霉菌和酵母菌檢測(cè)

1、資料收集于網(wǎng)絡(luò)如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 謝謝霉菌和酵母菌檢測(cè)1 設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：1.1 冰箱： 2 5。1.2 恒溫培養(yǎng)箱： 28±1。1.3 均質(zhì)器。1.4 恒溫振蕩器。1.5 顯微鏡： 10×100×。1.6 電子天平：感量 0.1g。1.7 無菌錐形瓶 :容量 500ml、 250ml。1.8 無菌廣口瓶： 500ml 。1.9 無菌吸管： 1ml( 具0.01ml刻度 )、10ml(具0.1ml刻度 )。1.10 無菌平皿：直徑 90mm。1.11 無菌試管： 10mm× 75mm。1.12 無菌牛

2、皮紙袋、塑料袋。2 培養(yǎng)基和試劑2.1 馬鈴薯 -葡萄糖 -瓊脂培養(yǎng)基：見附錄A 中 A.1。2.2 孟加拉紅培養(yǎng)基：見附錄A 中 A.2。3 操作方法3.1 試驗(yàn)前準(zhǔn)備將供試品及所有已滅菌的平皿、錐形瓶、勻漿杯、試管、量筒、吸管（1ml、10ml）、稀釋劑等移至操作室內(nèi)。準(zhǔn)備好足夠用量，避免操作中出入操作間。開啟無菌室紫外殺菌燈和潔凈工作臺(tái)的空氣過濾裝置30min。操作人員用肥皂洗手，關(guān)閉紫外殺菌燈，進(jìn)入緩沖間，換工作鞋，用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴好無菌衣、帽、口罩、手套等。操作前先用乙醇棉球擦手、工作臺(tái)面，再用乙醇棉球擦拭供試品瓶、盒、袋等的開口處周圍，待干后用滅菌剪刀或鑷子將供試

3、品啟封。3.2 樣品稀釋液的制備精品文檔資料收集于網(wǎng)絡(luò)如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 謝謝根據(jù)供試品的理化特性與生物學(xué)特性，采取適宜的方法制備樣品稀釋液。樣品稀釋液制備若需用水浴加溫時(shí)， 溫度不應(yīng)超過45。樣品稀釋液從制備至加入檢驗(yàn)用培養(yǎng)基，不得超過 1 小時(shí)。固體和半固體樣品稱取 25g樣品至盛有 225ml滅菌蒸餾水的錐形瓶中，充分振搖，即為 1:10稀釋液?；蚍湃胧⒂?225ml無菌蒸餾水的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打 2min，制成 1:10的樣品勻液。液體樣品以無菌吸管吸取 25ml樣品至盛有 225ml無菌蒸餾水的錐形瓶（可在瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻

4、液。3.3 霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)用 1ml無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液 1ml，沿管壁緩慢注于盛有 9ml 稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。按操作程序，制備 10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次 1ml 無菌吸管或吸頭。根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇 2個(gè) 3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行 10倍遞增稀釋時(shí)，吸取 1ml樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取 1ml空白稀釋液加入兩個(gè)無菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。及時(shí)將 15ml20ml冷卻至

5、 46的馬鈴薯 -葡萄糖 -瓊脂培養(yǎng)基或孟加拉紅培養(yǎng)基 （可放置于 46±1恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。3.4 培養(yǎng)待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，28±1培養(yǎng) 5d，觀察并記錄。3.5 菌落計(jì)數(shù)肉眼觀察，必要時(shí)可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母數(shù)。以菌落形成單位（ colony forming units ， CFU）表示。選取菌落數(shù)在 10CFU 150CFU的平板，根據(jù)菌落形態(tài)分別計(jì)數(shù)霉菌和酵母數(shù)。霉菌蔓延生長(zhǎng)覆蓋整個(gè)平板的可記錄為多不可計(jì)。菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。3.6 結(jié)果與報(bào)告精品文檔資料收集于網(wǎng)絡(luò)如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 謝謝計(jì)

6、算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)計(jì)算。若所有平板上菌落數(shù)均大于150CFU，則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。若所有平板上菌落數(shù)均小于10CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。若所有稀釋度平板均無菌落生長(zhǎng)，則以小于 1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算； 如為原液，則以小于 1計(jì)數(shù)。報(bào)告菌落數(shù)在 100以內(nèi)時(shí)，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告。菌落數(shù)大于或等于 100時(shí)，前 3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用 0代替位數(shù)來表示結(jié)果；也可用10的指數(shù)形式來表示，此時(shí)也按“四舍五入”

7、原則修約，采用兩位有效數(shù)字。稱重取樣以 CFU/g為單位報(bào)告，體積取樣以 CFU/ml 為單位報(bào)告，報(bào)告或分別報(bào)告霉菌和 /或酵母數(shù)。精品文檔資料收集于網(wǎng)絡(luò)如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除 謝謝附錄 培養(yǎng)基和試劑1 馬鈴薯 -葡萄糖 -瓊脂培養(yǎng)基1.1 成分馬鈴薯 (去皮切塊 )300g葡萄糖20.0g瓊脂20.0g氯霉素0.1g蒸餾水1000ml1.2 制法將馬鈴薯去皮切塊，加 1000ml蒸餾水，煮沸 10min 20min。用紗布過濾，補(bǔ)加蒸餾水至1000ml。加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝后，121滅菌 20min。傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養(yǎng)基中2 孟加拉紅培養(yǎng)基2.1 成分蛋白胨5.0g葡萄糖10.0g磷酸二氫鉀1.0g硫酸鎂（無水）0.5g瓊脂