潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)測(cè)規(guī)程

1、潔凈區(qū)環(huán)境檢測(cè)規(guī)程1 目的規(guī)定潔凈區(qū)的控制指標(biāo)和檢測(cè)方法，有效的控制潔凈車間和實(shí)驗(yàn)室潔凈區(qū)環(huán)境的潔凈度， 滿足生產(chǎn)和檢測(cè)環(huán)境的要求。2 范圍本規(guī)程適用本公司潔凈區(qū)環(huán)境的潔凈度檢驗(yàn)。3 職責(zé)化驗(yàn)員負(fù)責(zé)潔凈環(huán)境檢測(cè)各項(xiàng)技術(shù)要求的檢驗(yàn)。4. 工作程序4.1 檢驗(yàn)項(xiàng)目溫度、濕度、壓差、風(fēng)速（換氣次數(shù)） 、塵埃粒子數(shù)、菌落數(shù)。4.2 溫度、濕度4.2.1 要求潔凈區(qū)溫度（18-28）C,相對(duì)濕度（45-65） %4.2.2 儀器與設(shè)備 溫濕度計(jì)溫濕度計(jì)必須在檢定合格周期內(nèi)4.2.3 操作方法目測(cè)溫濕度計(jì)4.2.4 測(cè)定頻次1次/班4.3 壓差4.3.1 要求潔凈室與室外壓差10Pa,潔凈室與非潔凈室5P

2、a,不同級(jí)別潔凈室之間5Pa。4.3.2 儀器與設(shè)備微壓計(jì)微壓差計(jì)或手持式數(shù)顯壓差計(jì)須在檢定合格周期內(nèi)。4.3.3 操作方法用微壓計(jì)或數(shù)顯壓差計(jì)測(cè)試各室的靜壓力,由兩室靜壓力之差,為靜壓差。4.3.4 測(cè)定頻次1 次/ 月4.4 換氣次數(shù) / 風(fēng)速441要求如表1所示：表1各級(jí)別潔凈區(qū)風(fēng)速的技術(shù)指標(biāo)級(jí)別100級(jí)10000級(jí)100000級(jí)300000級(jí)風(fēng)速水平層流> 0.4m/s垂直層流> 0.3換氣次數(shù)> 25> 15> 12次/h儀器與設(shè)備風(fēng)速計(jì)風(fēng)速計(jì)必須在檢定合格周期內(nèi)。操作方法用風(fēng)速計(jì)距風(fēng)口下25cm處測(cè)量風(fēng)速，采樣點(diǎn)為風(fēng)口的四個(gè)頂角及中心位置（不少 于5點(diǎn)

3、）。計(jì)算5個(gè)點(diǎn)風(fēng)速平均值，為一個(gè)風(fēng)口的風(fēng)速。443.2換算公式:換氣次數(shù)刀（高效送風(fēng)口風(fēng)速X高效送風(fēng)口面積） 被測(cè)房間體積444測(cè)定頻次:1次/月4.5塵埃粒子數(shù)要求如表2所示：表2各級(jí)別潔凈區(qū)塵埃粒子數(shù)的技術(shù)指標(biāo)級(jí)別100級(jí)10000級(jí)100000級(jí)300000級(jí)塵埃數(shù)> 0.5 卩 m< 3500<350000<3500000<10500000粒/m3> 5.0 卩 m0< 2000<20000<60000儀器與設(shè)備塵埃粒子計(jì)數(shù)器內(nèi)容（1）用塵埃粒子計(jì)數(shù)儀在高度0.8米水平面上的位置采樣，總采樣次數(shù)不少于5次（2）最少采樣點(diǎn)數(shù)目的確定如

4、3表所示:表3:最少采樣點(diǎn)數(shù)目面積2 m潔凈度級(jí)別100級(jí)10000級(jí)100000 級(jí)300000級(jí)V 1023222> 10V 204222> 20V 408222> 40 V 10016422> 100 V 200401033> 200V 400802066> 400 V1604013131000> 1000 V40010032322000> 20008002006363注：對(duì)于100級(jí)的單向流潔凈室（區(qū)），包括100級(jí)潔凈工作臺(tái)，面積指的是送 風(fēng)口表面積；對(duì)于10000級(jí)以上的單向流潔凈室（區(qū)），面積知道是房間面積。（3）采樣點(diǎn)的位置采樣點(diǎn)

5、一般在離地面0.8m高度的水平面上均勻布置。采樣點(diǎn)多余5點(diǎn)事，也可以在離地面0.8m至1.5m高度區(qū)域內(nèi)分層分布，但每層不少于 5 點(diǎn)。采樣點(diǎn)分布見(jiàn)附錄A（4）采樣次數(shù)的限定對(duì)任何小潔凈室（區(qū)）或局部空氣凈化區(qū)域，采樣點(diǎn)的數(shù)目不得小于2個(gè)，總采樣次數(shù)不得少于5次。每個(gè)采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以多余一次，且不同采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)可以不同。（5）采樣量不同潔凈度級(jí)別每次最小采樣量見(jiàn)表 4表4最小米樣量最小采樣量潔凈度級(jí)別L/次100級(jí)10000級(jí)100000級(jí)300000級(jí)> 0.5 卩 m5.662.832.832.83> 5.0 卩 m8.58.58.58.5(6) 米樣注意事項(xiàng)對(duì)于單向流

6、潔凈室(區(qū))，粒子計(jì)數(shù)器的采樣管口應(yīng)正對(duì)氣流方向；對(duì)于非單向流潔凈室(區(qū))， 粒子計(jì)數(shù)器的采樣管口宜朝上。布置采樣點(diǎn)是應(yīng)盡量避開風(fēng)口。采樣時(shí)，測(cè)試人員應(yīng)在采樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少活動(dòng)。采樣完畢后，宜對(duì)粒子計(jì)數(shù)器進(jìn)行自凈。應(yīng)采取一切措施防止采樣過(guò)程的污染。采樣結(jié)果的計(jì)算(1) 采樣點(diǎn)的平均懸浮粒子濃度 A采樣點(diǎn)的平均懸浮粒子濃度 A的計(jì)算公式:X?= i ?式中:A某一采樣點(diǎn)的平均粒子濃度，粒每立方米（粒 /m3）C 某一采樣點(diǎn)的粒子濃度（i=1,2,3，n）,粒每立方米（粒/m3） n某一采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)，次（2）平均值的均值M平均值的均值M的計(jì)算公式：M=矣?式中：的平均粒子濃度，粒每平方米

7、（粒/m3）M平均值的均值，即潔凈室（區(qū)）n），粒每平方米（粒/m3）i=1,2,3A某一采樣點(diǎn)的平均粒子濃度（L某一潔凈室（區(qū)）內(nèi)的總采樣點(diǎn)數(shù)，個(gè)（3）標(biāo)準(zhǔn)差SE標(biāo)準(zhǔn)差SE的計(jì)算公式：2 2 2 2c /（Ai - M）+ （A2-M）+ （A3-M）+? + （A?- M）SE= V? （L- 1）式中：SE-平均值均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差，粒每平方米（粒 /m3）(4) 95%置信上限(UCL95%置信上限(UCL計(jì)算公式:UCL= M+ t XSEUC平均值均值的95%置信上限，粒每平方米(粒/m3)t 95%置信上限的t分布系數(shù)，見(jiàn)表5采樣點(diǎn)數(shù)L23456789> 9t6.312.922

8、.352.132.021.941.901.86注：當(dāng)采樣點(diǎn)數(shù)多于9時(shí)，不需要計(jì)算UCL結(jié)果的判定判斷懸浮粒子的潔凈度級(jí)別應(yīng)同時(shí)滿足以下兩個(gè)條件(1) 每個(gè)采樣點(diǎn)的平均懸浮粒子濃度必須不大于規(guī)定的級(jí)別界限，即A w級(jí)別極限;(2) 全部采樣點(diǎn)的懸浮粒子濃度平均值均值的95 %置信上限必須不大于規(guī)定的級(jí)別極限，即UCW級(jí)別界限。測(cè)定頻次4.6沉降菌461要求(1) 判定標(biāo)準(zhǔn)如表6所示潔凈度級(jí)別100級(jí)10000級(jí)100000 級(jí)沉降菌/皿，0.5h< 1< 3< 10(2) 最少采樣點(diǎn)數(shù)目最少采樣點(diǎn)數(shù)目見(jiàn)表3(3) 采樣點(diǎn)位置工作區(qū)采樣點(diǎn)位置離地面0.8m1.5m (略高于工作面

9、) 可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)。采樣點(diǎn)位置分布見(jiàn)附錄A(4) 最少培養(yǎng)皿數(shù)在滿足最少采樣點(diǎn)數(shù)目的同時(shí)，還需滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見(jiàn)表7潔凈度級(jí)別最少培養(yǎng)皿數(shù)(？90mm1001410000210000023000002(5) 采樣次數(shù)每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次462儀器與設(shè)備儀器設(shè)備包括：培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器(1) 培養(yǎng)皿：采用？90mM 15mn規(guī)格的培養(yǎng)皿(2) 培養(yǎng)基：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基或沙氏培養(yǎng)基。配制方法見(jiàn)附錄B(3) 恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對(duì)恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行校驗(yàn)。463測(cè)試步驟(1) 測(cè)試前，培養(yǎng)皿表面需嚴(yán)格消毒（2）將已制備好的培養(yǎng)皿按采樣要求逐個(gè)放置，

10、然后從里到外逐個(gè)打開培養(yǎng)皿蓋，使 培養(yǎng)基表面暴露在空氣中。（3）靜態(tài)測(cè)試時(shí)，培養(yǎng)皿暴露時(shí)間為 30min 以上；動(dòng)態(tài)測(cè)試時(shí)，培養(yǎng)皿暴露時(shí)間不大 于 4h。（4）全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（5）采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30C35C培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)，時(shí)間不少于2d;采用沙氏培養(yǎng)基（SDA配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在20C25C 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于 5d。（ 6）每次采樣應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，避免培養(yǎng)皿運(yùn)輸或搬動(dòng)過(guò)程中造成影響，每次或每個(gè)區(qū)域取不低于 1 個(gè)對(duì)照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一 起放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)

11、。（ 7）每批培養(yǎng)皿應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)皿在使用前已被污染。每批可選定不少于3個(gè)培養(yǎng)皿作為批對(duì)照培養(yǎng)。4.6.4 采樣注意事項(xiàng)（ 1）對(duì)于單向流潔凈室（區(qū)）或送風(fēng)口，采樣器采樣口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向；對(duì)于非 單向流潔凈室（區(qū)） ，采樣口向上。（2）布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應(yīng)盡量避開塵粒較集中的回風(fēng)口。3）采樣時(shí)，測(cè)試人員應(yīng)站在采樣口的下風(fēng)側(cè)，并盡量少走動(dòng)（4）應(yīng)采取一切措施防止采樣過(guò)程的污染和其他可能對(duì)樣本的污染465菌落計(jì)數(shù)（1）用肉眼對(duì)培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計(jì)數(shù)。（2）若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)（3）當(dāng)某個(gè)測(cè)試點(diǎn)有多個(gè)培養(yǎng)皿時(shí)，可計(jì)算單個(gè)培養(yǎng)皿的沉降菌

12、平均菌落數(shù)，計(jì)算公式如下：?1 + ?2 + ? + ? ?=-帀 -式中：?平均菌落數(shù)Mn號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)n培養(yǎng)皿總數(shù)結(jié)果的判定（1）每個(gè)測(cè)點(diǎn)的沉降菌平均菌落數(shù)必須低于所選定標(biāo)準(zhǔn)中的界限（2）在靜態(tài)測(cè)試時(shí)，若某個(gè)測(cè)點(diǎn)的沉降菌平均菌落數(shù)超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次測(cè)試結(jié)果均合格才能判定合格。466測(cè)定頻次4.7浮游菌要求(1) 判定標(biāo)準(zhǔn)如表8所示潔凈度級(jí)別100級(jí)10000級(jí)100000 級(jí)浮游菌/m3< 5< 100< 500(2) 最少采樣點(diǎn)數(shù)目最少采樣點(diǎn)數(shù)目見(jiàn)表3(3) 采樣點(diǎn)的位置工作區(qū)測(cè)點(diǎn)位置離地0.8m1.5m左右 送風(fēng)口測(cè)點(diǎn)位置離開送風(fēng)面 30cm左右 可

13、在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn) 采樣點(diǎn)布置的規(guī)則見(jiàn)附錄 A。(4) 最小采樣量浮游菌每次最小采樣量見(jiàn)表9所示表9最小采樣量潔凈度級(jí)別米樣量L/次100級(jí)100010000級(jí)500100000 級(jí)100300000級(jí)100(5) 采樣次數(shù)每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次儀器與設(shè)備儀器與設(shè)備包括：浮游菌采樣器、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器。(1) 培養(yǎng)皿：采用？90mrK 15mn規(guī)格培養(yǎng)皿。(2) 培養(yǎng)基：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基或沙氏培養(yǎng)基，其配制方法見(jiàn)附錄B。(3) 恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對(duì)恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行校驗(yàn)。測(cè)試步驟(1) 測(cè)試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒2）采樣器進(jìn)入被測(cè)房間前先

14、用消毒房間的消毒劑消毒， 用于 100 級(jí)潔凈室的采樣器宜預(yù) 先放置在被測(cè)房間內(nèi)。（3）消毒劑擦拭培養(yǎng)皿的外表面。（4）采樣前，先用消毒劑清洗采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外表面，采樣結(jié)束，再用 消毒劑輕輕噴灑罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。（5）采樣口和采集管，使用前必須高溫滅菌，如用消毒劑對(duì)對(duì)采集管內(nèi)外壁進(jìn)行消毒時(shí)， 應(yīng)將管中殘留液倒掉并晾干。（6）采樣者應(yīng)穿戴被測(cè)潔凈區(qū)相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手消毒劑 消毒或戴無(wú)菌手套操作。（7）采樣儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿， 開啟浮游菌采樣器， 使儀器中的殘留消毒劑蒸發(fā)， 時(shí)間不宜少于5min,并檢查流量并根據(jù)采樣量調(diào)整設(shè)定采樣時(shí)間。（8）關(guān)閉

15、浮游菌采樣器，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子。（ 9）置采樣口于采樣點(diǎn)后,開啟浮游菌采樣器進(jìn)行采樣。（10）全部采樣結(jié)束后,將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在 30C35C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于 2d;采用沙 氏培養(yǎng)基配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在 20T25°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于 5d。（11）每次采樣應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，避免培養(yǎng)皿運(yùn)輸或搬動(dòng)過(guò)程中造成影響，每次或每個(gè)區(qū)域取不低于 1 個(gè)對(duì)照皿，與采樣皿同法操作但不需采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)（12）每批培養(yǎng)皿應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)皿在使用前已被污染。每批可選定

16、不少于個(gè)培養(yǎng)皿作為批對(duì)照培養(yǎng)。采樣注意事項(xiàng)（1）所使用儀器必須在檢定有效期內(nèi)（2）采樣管嚴(yán)禁滲漏，內(nèi)壁應(yīng)光滑。（3）使用前應(yīng)仔細(xì)檢查每一個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的 不能使用。（4）對(duì)培養(yǎng)基。培養(yǎng)條件及其他參數(shù)詳細(xì)記錄。（3）采樣管的長(zhǎng)度應(yīng)根據(jù)測(cè)點(diǎn)的高度定，盡量減少?gòu)澢?。菌落?jì)數(shù)（1） 用肉眼對(duì)培養(yǎng)皿上所有菌落直接計(jì)數(shù)、標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用510 倍放大鏡檢查，有否遺漏。（2）若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。（3）每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度的計(jì)算公式如下：菌落數(shù)浮游菌平均濃度（個(gè)/m3 =米樣量（4）由于細(xì)菌種類繁多，差別

17、甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀 察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，并須注意細(xì)菌菌落和培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別結(jié)果判定(1 )每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度必須低于所選定評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)中的界限。(2)在靜態(tài)測(cè)試時(shí)，若某測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)重新采樣兩次， 兩次測(cè)試結(jié)果均合格才能判定為符合。測(cè)定頻次1次/月4.8日常監(jiān)控(1) 對(duì)于壓差及溫濕度的日常監(jiān)控，在工作階段，每天早晚各一次記錄工作場(chǎng)所的微 壓差計(jì)及溫濕度計(jì)的度數(shù)。(2) 塵埃粒子、浮游菌及沉降菌除定期檢測(cè)外不做日常監(jiān)控，但在出現(xiàn)以下情況時(shí)， 需對(duì)潔凈區(qū)相關(guān)項(xiàng)目做重新檢測(cè)：停工時(shí)間比預(yù)計(jì)時(shí)間延長(zhǎng)關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)

18、發(fā)現(xiàn)有污染存在在生產(chǎn)期間，空氣凈化系統(tǒng)進(jìn)行任何重大維修日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)消毒規(guī)程的改變引起生物污染的事故等當(dāng)生產(chǎn)設(shè)備有重大維修或增加設(shè)備時(shí)當(dāng)潔凈區(qū)（室）結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動(dòng)時(shí)附錄A潔凈室（區(qū)）采樣點(diǎn)布置潔凈室（區(qū)）采樣點(diǎn)布置宜力求均勻，避免采樣點(diǎn)在局部區(qū)域過(guò)于稀疏。下列多采樣點(diǎn)布置圖示可做參考：100級(jí)單向流區(qū)域，潔凈工作臺(tái)或局部空氣凈化設(shè)施的采樣點(diǎn)宜布置在正對(duì)氣流方向的工作面上，氣流形式可參考下圖：水平單向流的氣流形式:垂直單向流的氣流形式:附錄B培養(yǎng)基的滅菌及準(zhǔn)備1、大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA培 養(yǎng)基 的滅菌及準(zhǔn)備培養(yǎng)基采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基，可以按照以下處方制備，也可使用按該處方生產(chǎn)的符合要求的脫水培養(yǎng)基。配制后按培養(yǎng)基規(guī)定的經(jīng)驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基配方酪蛋白胰酶消化物 15g大豆粉木瓜蛋白酶消化物 5g氯化鈉 5g瓊脂 15g純化水 1000ml取上述成分除瓊脂，混合，微熱溶解，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.3 ± 0.2，加入瓊脂，加熱融化后，分裝、滅菌，冷卻至約60°C，在無(wú)菌操作要求下傾注約20m