28-2ApoB設計開發(fā)方案

1、長沙海潤生物技術有限公司泗潤VN5海潤斯團I G 曰 U Z U U LJ P設計開發(fā)方案編號：HR-SHSJ0028 項目名稱載脂蛋白B測定試劑盒（免疫比濁法）（簡稱：ApoB）血漿脂蛋白中的蛋白質部分稱為載脂蛋白,主要分A、1 C、D E五類，主要在肝（部.分在小腸）合成，載脂蛋白是構成血漿脂蛋白的重要組分。基本功能是運載脂類物質及穩(wěn)定脂蛋白的結構，某些載脂蛋白還有激活脂蛋白代謝酶、識別受體等功能。按ABC系統命名。ApoB在肝臟和小腸粘膜上皮細胞合成。是LDL受體的配體，其負責 LDL在體內的清理、參與VLDL的合成分泌、向組織運輸脂類和膽固醇等。故ApoB反映了富含甘油三酯的極低密度脂

2、蛋白膽固醇、中間密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇等致動脈硬 化脂顆粒的數目，可更衣?的反映小而密的LDL-C的數量，代表致動脈硬化的因素。血清中APOB勺正常彳！為（1.00-1.76）g/L（各醫(yī)院的測試方法不同，參考值不完全相同）。1）冠狀動脈粥樣硬化性心臟病 冠狀動脈粥樣硬化性心臟病 （Coronary Atherosclerotic heart disease CHD）是由多種遺傳因素與環(huán)境因素共同作用所致，使冠狀動脈呈現粥樣硬化的一種疾病，目前 已成為威脅當代人類健康及生命的重要疾病。既往針對冠心病相關危險因素及預防進行 了大量的研究，明確與冠心病發(fā)病及預后相關的因素中，已公認血

3、脂異常是主要的危險因素。早期研究主要集中在脂蛋白中脂質成分，幾乎所有降脂治 療的臨床指南均主要基于血漿膽固醇水平制定。然而攜帶膽固醇的LDL具有不穩(wěn)定性，產品概述常出現與實際病人測量不一致的情況。1998年Williams研究認為血漿ApoB是冠狀動脈粥樣硬化風險度的良好指標，血漿ApoB水平升高與冠心病密切相關，因此血漿ApoB水平與冠狀動脈病變程度的關系口益受到人們的關注。Faraj等對肥胖婦女的研究中將ApoB與傳統因子比較發(fā)現其更能早期反應炎癥的發(fā)生，推測ApoB可能作為冠心病和糖尿病的早期風險因子。Mugii等對611名2型糖尿病白種人患者的研究發(fā)現，ApoB與冠狀動脈鈣化有顯著相關

4、性，而LDL-c沒有特異性差異，研究認為在2型糖尿病中，ApoB表達水平能特異性的作為評估動脈粥樣硬化和心血管疾病的風險因子。Motta等對意大禾J 3288例老年人的回顧性分析發(fā)現ApoB是動脈粥樣硬化的診斷指標，但是并不能單獨作為預防心腦血管并發(fā)癥的風險因子。故最近人們更加關注 ApoB/ApoAl比值與心血管疾病的相關T研究。Talmud等對2508例男性隨訪 6年的研究結果顯示：TC, TG, ApoB, ApoAl,ApoB/ApoAl比值、LDL-c, HDL-c均能預測冠狀動脈事件的發(fā)生，但ApoB/ApoAl值的預測能力最弓雖。一個超過170 000瑞典人的前瞻性心血管流行病學

5、研究 （AMORIS研究）顯示作為脂蛋白相關的血管疾病危險總結指數，ApoB/ApoAl比值優(yōu)于任一項膽固醇比值，是所有缺血性事件最強最特異的指標，Goswami等對100名患有冠脈疾病患者與100名正常對照組一比較發(fā)現，在鑒定冠脈疾病風險因子中ApoB/ApoAl比值明顯優(yōu)于TC/HDL, TC-HDL/HDL,LDL,TC/HDL ,研究指出 ApoB/ApoAl比值可以替代其他脂質比值來評估冠脈疾病患者 ApoAl , ApoB/ApoAl 比值、LDL-c, HDL-c均能預測冠狀動脈事件的 發(fā)生，但ApoB/ApoAl值的預測能力最強。故今后 ApoB/ApoAl比值可能對于冠心病患

6、病 風險及其預后具有更高的預測價值。2）高血壓高血壓的發(fā)病的機理很多.其中脂質代謝紊亂是其病因之一。高血壓時，ApoAl下降,ApoB明顯升高，ApoAl/ ApoB比值明顯下降，此三項指標均與正常對照組差異有顯著性， 相關分析結果表明與 ApoAl與HDL ApoB與LDL具有顯著相關性，ApoA1/ApoB與TC HDL LDL相關性也較顯著。3）糖尿病糖尿病患者不僅空腹血糖明顯增高，而且存在并發(fā)心血管疾病的危險因素一般情況 下，糖尿病患者 ApoB升高（與正常對照組差異有顯著性 ），ApoAl及ApoAl/ ApoB下降， 并且隨著病史的延續(xù)而有逐漸加重的趨勢糖尿病患者常伴有心腦并發(fā)癥及

7、視網膜病變， 因此ApoAl和ApoB測定對并發(fā)癥的診斷、預后有一定的參考價值。4）肝臟疾病肝臟是Apo代謝的中心器官，ApoAl、ApoB100由肝臟合成，當肝臟損害時，其合成 功能降低，因而血清中ApoAl、ApoB含量下降，其下降程度與肝細胞損害程度成正相關。 一般情況下患急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、膽道梗阻時ApoAl明顯下降（PV0.05），患膽適梗阻、肝硬化時 ApoB明顯下降（PV0.05）,而患急、慢性肝炎時 ApoB下降，但與正 常對照組比較差異無顯著性。5）腎病在腎病患者中 ApoAl、ApoAl/ ApoB均明顯低于健康人（Pv0. O5）, ApoB在男 性患者有明顯增

8、高（PV 0.05）。在女性患者中升高不顯著.但女性患者的ApoA1/ApoB較正 常對照組差異有顯著性，說明腎臟疾病患者中抗動脈粥樣硬化因子降低，而致病因子升 高，因此對腎臟疾病的診治進程中，應早期觀察Apo的變化，在治療原發(fā)病的同時，及時采取相應預防措施，消除或降低引起心血管合并癥的危險因素，延長患者的生存時間。對于ApoB的檢測，暫時還沒有決定性的方法，在臨床上，ApoB常規(guī)測定方法主要為各種免疫化學方法，如單向免疫擴散法、電免疫分析、免疫濁度法等。其中，比濁法 為最常用的方法，簡單快速，可以自動化批量分析，目前，國內外生成的試劑盒大多采 用此法，其原理為在適宜的條件下，樣本中Apo B

9、與其相應抗體相遇，形成抗原 -抗體復合物，產生一定濁度。該濁度的高低在一定量抗體存在時與抗原的含量成正比?？衫?校準濃度和其生成的濁度在340nm處的吸光度建立吸光度與濃度的校準曲線，從而計算出樣本中Apo B的含量。©長沙海潤生物技術有限公司泗潤VfiUI引用標準 和規(guī)范GB/T 191-2009包裝儲運圖示標志YY/T 0466.1-2009醫(yī)疔器械用于醫(yī)疔器械標簽、標記和提供信息的符號第1部分GB/T 26124-2011臨床化學體外診斷試劑（盒）全國臨床檢驗操作規(guī)程（第 3版）體外診斷試劑分析性能評估系列指導原則（征求意見稿）國食藥監(jiān)械2007229號體外診斷試劑注冊管理辦

10、法（試行）國食藥監(jiān)械2007240號體外診斷試劑臨床研究技術指導原則國食藥監(jiān)械2007240號體外診斷試劑說明書編寫指導原則國家食品藥品監(jiān)督管理局令第10號醫(yī)疔器械說明書、標簽和包裝標識管理規(guī)定產品構成試劑盒由液體雙試劑組成試劑1主要成分：三羥甲基氨基甲烷、PEG 600R曲拉通X-100等。試劑2主要成分：抗人 ApoB抗體、三羥甲基氨基甲烷等。預期用途本試劑盒用于體外定量測定人體血清中載脂蛋白B （ApoB）的含量，臨床上主要用于評價心血管疾病風險。主要技術參數或指標1、試劑空白：試劑空白吸光度A空白W0. 200 （37C,光徑1cm, 340nm）,2、分析靈敏度：濃度為 1.10g/

11、L時，吸光度差值 AA>0.300;3、準確度：質控品測試，測定結果在質控范圍內；4、精密度：重復性 CV （% W5%批間差w 8%5、線性范圍：在（0.2-2.5 ） g/L線性范圍內，r >0.990 o在0.6-2.5 ） g/L范圍內 的相對偏差不超過 15%測定結果為（0.2-0.6 ） g/L時的絕對偏差不超過 0.09g/L 。6、穩(wěn)定性：原包裝試劑盒在2c8c密閉避光貯存，有效期為 12個月。開瓶后，28 c避光儲存可穩(wěn)定 2周。檢驗原理本試劑盒采用免疫比濁法，在適宜的條件下，樣本中Apo B與其相應抗體相遇，形成抗原-抗體復合物，產生一定濁度。該濁度的高低在一定

12、量抗體存在時與抗原的含量成 正比?？衫眯蕽舛群推渖傻臐岫仍?40nm處的吸光度建立吸光度與濃度的校準曲線，從而計算出樣本中 Apo B的含量。實施方案本項目開發(fā)實施計劃周期為：2013年07月01日起2015年09月30日止，具體進度安排如下：1、2013年07月01日8月30日完成主要原材料的研究、篩選與采購工作。2、2013年09月05日前完成主要原材料的驗收檢驗工作。3、2013年09月20日前完成配方和工藝的選定，樣品小試及試生產驗證工作。4、2013年11月20日前完成中試生產放大與驗證工作。長沙海潤生物技術有限公司I Q |海潤*團5、2015年01月31日前完成分析性能評估、穩(wěn)定性研究及機型驗證。6、2014年11月10日2014年12月31日間完成注冊及臨床樣品的生產與自檢。7、2015年03月31日前完成產品的注冊檢驗。8、2015年05月31日前完成產品的臨床試驗。9、2015年06月30日前完成注冊申報資料