40，流動相是乙醇-甲醇( 3:7) ，流速0.3 mL /min，檢測波

40、長254 nm，樣品用甲醇配制。奧沙利鉑的保留時間14 min，左旋異構(gòu)體是16 min，兩者之間的分離度大于1.5，左旋異構(gòu)體的限度為0.1%36-37。2.2 舒鉑 楊小明等采用Chirobiotic R 手性柱( Astec，250mm×4.6 mm，5m)離舒鉑及其S-異構(gòu)體，柱溫30，流動相為0.1% 三乙胺溶液( 用乙酸調(diào)節(jié)pH= 6.8)-異丙醇( 55: 45) ，流速0.5 mL /min，檢測波長210 nm。舒鉑的保留時間是14.7 min，S-異構(gòu)體是17.5 min，兩者之間分離度為2.1，S-異構(gòu)體的檢測限是0.2 ng /10L51。2.3 舒鉑J.We

41、link 等采用了常規(guī)的ODS 柱分離了洛鉑的2 個非對映異構(gòu)體LP-D1 和LP-D2，具體方法見1.6 節(jié)。3 結(jié)論 分析方法是藥物研究過程中的一個重要組成部分，本文就目前已進入臨床及部分正進行臨床試驗的鉑類抗癌藥物的化學(xué)分析方法進行了綜述。鉑類抗癌配合物的化學(xué)分析方法主要有熾灼殘渣檢查法、高效液相色譜法、薄層層析法、紫外-可見光譜法及毛細管電泳法等，其中，高效液相色譜法因分析速度快、分離效率高、檢測靈敏度高、檢測自動化、適用范圍廣等優(yōu)點，已成為近年來鉑類抗癌配合物的最主要的化學(xué)分析方法。 參考文獻：1陳竹紅.鉑類抗腫瘤藥物的發(fā)展歷程及臨床評價J.中國藥業(yè)，2009，18( 5) : 62

42、.2顏冬梅，李文鈞，彭小英.鉑類抗腫瘤藥物的研究近況J.中國藥房，2005，16(13) : 1022-1025.3劉偉平，張永俐，孫加林.鉑類抗癌藥物展望 J.貴金屬，2005，26(1) : 47-52.4孫舒婷,馬洪敏，陳欣,等.現(xiàn)代分析技術(shù)在藥物分析中的研究與應(yīng)用J.分析測試技術(shù)與儀器，2007,13(4) : 229 - 235.5盧慧斌，肖靜華.HPLC 在藥物分析中的應(yīng)用J.內(nèi)蒙古科技與經(jīng)濟，2003(4) : 105.6龍朝陽，俞英.高效液相色譜法在我國藥物分析中的應(yīng)用展望J.廣州醫(yī)藥，2000,31( 4) : 75-77.7康自華，陽小成，陳婷.高效液相色譜法在藥物分析中的

43、應(yīng)用 J.廣東微量元素科學(xué)，2006，13( 8) : 18-22.8Hasson H，Warshawsky A.Hig-performance liquid chromatographic determination of cis-diamminedichloroplatinum(II) (cisplatin) as the o-phenylenediamine complex.J.Journal of Chromatography，1900，530: 219-221.9郁韻秋，吾敏之，毛玉新，等.HPLC 測定順鉑注射液的含量J.中國藥學(xué)雜志，1994，29( 5) : 296 - 297

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