紫外分光光度計(jì)測(cè)蛋白、核酸及使用方法

1、紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)含量1 1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?shí)驗(yàn)?zāi)康模?）學(xué)習(xí)紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理；（2）掌握紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的實(shí)驗(yàn)技術(shù)；（3）掌握紫外分光光度計(jì)的的使用方法。2 2、實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)原理蛋白質(zhì)組成中常含有酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸，在紫外光280nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，一定濃度范圍內(nèi)其濃度與吸光度呈正比，故可用紫外分光光度計(jì)通過(guò)比色來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)的含量。由于核酸在280nm波長(zhǎng)也有光吸收，對(duì)蛋白質(zhì)測(cè)量有一定的干擾作用，但核酸的最大吸收峰在260nm。如同時(shí)測(cè)定260nm的光吸收，通過(guò)計(jì)算可以消除其對(duì)蛋白質(zhì)測(cè)定的影響。因此如溶液中存在核酸時(shí)必須同時(shí)測(cè)定280nm及26

2、0nm的吸光度，才能通過(guò)計(jì)算測(cè)定溶液中的蛋白質(zhì)濃度。3 3、儀器與試劑、儀器與試劑紫外可見(jiàn)光分光光計(jì)。未知蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，可用結(jié)晶牛血清蛋白或酪蛋白，預(yù)先經(jīng)微量凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)含量，根據(jù)其純度配制成12.5mg/mL 的溶液。0.9%NaCl溶液。4 4、實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)步驟在紫外分光光度計(jì)上，將未知的蛋白質(zhì)溶液小心盛于石英比色皿中，以生理鹽水為對(duì)照，測(cè)得280nm和260nm兩種波長(zhǎng)的吸光度（A280和A260）。將A280及A260波長(zhǎng)處測(cè)得的吸光度按下列公式計(jì)算蛋白質(zhì)弄高度C=1.45A280-0.74A260式中，C為蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度（mg/ml）；本法對(duì)微量蛋白質(zhì)的測(cè)定既快又方便，它

3、還適用于硫酸銨或其他鹽類混雜的情況，這時(shí)用其他方法測(cè)定往往較困難。5 5、實(shí)驗(yàn)記錄及數(shù)據(jù)處理、實(shí)驗(yàn)記錄及數(shù)據(jù)處理測(cè)定未知濃度蛋白質(zhì)溶液的濃度6 6、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)（1）石英比色皿比較貴重，且易碎，使用時(shí)要小心。（2）測(cè)量吸光度時(shí)，比色皿要保持潔凈，切勿用手玷污其光面。紫外分光光度計(jì)測(cè)定核酸含量目的和要求目的和要求1、學(xué)習(xí)紫外吸收法測(cè)定核酸含量的原理。2、掌握利用紫外分光光度計(jì)測(cè)定核酸含量的方法實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 DNA和RNA都有吸收紫外線的性質(zhì)，最大吸收峰在260nm波長(zhǎng)處。紫外吸收是嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)的共軛雙鍵系統(tǒng)所具有的性質(zhì)，所有嘌呤和嘧啶的物質(zhì)，都具有吸收紫外線的性質(zhì)。用1cm光

4、徑的比色杯測(cè)定核酸的A260nm時(shí)，1ug/ml的DNA溶液吸光度為0.020，同樣濃度的RNA吸光度為0.024.因此，可以用下列公式計(jì)算樣品的核酸含量DNA濃度（ug/ml)=A 260/0.02RNA濃度（ug/ml)=A 260/0.024實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)器材紫外分光光度計(jì)實(shí)驗(yàn)材料及試劑實(shí)驗(yàn)材料及試劑RNA或DNA樣品實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟將樣品配置成每毫升含550g的核酸溶液，于紫外分光光度計(jì)上測(cè)定260nm處的吸光度，按下式計(jì)算核酸濃度和兩者的吸收比值：DNA濃度（ug/ml)=A 260/0.02RNA濃度（ug/ml)=A 260/0.024實(shí)驗(yàn)記錄及數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)記錄及數(shù)據(jù)處理測(cè)定未知濃度RNA溶液的濃度紫外分光光度計(jì)使用方法認(rèn)識(shí) 紫外分光光度計(jì)認(rèn)識(shí) 紫外分光光度計(jì)認(rèn)識(shí) 紫外分光光度計(jì)紫外分光光度計(jì)使用方法開(kāi)機(jī)自檢，預(yù)熱紫外分光光度計(jì)使用方法將對(duì)照及樣品依次放入比色池中選擇“光度測(cè)量”模式紫外分光光度計(jì)使用方法輸入測(cè)量所需的波長(zhǎng)紫外分光光度計(jì)使用方法比色池推到對(duì)照組對(duì)準(zhǔn)光源， 調(diào)100%透過(guò)率紫外分光光度計(jì)使用方法比色池拉到樣品組對(duì)準(zhǔn)光源， 測(cè)試。測(cè)