熒光分光光度法測(cè)定維生素B2的含量

1、資料收集于網(wǎng)絡(luò)如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除謝謝華南師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告課程名稱：儀器分析實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：熒光分光光度法測(cè)定維生素B2的含量熒光分光光度法測(cè)定維生素B2 的含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 掌握熒光物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量測(cè)量含量的操作方法和原理；2 了解分子熒光光譜定量分析與定性分析的特點(diǎn)及區(qū)別；3 熟悉熒光光度計(jì)定量法測(cè)量軟件的數(shù)據(jù)處理。二、實(shí)驗(yàn)原理含有熒光基團(tuán)的化學(xué)物質(zhì)， 其分子吸收了輻射能成為激發(fā)態(tài)分子，再?gòu)募ぐl(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)發(fā)射光的波長(zhǎng)比吸收的入射光波長(zhǎng)更長(zhǎng)，分子熒光就是發(fā)光方式中較常見(jiàn)的光致發(fā)光。 在一定頻率和一定強(qiáng)度的激發(fā)光照射下，當(dāng)溶液的濃度很小同時(shí)光被吸收的分?jǐn)?shù)也不太大時(shí)，稀溶液體系將符合朗伯

2、- 比爾定律，該溶液所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度與溶液中這種熒光物質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系，可用公式表示：IF=2.3K'kbcI0當(dāng)入射光強(qiáng)度 I0 一定時(shí)IF=Kc以上兩式中 K' 為熒光量子效率； K 為熒光分子的摩爾吸光系數(shù)； b 為液槽厚度； c 以為熒光物質(zhì)的濃度。分子熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線法是取一定已知量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與待分析試樣溶液經(jīng)過(guò)相同的處理后，配制成一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液， 測(cè)定其熒光強(qiáng)度，并以熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制其工作曲線，再由所測(cè)獲的試樣溶液的熒光強(qiáng)度對(duì)工作曲線作圖從而求出試樣溶液中該被分析檢測(cè)物質(zhì)的實(shí)際濃度含量。此法適用于痕量分析，并且標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液的熒光強(qiáng)度

3、必須是在熒光儀已扣除空白溶液的熒光強(qiáng)度的讀數(shù)。精品文檔資料收集于網(wǎng)絡(luò)如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除謝謝維生素 B2 ， 又稱 核黃素 。分子式C17H20N4O6。它是人體必需的13種維生素之一，作為維生素B 族的成員之一，微溶于水，可溶于氯化鈉溶液，易溶于稀的氫氧化鈉溶液?？梢杂脽晒夤舛确y(cè)維生素 B2 的含量的原因 : 維生素 B2 溶液在 430440 nm 藍(lán)光的照射下，發(fā)出綠色熒光，熒光峰在 535 nm。維生素 B2 在 pH=67 的溶液中熒光強(qiáng)度最大， 在 pH=11的堿性溶液中熒光消失， 所以可以用熒光光度法測(cè)維生素 B2 的含量。該實(shí)驗(yàn)的控制條件 : 維生素 B2 在堿性溶液中經(jīng)光

4、線照射會(huì)發(fā)生分解而轉(zhuǎn)化為光黃素，光黃素的熒光比核黃素的熒光強(qiáng)的多，故測(cè)維生素 B2 的熒光時(shí)溶液要控制在酸性范圍內(nèi)，且在避光條件下進(jìn)行。熒光光譜法定量分析的理論依據(jù) : 常溫下，處于基態(tài)的分子吸收一定的紫外可見(jiàn)光的輻射能成為激發(fā)態(tài)分子， 激發(fā)態(tài)分子通過(guò)無(wú)輻射躍遷至第一激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)，再以輻射躍遷的形式回到基態(tài)， 發(fā)出比吸收光波長(zhǎng)長(zhǎng)的光而產(chǎn)生熒光。三、儀器和試劑（ 1）儀器 熒光光度計(jì)（ FL-2500）、四面通石英比色皿一個(gè)： 1cm 、1 和 2 mL 刻度移液管各一支、吸耳球、洗瓶、鏡頭紙。（2）試劑 10.0 g/ml維生素 B2 標(biāo)準(zhǔn)溶液、二次蒸餾水四、實(shí)驗(yàn)步驟（ 1） . 打開(kāi)

5、氙燈，再打開(kāi)主機(jī)，然后打開(kāi)計(jì)算機(jī)啟動(dòng)工作站并初始化儀器，預(yù)熱 30min（ 2） 儀器初始化完畢后，在工作界面上選擇測(cè)量項(xiàng)目，設(shè)置適當(dāng)?shù)膬x器參數(shù)：精品文檔資料收集于網(wǎng)絡(luò)如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除謝謝設(shè)置發(fā)射波長(zhǎng)為540 nm，在 200500范圍內(nèi)掃描，紀(jì)錄熒光發(fā)射強(qiáng)度和激發(fā)波長(zhǎng)的關(guān)系曲線，便得到激發(fā)光譜。從激發(fā)光譜圖上可以找出其最大激發(fā)波長(zhǎng)為440nm（ 3）標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品的熒光測(cè)定將激發(fā)波長(zhǎng)固定在440nm，熒光發(fā)射波長(zhǎng)為540nm。測(cè)量上述系列標(biāo)準(zhǔn)維生素 Bz 溶液的熒光發(fā)射強(qiáng)度。以溶液的熒光發(fā)射強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。在同樣條件下測(cè)定未知溶液的熒光強(qiáng)度， 并由標(biāo)準(zhǔn)

6、曲線確定未知試樣中維生素 Bz 的濃度，計(jì)算藥片中的維生素 Bz 的含量。（ 4）退出主程序，關(guān)閉計(jì)算機(jī)，先關(guān)主機(jī)，最后關(guān)氙燈。五 數(shù)據(jù)記錄和結(jié)果分析（見(jiàn)最后一頁(yè)）1. 用標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的熒光強(qiáng)度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。Y=A+B*XA=7.664B=134.892、未知樣品濃度的測(cè)定根據(jù)待測(cè)液的熒光強(qiáng)度，從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上求得其濃度，計(jì)算出試樣中含量。C 樣品 =0.576%六、思考題 ：1. 試解釋熒光光度法較吸收光度法靈敏度高的原因。答：熒光光度法：對(duì)于以給定物質(zhì)，當(dāng)激發(fā)光波長(zhǎng)和強(qiáng)度一定時(shí)，熒光強(qiáng)度只與溶液濃度有關(guān)：I=Kc 。由于自猝滅或者自吸效應(yīng)，此線性關(guān)系只在極稀的溶液中成立。本次實(shí)驗(yàn)溶液較稀，負(fù)效應(yīng)小。熒光光度法是垂直檢測(cè)，有效避免了激發(fā)光源的干擾。吸光光度法：精品文檔資料收集于網(wǎng)絡(luò)如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除謝謝吸光度與溶液濃度的關(guān)系符合朗伯比爾定律： I= bc, 其光強(qiáng)度還與吸收池的厚度有關(guān)。而且測(cè)定過(guò)程中無(wú)法避免激發(fā)光源的影響。綜上所述，熒光光度法較吸收光度法靈敏度高。2. 維生素 B2 在 pH67 熒光最強(qiáng)，本實(shí)驗(yàn)為何在酸性溶液中測(cè)定？答：因?yàn)榫S生素 B2 在堿性溶液中經(jīng)光線照射，會(huì)發(fā)生分解而轉(zhuǎn)化為光黃素，后者的熒光比核黃素的熒光強(qiáng)的多。 因此，測(cè)量時(shí)溶液要控制在酸性范圍內(nèi)， 且必須在避光條件下進(jìn)行。3 如何減小