液相流動(dòng)相緩沖鹽選擇

1、下面內(nèi)容綜合了 Agilent和網(wǎng)上查到的一些資料：一般來(lái)說(shuō)，反相HPLC的流動(dòng)相包括有機(jī)相和水相，有機(jī)相常用的為色 譜甲醇和乙月青，不太常用的還有四氫吠喃和異丙醇。 甲醇有其性價(jià)比的優(yōu)勢(shì)，但 是甲醇活性高，可能與某些樣品發(fā)生反應(yīng)，而且甲醇在低波長(zhǎng)下有紫外吸收， 會(huì) 降低分析方法的靈敏度；乙月青雖然價(jià)格很高，毒性比甲醇大，但是洗脫能力比甲 醇強(qiáng)，很少與樣品發(fā)生反應(yīng)，用作流動(dòng)相系統(tǒng)壓力要比甲醇低很多， 且截止波長(zhǎng) 比甲醇低20nmi增加了檢測(cè)出在低波長(zhǎng)下才有吸收的雜質(zhì)的可能性，所以我們 一般傾向于多用乙月青，少用甲醇。但是當(dāng)樣品峰形不好或者分離不好時(shí)，更換溶劑是一個(gè)很好的選擇，因?yàn)椴煌娜軇┛商?/p>

2、供不同的選擇性。在反相色譜中，流動(dòng)相中水相的pH和離子強(qiáng)度在開(kāi)發(fā)對(duì)條件微小變化 不敏感的耐用方法中非常重要。對(duì)于離子型化合物，典型樣品的保留隨pH改變而明顯變化，因此控制pH對(duì)于保留和選擇性的穩(wěn)定非常重要，通常在 pH24的 條件下，保留時(shí)間對(duì)pH的微小改變穩(wěn)定性最高，因此建議將這一 pH范圍作為大 多數(shù)樣品方法開(kāi)發(fā)的起始 pH,包括堿性化合物和一般的弱酸?？紤]到重現(xiàn)性， 所用的pH應(yīng)高于或低于待分析物pKa或pKb上下一個(gè)pH單位。當(dāng)待分析物pKa 或pKb未知時(shí)，應(yīng)測(cè)試一種以上流動(dòng)相pH (如和緩沖鹽溶液)，可提供最好結(jié)果。對(duì)流動(dòng)相的優(yōu)化主要體現(xiàn)在水相上。流動(dòng)相 pH值對(duì)色譜分離的影響有多

3、鐘 方式，根據(jù)待分析物的結(jié)構(gòu)性質(zhì)，pH可能影響選擇性、峰形和保留。如果是非 極性較強(qiáng)或中性的化合物，pH對(duì)分離度和保留的影響一般不明顯。如果是可離 子化的化合物，如酸或堿，保留因子和選擇性隨 pH改變非常明顯。(1)酸性分析物，應(yīng)選擇低pH緩沖液流動(dòng)相，以防止分析物離子化。 了解分析物的pKa,才能有效的選擇流動(dòng)相pHo緩沖范圍應(yīng)在其緩沖液離子 pK 值土 1 pH單位，使流動(dòng)相的優(yōu)化具有一定的靈活性。例如，醋酸鹽的pKa為，緩沖范圍為0(2)堿性化合物，在高pH條件下才能得到其非離子形態(tài)，但這對(duì)色譜 柱不利。通常許多堿性化合物在低 pH條件的保留就已經(jīng)滿足要求了，所以可選 擇低pH條件。如果

4、選擇高pH條件，則注意需選擇耐強(qiáng)堿的色譜柱。水里可以加酸、加堿、加鹽，從而改變 pH值、改善峰形、提高分離度。 常用的酸有磷酸、三氟乙酸、甲酸、乙酸、高氯酸、甲基磺酸等。單純做液相時(shí)， 低波長(zhǎng)下磷酸最合適；而做液質(zhì)時(shí)首選三氟乙酸，或甲酸、乙酸。開(kāi)發(fā)液相分析 方法時(shí)流動(dòng)相可首選 %勺磷酸水溶液，然后再以此為基礎(chǔ)做優(yōu)化。在單獨(dú)用酸不 行的時(shí)候再考慮使用緩沖鹽，緩沖鹽的選擇原則是：簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、緩沖能力強(qiáng)、 配制簡(jiǎn)單，需要調(diào)pH值時(shí)要有相應(yīng)的酸或堿。常用的緩沖鹽是磷酸鹽，主要是 鉀鹽和鈉鹽，還有醋酸鹽，常用的鹽濃度在 1020mMfc右(根據(jù)實(shí)際情況，有時(shí) 可以選擇更低或更高濃度，建議最高濃度不超過(guò)

5、50mM。卜表是 Waters提供的一個(gè)資料，常規(guī)實(shí)驗(yàn)室建議使用的緩沖鹽體系。緩沖鹽/流pKa緩沖范 圍揮 是發(fā) 否MSB備注動(dòng)相改 性劑性（土 1pH）容TFA-是是離子對(duì)試劑，能夠抑 制MS信號(hào)，通常使用的 濃度范圍%乙酸-是是同乙酸於用使用 具有最大的緩沖能力，通 常使用的濃度范圍%甲 酸-是是同甲酸先用使用 具有最大的緩沖能力，通 常使用的濃度范圍%乙 酸鹽（錢 鹽）是是通常使用110mMs 度，注意鉀鹽和鈉鹽是非 揮發(fā)性的甲 酸鹽（錢 鹽）是是通常使用110mMs 度，注意鉀鹽和鈉鹽是非 揮發(fā)性的磷 酸鹽1否否傳統(tǒng)的低pH緩沖體 系，UV透光度很好磷酸鹽2否否當(dāng)pH超過(guò)7時(shí)，降 低操

6、作溫度/緩沖鹽濃度 以及使用保護(hù)柱可以延 長(zhǎng)色譜柱壽命磷酸鹽3否否當(dāng)pH超過(guò)8時(shí)，降 低操作溫度/緩沖鹽濃度4以及使用保護(hù)柱可以延長(zhǎng)色譜柱壽命4-甲基嗎啡琳通常使用濃度為10mME更少通常使用濃度為碳 酸氫錢(HCO-)(NH 4+)510mM用于MSX作時(shí)保持離子源溫度超過(guò)150C) 0用氨水或乙酸 調(diào)節(jié)pH值，在pH10時(shí)具 有很好的緩沖能力。通常使用濃度為酸俊110mM通常使用濃度為酸俊110mM降低溫度，減少濃度 并使用色譜柱來(lái)延長(zhǎng)柱壽命CAPSO (3-環(huán)己胺基-2-羥基丙磺 酸兩性離子緩沖液，同 乙月青互溶，通常使用濃度 為110mM氣味小Gly cine 甘兩性離子緩沖液，比 使用硼酸鹽對(duì)柱子的損 傷更小些1- 甲基哌 噬CAP S乙胺（乙 酸鹽）叱 咯烷通常使用濃度為是 是110mM兩性離子緩沖液，同否 否 乙月青互溶，通