菌種抗生素的抗性檢查標準操作規(guī)程

1、菌種抗生素的抗性檢查標準操作規(guī)程依據(jù)：中華人民共和國藥典2005年版第三部。適用于大腸桿菌表達的重組人基因工程產(chǎn)品。目的：驗證該菌種的抗牛素抗性是否與原始菌株相符。原理：該菌種所攜帶的覓組質(zhì)粒含冇氨節(jié)青霉素抗性基因，在含冇氨節(jié)青霉素 的13瓊脂培養(yǎng)基上能夠生長。責任：檢定人員。內(nèi)容：1材料1. 1材料1. 1. 1菌種：pbv888/dii5q,來源于主種了批或工作種了批。1. 1. 2注射用水：符合中華人民共和國藥典2005年版的要求。1. 1. 3藥品氯化鈉nacl分析純瓊脂粉分析純酵母粉0x0id蛋剛東0x0td氨節(jié)青霉素c16h19n3o4s分析純無水乙醇ch3ch2oh分析純1. 1

2、. 4器皿三角燒瓶(1l)、量筒(500ml 1000ml)燒杯(500ml)平皿、鹽水瓶(250ml.500ml、 1000ml)1. 1. 5其它材料線繩、牛皮紙、硫酸紙、剪刀、接種環(huán)、煤氣燈、脫脂棉。1. 2設(shè)備恒溫培養(yǎng)箱iig303-5b 型湖北省黃石市醫(yī)療器械廠生物安全臺ii級a型扭力天平tn-100b安徽蚌埠凈化設(shè)備廠上海第二天平廠2方法2. 1準備工作2. 1. 1生產(chǎn)環(huán)境：在十萬級潔凈間中進行。場地摘卜“清場合格”標志牌， 掛上“使用中”標志牌。2. 1. 2器皿的潔凈要求玻璃器血經(jīng)本室洗刷組處理后，用二層硫酸紙、一層牛皮紙包好，用線繩系緊, 送高壓滅菌(121.3c, 60分

3、鐘)。脫脂棉用硫酸紙、牛皮紙包好，1213c60分鐘 高壓滅菌。2. 1. 3. 1確認扭力天平運行狀態(tài)良好，已掛有“備用”標志牌。2. 1. 3. 2確認恒溫培養(yǎng)箱運行狀態(tài)良好，已掛有“運行”標志牌。2. 1. 3. 3確認生物安全臺運行狀態(tài)良好，已掛有“備用”標志牌。2. 1. 4配液2. 1. 4. 1lb瓊脂培養(yǎng)基的配制(500ml)摘下扭力天平“備用”標志牌，掛上“運行”標志牌。用扭力天平準確稱取酵 母粉2.5克，蛋白月東5克,nac15克，瓊脂粉10克，倒入500ml燒杯中,加入400ml 注射用水，用玻棒攪勻溶解，定容至500ml,混勻，倒入1l三角瓶中，分別用二層 硫酸紙和一層

4、牛皮紙包瓶口，用線繩系緊，115.6c, 30分鐘高壓滅菌。貼上標簽, 標明液體名稱、批號、配制日期，備用。2. 1. 4. 2 75%酒精 1000ml用量筒量取750ml無水乙醇，加入250ml無菌注射用水，置1000ml鹽水瓶屮， 搖勻，標明液體名稱、批號、濃度、日期，室溫備用。2. 1. 5 lb瓊脂平板培養(yǎng)基的制作摘卜生物安全臺“備用”標志牌，掛上“運行”標志牌，用75%酒精棉擦拭 臺內(nèi)，接通電源。打開電機，無菌風吹30分鐘，待已滅菌lb瓊脂培養(yǎng)基500ml冷 卻到50°c左右，加入25mg氨節(jié)青霉素，輕輕搖勻，倒平板，每皿20-30ml,待培 養(yǎng)基冷卻后，貼上標簽，并注明

5、名稱、批號、配制日期，置37°c孵箱中孵育，判定 合格后置于4°c冰箱屮保存，待用。2. 3操作步驟2. 3. 1在生物安全臺中，將接種環(huán)用火焰滅菌并冷卻后，用接種環(huán)取一環(huán)菌種，劃線接種lb平板培養(yǎng)基。2. 3. 2將接種后的lb平板倒置培養(yǎng)，37°c培養(yǎng)24小時。2. 3. 3場地摘下“使用小”標志牌，掛“待處理”標志牌。3結(jié)果判定3. 1判定標準平板上如長岀典型的人腸桿菌菌落，說明該菌株為氨茉青霉索抗性菌。3. 2結(jié)果觀察檢測結(jié)果經(jīng)二人復核后，填寫工作記錄，注明菌種名稱、批號、檢測結(jié)果、判 定日期、工作者及復核者等。4清場4. 1配液清場4. 1. 1藥品稱量后，將藥品瓶蓋緊，放回原處。412將扭力天平處理干凈，放冋原處。摘下“運行”牌，掛上“備用”牌， 并填寫使用記錄。4. 1. 3操作臺面用專用抹布擦干凈。生物安全臺用75%酒精棉擦拭臺內(nèi)，繼 續(xù)吹10分鐘后，關(guān)閉風機，切斷電源，摘下“運行”標志牌，掛上“備用”標志 牌，并填寫使用記錄。4. 1. 4配液瓶用畢后用純化水沖洗干凈，送本室洗刷組處理。4. 2操作清場4. 2. 1將帶有細菌的平皿送高壓121.3c, 60分鐘滅菌。4. 2. 2將滅菌后平皿內(nèi)容物倒入垃圾桶中，用純化水將平皿沖洗干凈，送本 室洗刷組處理。4. 3清場結(jié)束后，由車間工序負責人或質(zhì)