高壓滅菌鍋的驗(yàn)證報(bào)告

1、立式壓力蒸汽滅菌鍋YXQ-LS-75G儀器驗(yàn)證報(bào)告驗(yàn)證報(bào)告審批表程序?qū)徟块T簽名日期起草第三B組2013.2.28審核班主任2013.03.11批準(zhǔn)系主任-立式壓力蒸汽滅菌鍋YXQ-LS-75G儀器驗(yàn)證報(bào)告目錄1. 概述2. 驗(yàn)證目的3. 驗(yàn)證依據(jù)及采用文件4. 驗(yàn)證內(nèi)容4.1. 設(shè)計(jì)確認(rèn)4.2. 安裝確認(rèn)4.3. 運(yùn)行確認(rèn)4.4. 性能確認(rèn)5. 再驗(yàn)證周期6. 驗(yàn)證報(bào)告審批1. 概述本消毒器是利用高壓高溫濕熱蒸汽殺菌，用于微生物限度檢查用培養(yǎng)基、器皿及污染物過期菌種等滅活，滅菌條件設(shè)定為121，15min。2. 驗(yàn)證目的通過驗(yàn)證確認(rèn)立式壓力蒸汽滅菌器能達(dá)到設(shè)備性能指標(biāo)，滿足檢驗(yàn)需求。驗(yàn)證結(jié)果

2、必須證明生產(chǎn)中采用的滅菌過程對經(jīng)過滅菌的物品能夠保證殘存微生物污染的概率或可能性低于10-63. 驗(yàn)證依據(jù)及采用文件藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范中華人民共和國藥典2010年版二部4. 驗(yàn)證內(nèi)容4.1設(shè)計(jì)確認(rèn)容積：75L 滅菌工作溫度：109 135 設(shè)定溫度時間：4120分鐘；設(shè)定干燥時間范圍：15240；電源：220V ±10V,50Hz； 滅菌加熱功率：3.5KW干燥加熱功率：1KW額定工作壓力：0.212Mpa；額定工作溫度：135；工作壞境：溫度540;相對濕度： 80%RH;設(shè)備安全類別：I類；毛重：60kg(75L)4.2安裝確認(rèn)4.2.1資料檔案名稱存放處使用說

3、明書實(shí)訓(xùn)樓615辦公室檔案存放處（高壓滅菌器）備料清單實(shí)訓(xùn)樓615辦公室檔案存放處（高壓滅菌器）合格證實(shí)訓(xùn)樓615辦公室檔案存放處（高壓滅菌器）開箱驗(yàn)收記錄實(shí)訓(xùn)樓615辦公室檔案存放處（高壓滅菌器）設(shè)備卡實(shí)訓(xùn)樓615辦公室檔案存放處（高壓滅菌器）檢驗(yàn)人： 日期：2013.2.28復(fù)核人： 日期：2013.2.284.2.2安裝確認(rèn)序號項(xiàng) 目標(biāo) 準(zhǔn)檢測結(jié)果是否符合要求1立式壓力蒸汽滅菌鍋YXQ-LS-75GYXQ-LS-75GYYXQ-LS-75G符合2出廠編號有有符合3出廠日期有有符合4數(shù)量1臺1臺符合5裝箱單有有符合6合格證有有符合7使用說明書有有符合8第三方質(zhì)量檢驗(yàn)書有有符合9保修卡有有符

4、合10設(shè)備完整性、牢固性無缺陷、無松動無缺陷、無松動符合11表面裂痕、焊縫無裂痕、打磨光滑無裂痕、打磨光滑符合12表面劃痕無劃傷、碰痕無劃傷、碰痕符合13各種零部件，備品備件齊備齊備符合14破裂管線無破裂、接口可靠無破裂、接口可靠符合15松脫電線聯(lián)接緊固、無松脫聯(lián)接緊固、無松脫符合16電源220V 50HZ220V 50HZ符合17環(huán)境溫度540；相對濕度80%RH540；相對濕度80%RH符合18安裝的環(huán)境背景化驗(yàn)室化驗(yàn)室符合檢驗(yàn)人： 日期：2013.2.28復(fù)核人： 日期：2013.2.284.3運(yùn)行確認(rèn)4.3.1儀表校正1. 校正的溫度指示、傳感器、溫度記錄儀的讀數(shù)值與標(biāo)準(zhǔn)電偶指示值之間

5、的誤差應(yīng)+0.5。2. 校正的時間記錄儀與標(biāo)準(zhǔn)時間指示裝置之間的誤差應(yīng)+1.3. 校正的壓力表/真空表與標(biāo)準(zhǔn)表之間的誤差應(yīng)+10%。4.3.2真空度試驗(yàn)用特定的化學(xué)指示劑（試紙）檢查，化學(xué)指示劑（試紙）在運(yùn)行抽真空程序后，經(jīng)134暴露3min，其化學(xué)指示劑（試紙）的顏色應(yīng)呈現(xiàn)均勻一直的改變。4.3.3真空狀態(tài)下滅菌腔室內(nèi)泄漏實(shí)驗(yàn)泄漏率：在10min內(nèi)，腔室內(nèi)壓力變化應(yīng)<130Pa/min（1mm Hg/min)4.3.4將滅菌器重加入純化水等，準(zhǔn)備工作做好后，設(shè)置為121,15分鐘，啟動設(shè)備，該設(shè)備應(yīng)在121保溫15分鐘，連續(xù)運(yùn)行3次，且用秒表計(jì)時。編號一次二次三次秒表計(jì)時15min20

6、s15min24s15min23s判斷：校正的事件記錄儀與標(biāo)準(zhǔn)時間指示裝置之間的誤差應(yīng)+1% 符合標(biāo)準(zhǔn) 檢驗(yàn)人： 日期：2013-03-01復(fù)核人： 日期：2013-03-034.3.5熱分布測試4.3.5.1空載熱分布取13支經(jīng)過校驗(yàn)的留點(diǎn)溫度計(jì)，其中2支的探頭分別置于滅菌器的2個排氣接口處，1支探頭置于滅菌器檢測接口處，1支探頭置于滅菌器的溫度傳感器處，其余留點(diǎn)溫度計(jì)均與分布在腔內(nèi)各處。開啟滅菌器箱，按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行，運(yùn)行結(jié)束后記錄各個點(diǎn)的溫度，連續(xù)運(yùn)行3次，檢查其重現(xiàn)性。以證明空載滅菌器腔室內(nèi)個點(diǎn)的溫度在每次滅菌程序運(yùn)行過程中的差值+1。運(yùn)行結(jié)束后各點(diǎn)溫度記錄如下：編號1234567

7、891011121次119.7120.0124.0119.8119.2120.3122.0119.7119.9117.0120.0124.32次119.0119.7123.8120.0119.0120.9122.0119.0119.4118.0120.0123.93次118.0120.0122.9119.0118.0120.0121.0119.0119.0116.0120.0124.0（注：2 安全氣閥處 3排氣口處 3-7 上層 8-12 下層）測定結(jié)果： 檢驗(yàn)人： 日期：2013-03-03復(fù)核人： 日期：2013-03-044.3.5.2滿載熱分布將滅菌器內(nèi)裝滿洗后清潔且裝滿培養(yǎng)基的錐形

8、瓶，自下而上擺放，取13支經(jīng)過校驗(yàn)的留點(diǎn)溫度計(jì)，其中2支的探頭分別置于滅菌器的2個排氣接口處，1支探頭置于滅菌器檢測接口處，1支探頭置于滅菌器的溫度傳感器處，其余留點(diǎn)溫度計(jì)均與分布在腔內(nèi)各處。開啟滅菌器箱，按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行，運(yùn)行結(jié)束后記錄各個點(diǎn)的溫度，連續(xù)運(yùn)行3次，檢查其重現(xiàn)性。運(yùn)行結(jié)束后各點(diǎn)溫度記錄如下：編號1234567891011121次123.0118.0122.1121.9120.2122.0121.3119.9118.5119.5121.5119.22次123.8117.7122.1122.0119.2121.6121.4118.4118.4118.4120.0118.23次1

9、12.2119.8119.4118.8118.8120.0120.2117.6118.0117.0119.0118.2（注：1 安全氣閥處 2 排氣口處 3-7 上層 8-12 下層）運(yùn)行結(jié)果： 檢驗(yàn)人： 日期：2013-03-02復(fù)核人： 日期：2013-03-044.3.6熱穿透試驗(yàn)4.3.6.1裝載類型：最大裝載、裝滿4.3.6.2器皿選擇：500ml錐形瓶，90ml培養(yǎng)皿滅菌程序：121，15分鐘4.3.6.3測試過程在最大裝載情況下，取13支經(jīng)過校驗(yàn)的留點(diǎn)溫度計(jì)，其中2支的探頭分別置于滅菌器的2個排氣接口處的待滅菌瓶內(nèi)，1支探頭置于滅菌器檢測接口處處的待滅菌瓶內(nèi)，其余留點(diǎn)溫度計(jì)置于其

10、余待滅菌瓶中。開啟滅菌器箱，按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行，運(yùn)行結(jié)束后記錄各個點(diǎn)的溫度，連續(xù)運(yùn)行3次，檢查其重現(xiàn)性。最大負(fù)載狀態(tài)下，熱穿透實(shí)驗(yàn)的結(jié)果達(dá)到最冷點(diǎn)滅菌物品的暴露時間為12115min，即F015.最小負(fù)載狀態(tài)下，熱穿透實(shí)驗(yàn)的結(jié)果達(dá)到最冷點(diǎn)滅菌物品的暴露時間為12115min，即F015.=t*10（T1-T2)/Z-溫度最低點(diǎn)的相應(yīng)滅菌時間T-某實(shí)際滅菌時間所持續(xù)的時間T1-實(shí)際滅菌溫度T2-理論滅菌溫度Z-各溫度下的微生物滅菌速率常數(shù)15.3*10（117.8-121）/10=45.9運(yùn)行結(jié)束后各點(diǎn)溫度記錄如下：編號123456781次122.3121.5121.0122.5120.511

11、9.8118.22次122.0122.0120.0121.0121.0120.0118.03次120.2119.0117.8118.0118.4119.0117.8（注：上層1-4 下層5-8 水銀柱斷裂）運(yùn)行結(jié)果：因水銀柱斷裂，放棄第4組 數(shù)據(jù)，繼續(xù)試驗(yàn) ，出現(xiàn)此情況，需重新驗(yàn)證 。 檢驗(yàn)人： 日期：復(fù)核人： 日期：4.4性能確認(rèn)4.41生物指示劑紙上活菌數(shù)和活芽孢數(shù)的確認(rèn) (1)無菌打開 5 個生物指示劑小瓶(美國 3M 公司 Aiiesi 生物指示劑，No1262)，將 5 條芽孢紙片轉(zhuǎn)移至一個無菌研缽中，加入 0.5ml 生理鹽水，研碎紙片，制成芽孢懸液。 (2)分別吸取lml 芽孢懸

12、液加入已有 9 ml 鹽水的試管中，將試管標(biāo)明 1號和2號。 (3)將1號試管80水浴中放置15min，作為熱處理。 (4)用鹽水分別將上述兩管作連續(xù) 10倍稀釋(101，10*2，103)。 (5)分別吸取熱處理組(1號)和未處理組(2號)后兩個稀釋度(102，103)懸液lml，各加入兩個無菌平皿中，然后倒入 1520ml 冷卻至50左右的TSA(胰蛋白胨大豆瓊脂)培養(yǎng)基，混合后待冷卻。 (6)倒置平皿，在56下培養(yǎng)48h。 (7)培養(yǎng)結(jié)束后，計(jì)數(shù)每個平皿碟上的菌落數(shù)，計(jì)算處理組和未處理組各稀釋液中的平均菌落數(shù)，然后算出生物指示劑紙片上平均實(shí)際活菌數(shù)和活芽孢數(shù)。 (8)如果每條紙片上的平均

13、活菌數(shù)不小于制造商標(biāo)明的平均數(shù)的 95， 同時，紙片上 的活芽孢數(shù)也不小于活菌數(shù)的一半，則該生物指示劑可以使用。 (9)將結(jié)果記錄在“生物指示劑的活性確認(rèn)表”上。 (10)每批購買的生物指示劑均需進(jìn)行本項(xiàng)檢查。 2根據(jù)驗(yàn)證需要，將適量的生物指示劑小瓶送往制劑或合成車間，或者用于實(shí)驗(yàn)室高壓滅菌柜。 3生物指示劑法確認(rèn)滅菌效果檢查可與熱穿透試驗(yàn)同時進(jìn)行，也可單獨(dú)進(jìn)行，每次檢查應(yīng)至少使用 5 個生物指示劑，在生物指示劑上標(biāo)明滅菌器名稱，指示劑放置位置，編號及使用日期等。 4將各生物指示劑盡可能置于熱電偶旁。 5按照相應(yīng)的高壓滅菌柜驗(yàn)證規(guī)程或原位滅菌驗(yàn)證規(guī)程運(yùn)行一個滅菌周期。 6滅菌結(jié)束后，待滅菌柜冷

14、卻，打開柜門，立即取出所有生物指示劑送微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。 7壓碎生物指示劑中的安瓿瓶， 同時用一個未經(jīng)滅菌處理的生物指示劑作為陽性對照 (也壓碎內(nèi)部的安瓿瓶)，一同于56下培養(yǎng)48h。 二、結(jié)果觀察及分析 1。分別在培養(yǎng)24h后及48h后檢查生物指示劑是否有顏色變化，如果呈黃色(陽性顯 示)則表明有細(xì)菌生長，如果沒有顏色變化，則表明已進(jìn)行了充足的滅菌循環(huán)。 2陽性對照生物指示劑必須在 24h內(nèi)出現(xiàn)顏色變化。 3將結(jié)果記錄在“生物指示劑檢查表”上，將該表放入蒸汽滅菌工藝的驗(yàn)證文件中。 4所有陽性的生物指示劑必須在 121下高壓滅菌30min。項(xiàng)目第一次第二次第三次稀釋倍數(shù)10-210-310-2

15、10-310-210-3未經(jīng)熱處理經(jīng)熱處理備注表未出結(jié)果判斷：實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可用4.4.2嗜熱脂肪桿菌 D值測定法 1 材料及儀器(表415) 2 方法步驟 21 將菌膜或孢子懸浮液分別放入注射用水或磷酸緩沖液PBS中，用VF1振動使溶解。制備濃度約為108個/ml 的懸浮液，然后在沸水中加熱l0min以殺滅可能存在的芽孢繁殖體。 22 將上述BStK3l 懸浮液分別用微量注射器注入1618根毛細(xì)管(必要時可采用離心法去除氣泡)，使每支管的菌量約為106個孢子。用酒精燈封口。每次進(jìn)樣前后，進(jìn)樣器必須用1：1酒精丙酮以及蒸餾水交替淋洗，以提高接種準(zhǔn)確度。 表 415 嗜熱脂肪桿菌 D值測定的材料及儀

16、器 BStK31 孢子懸浮液 濃度約在 45×108個/ml BStK31 菌膜每片含量約在 13×106個至 16×106個 培養(yǎng)基TSA/胰蛋白大豆瓊脂及 TSB/胰蛋白大豆肉湯振動器VF-1 2500 次/min可調(diào)式恒溫油浴型號 000-9601，精度±01，調(diào)溫范圍 20220毛細(xì)管0811mm×90mm 微量進(jìn)樣器(圖 455) 500l，針頭長 90mm23 將校驗(yàn)過的油浴設(shè)在121下工作。 24 分別將每組的1416支毛細(xì)管放入毛細(xì)管架，迅速放入油浴曝?zé)?，并?jì)時。每隔 13min 從毛細(xì)管架同時取出兩支毛細(xì)管，迅速放入冰水浴中冷

17、卻35min。 取出， 首先用清潔劑除去油滴再用?5酒精棉花消毒毛細(xì)管表面，然后分別放入一個裝有 5ml 無菌 TSB的試管。用無菌玻璃棒搗碎毛細(xì)管。定量稀釋，制成 30300CFUml 菌液。 在5260用TSA 培養(yǎng)24h， 計(jì)數(shù)。 未經(jīng)曝?zé)岬拿?xì)管，也應(yīng)用同樣的方法理并進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 3 結(jié)果 4 討論 41 D值的確定及影響因素 孢子在蒸汽滅菌過程中，其死亡的規(guī)律可以用下式表示： lgNtlgN0+kt 式中 N0零點(diǎn)孢子的濃度； Nt曝?zé)醫(yī) 時間(min)后孢子的濃度； t曝?zé)釙r間，min； k斜率。 D1/k 4.4.3細(xì)菌生物指示劑驗(yàn)證將一定量的耐熱菌放入待滅菌的產(chǎn)品中，在設(shè)定的

18、滅菌條件下進(jìn)行滅菌，以驗(yàn)證設(shè)定的滅菌工藝是否確實(shí)賦予產(chǎn)品必須的滅菌值（FH）。驗(yàn)證菌選擇：嗜熱脂肪芽孢桿菌指示劑（3M中國有限公司），含量1x106CFU/支。驗(yàn)證方法取嗜熱脂肪芽孢桿菌指示劑，均勻分布于滅菌鍋的隔層位置，其中三支置于熱穿透試驗(yàn)的最冷點(diǎn)，按照SOP進(jìn)行滅菌操作，溫度121，滅菌時間15分鐘。經(jīng)過一個滅菌周期后，取出生物指示劑，擠破內(nèi)含的安培瓶，在60培養(yǎng)24-48小時，同時取1支未滅菌的指示劑做陽性對照。連續(xù)試驗(yàn)三次。（培養(yǎng)后，指示管不變色呈紫色，表示滅菌通過；培養(yǎng)后，指示管變紅，呈黃色表示滅菌不通過。同時培養(yǎng)的對照管應(yīng)為陽性呈黃色。）（必須及時查出滅菌失敗原因）。生物指示劑培

19、養(yǎng)結(jié)果記錄如下：編號123456789101112陽性對照1次-+2次-3次-備注+表示未通過 -表示通過 未做結(jié)果判斷及評價： 符合標(biāo)準(zhǔn) 檢驗(yàn)人： 日期：2013-03-06復(fù)核人： 日期：2013-03-114.4.2滅菌后培養(yǎng)基質(zhì)量驗(yàn)證按照中華人民共和國藥典2010年版附錄J規(guī)定的檢查方法，從消毒后的營養(yǎng)瓊脂和玫瑰紅鈉培養(yǎng)基中每次取10瓶（注意分別從消毒器中不同位置）分別放皿。并同時做空白。在30-35和23-28下培養(yǎng)細(xì)菌培養(yǎng)3天，霉菌和酵母菌培養(yǎng)5天，記錄菌落生長情況。最大負(fù)載、最小負(fù)載狀態(tài)下，微生物標(biāo)的物試驗(yàn)的結(jié)果可以保證微生物存活概率10-6細(xì)菌培養(yǎng)記錄：編號天數(shù)123456789101 次第一天00000000000000000000第二天00110000000000300000第三天001500000200003000002次第一天00000000000000000000第二天00110000000000300000第三天002500000001703000003次第一天00000000000000000000第二天00110000000000100000第三天00210000000000200000霉菌培養(yǎng)記錄：編號天數(shù)1234567891