5 1含生物堿類成分中藥制劑的分析精編版

1、第五章第五章 中藥制劑中各類化學(xué)成分分析中藥制劑中各類化學(xué)成分分析 各類化學(xué)成分的理化性質(zhì)各類化學(xué)成分的理化性質(zhì) 各類成分供試液的提取純化制備方法各類成分供試液的提取純化制備方法 各類成分定性鑒別的原理方法各類成分定性鑒別的原理方法 各類成分定量測(cè)定的原理和方法各類成分定量測(cè)定的原理和方法 第一節(jié)第一節(jié) 生物堿生物堿alkaloidalkaloid類成分分析類成分分析 了解生物堿的理化性質(zhì)了解生物堿的理化性質(zhì) 熟悉中藥制劑內(nèi)熟悉中藥制劑內(nèi)Alk定性鑒別的原理方法定性鑒別的原理方法 掌握掌握AlkAlk的供試液的提取純化制備方法、定的供試液的提取純化制備方法、定量測(cè)定的原理和方法量測(cè)定的原理和方

2、法 一、概述（了解） 生物堿是中藥中重要的有效成分之一。生物堿是中藥中重要的有效成分之一。 多具復(fù)雜的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，有顯著的生理作用。多具復(fù)雜的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，有顯著的生理作用。 至少有豆科、防已科、毛茛科、夾竹桃科、茄科、至少有豆科、防已科、毛茛科、夾竹桃科、茄科、石蒜科石蒜科50多科，多科，120屬以上植物中有生物堿存在。屬以上植物中有生物堿存在。 以雙子葉植物最多，其次單子葉植物，裸子植物。以雙子葉植物最多，其次單子葉植物，裸子植物。以罌粟科等的植物分布較多。以罌粟科等的植物分布較多。 生物堿的種類很多生物堿的種類很多(見(jiàn)表見(jiàn)表1)，但具生理活性大多集，但具生理活性大多集中在異喹啉、吲哚、茛菪烷類

3、等衍生物。中在異喹啉、吲哚、茛菪烷類等衍生物。 多以鹽的多以鹽的形式存在于植物體內(nèi)。形式存在于植物體內(nèi)。 生物堿類型及其基本結(jié)構(gòu)生物堿類型及其基本結(jié)構(gòu) 序序號(hào)號(hào) 1、 2、 3、 4、 5、 6、 類型類型 吡咯類吡咯類 吡啶類吡啶類 喹啉類喹啉類 異喹啉類異喹啉類 吲哚類吲哚類 咪唑類咪唑類 基本結(jié)基本結(jié)構(gòu)構(gòu) a b c d e f 植物藥舉例植物藥舉例 古豆、狗舌草古豆、狗舌草 毒芹、一葉秋、煙草毒芹、一葉秋、煙草 多雞納多雞納 黃連、罌粟、吐根、石蒜黃連、罌粟、吐根、石蒜 番木鱉、毒扁豆、蘿芙木番木鱉、毒扁豆、蘿芙木 毛果蕓香毛果蕓香 生物堿類型及其基本結(jié)構(gòu)生物堿類型及其基本結(jié)構(gòu) 6 7

4、 8 9 10 11 12 咪唑類咪唑類 喹唑酮類喹唑酮類 嘌啉類嘌啉類 甾體類甾體類 莨菪烷類莨菪烷類 無(wú)環(huán)類無(wú)環(huán)類 其他其他 f g h j k 毛果蕓香毛果蕓香 常山常山 茶葉茶葉 澳洲茄澳洲茄 顛茄、洋金花、古柯顛茄、洋金花、古柯 麻黃麻黃 烏頭、秋水仙烏頭、秋水仙 生物堿類型及其基本結(jié)構(gòu)生物堿類型及其基本結(jié)構(gòu) NNHNNNNHNH a b c d e f ONHNRNNNHNCH3NOH g I j K 與中藥化學(xué)差別與中藥化學(xué)差別 (1)用量不同：分析一般樣品量小。用量不同：分析一般樣品量小。 (2)提取的原則不同：分析是保證待測(cè)組分提取的原則不同：分析是保證待測(cè)組分的最大回收。的

5、最大回收。 (3)分離目的不同：分析是盡量排除干擾，分離目的不同：分析是盡量排除干擾，凈化待測(cè)組分。凈化待測(cè)組分。 (4)定性目的不同定性目的不同 二、理化性質(zhì)與提取分離二、理化性質(zhì)與提取分離 1、物理性質(zhì)、物理性質(zhì) 一般無(wú)色結(jié)晶固體，少數(shù)為非結(jié)晶形粉未，一般無(wú)色結(jié)晶固體，少數(shù)為非結(jié)晶形粉未，少數(shù)有色。少數(shù)有色。 2、旋光性、旋光性 多具手性碳原子，所以多具有旋光性，且多具手性碳原子，所以多具有旋光性，且多為左旋。多為左旋。 二、理化性質(zhì)與提取分離二、理化性質(zhì)與提取分離 3、酸堿性：分子中含、酸堿性：分子中含N原子，多具有堿原子，多具有堿性。性。 ? 堿性：堿性： 胍季銨堿烷胺類胍季銨堿烷胺類

6、(脂叔胺堿脂叔胺堿)吡吡啶啶(芳叔胺堿芳叔胺堿)酰胺類。酰胺類。 321 Sp SpSp 二、理化性質(zhì)與提取分離二、理化性質(zhì)與提取分離 4、溶解性、溶解性 ?游離生物堿：極性較小，不溶或難溶于水游離生物堿：極性較小，不溶或難溶于水 ?能溶于乙醇、氯仿、丙酮、乙醚等有機(jī)溶媒中能溶于乙醇、氯仿、丙酮、乙醚等有機(jī)溶媒中 ?分析中常用氯仿、乙醚作為提取溶劑分析中常用氯仿、乙醚作為提取溶劑 ?生物堿的鹽類：大多易溶于水及醇生物堿的鹽類：大多易溶于水及醇 ?不溶于或難溶于苯、氯仿、乙醇等不溶于或難溶于苯、氯仿、乙醇等 ?該性質(zhì)是相反的，可用來(lái)提取、分離、精制生物堿該性質(zhì)是相反的，可用來(lái)提取、分離、精制生物

7、堿 ?但需注意：季胺堿、酰胺堿、和一些含極性基團(tuán)較但需注意：季胺堿、酰胺堿、和一些含極性基團(tuán)較多的多的AlkAlk則能溶于水則能溶于水 ?含酚羥基、和羧基的生物堿呈酸堿兩性反應(yīng)含酚羥基、和羧基的生物堿呈酸堿兩性反應(yīng) 二、理化性質(zhì)與提取分離二、理化性質(zhì)與提取分離 5、沉淀反應(yīng)、沉淀反應(yīng) ?Alk在在H 水液或水液或H 稀醇稀醇(50）中，與）中，與 Alk試試劑生成難溶性劑生成難溶性 精制協(xié)助鑒定精制協(xié)助鑒定 ?但蛋白質(zhì)、肽類、鞣質(zhì)、嘌呤類，有的黃酮、香但蛋白質(zhì)、肽類、鞣質(zhì)、嘌呤類，有的黃酮、香豆素及查耳酮也可與某些豆素及查耳酮也可與某些 Alk試劑反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)中試劑反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)中需排除這些干擾。需

8、排除這些干擾。 ?含含Alk樣品液純化精制后，再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。樣品液純化精制后，再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 二、理化性質(zhì)與提取分離二、理化性質(zhì)與提取分離 樣品酸性提取液（? ?CHCl3? ?水提溶液） OH CHCl3提取液（季胺堿采用NaOH堿化，正丁醇萃?。┧此?H 酸性水液酸性水液 Alk沉淀試劑沉淀試劑(3種種) H CHCl3液（或正丁醇液）產(chǎn)生沉淀： ? 陽(yáng)性，可能有生物堿 無(wú)沉淀： ? 陰性，一般不含 生物堿二、理化性質(zhì)與提取分離二、理化性質(zhì)與提取分離 生物堿沉淀沉淀試劑大體可分為三類生物堿沉淀沉淀試劑大體可分為三類 (1)與與Alk生成不溶性鹽類如：磷鉬酸、硅鎢生成不溶性鹽類如：磷鉬酸、硅

9、鎢酸酸(Alkertrand)、磷鎢酸；、磷鎢酸； (2)與與Alk形成疏松的絡(luò)鹽如：碘碘化鉀試形成疏松的絡(luò)鹽如：碘碘化鉀試劑劑(Wagner)； (3)與與Alk的氮原子反應(yīng)，生成不溶性加成物的氮原子反應(yīng)，生成不溶性加成物如：碘化鉍鉀如：碘化鉍鉀(Dragendorff)、碘化汞鉀試劑、碘化汞鉀試劑(Mayer)。 ?二、理化性質(zhì)與提取分離二、理化性質(zhì)與提取分離 6、顯色反應(yīng)、顯色反應(yīng) ?有些有些Alk與某些試劑呈顏色反應(yīng)，可借以識(shí)別與某些試劑呈顏色反應(yīng)，可借以識(shí)別Alk，但易雜質(zhì)干擾，需凈化后進(jìn)行。但易雜質(zhì)干擾，需凈化后進(jìn)行。 7、生物堿供試液的提取、生物堿供試液的提取 ? 主根據(jù)主根據(jù)A

10、lk的溶解度而定。的溶解度而定。 (1)有機(jī)溶劑提取有機(jī)溶劑提取 ?氨水濕潤(rùn)氨水濕潤(rùn)Alk游離，后用游離，后用CHCl3、(CH3CH2)2O提取提取 ?較穩(wěn)定的生物堿鹽類，可用堿性較強(qiáng)的較穩(wěn)定的生物堿鹽類，可用堿性較強(qiáng)的NaCO3、Ca(OH)、NaOH堿化堿化 ?本法缺點(diǎn)是不能提出水溶性生物堿本法缺點(diǎn)是不能提出水溶性生物堿 二、理化性質(zhì)與提取分離二、理化性質(zhì)與提取分離 (2)醇水溶媒提取醇水溶媒提取 ? 用中性甲醇、乙醇、酸性甲醇、乙醇、酸水用中性甲醇、乙醇、酸性甲醇、乙醇、酸水(如：如：0.11%)鹽酸、硫酸、酒石酸等提取。鹽酸、硫酸、酒石酸等提取。 ? 此法較簡(jiǎn)便，但提取出的雜質(zhì)較多，

11、需進(jìn)一此法較簡(jiǎn)便，但提取出的雜質(zhì)較多，需進(jìn)一步純化處理。步純化處理。 (3)混合溶媒提取混合溶媒提取 ?用不同極性的溶劑按不同比列混合，該法可用不同極性的溶劑按不同比列混合，該法可以較好地提取出待測(cè)組分。以較好地提取出待測(cè)組分。 ?如如 ： 百百 部部 、 粉粉 防防 已已 用用 乙乙 醚醚:氯氯 仿仿:乙乙醇醇:10%NH3OH(25：8：25：1)。 二、理化性質(zhì)與提取分離二、理化性質(zhì)與提取分離 (4) 水溶性水溶性Alk：可用：可用Alk沉淀試劑如雷氏鹽沉淀試劑如雷氏鹽(硫氰化鉻硫氰化鉻銨銨)、磷鎢酸等生成不溶性的復(fù)鹽而從水中析出、磷鎢酸等生成不溶性的復(fù)鹽而從水中析出 , ,沉沉淀溶于丙

12、酮，通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，氫氧化銨洗淀溶于丙酮，通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，氫氧化銨洗脫，可得游離生物堿脫，可得游離生物堿 (5)生物堿樣品的提取方法生物堿樣品的提取方法 ?常用的有：冷浸法、滲漉法、超聲提取法、索氏常用的有：冷浸法、滲漉法、超聲提取法、索氏提取法、熱回流提取法等提取法、熱回流提取法等 ?冷浸法與冷浸超聲提取法操作簡(jiǎn)便、快捷，常用冷浸法與冷浸超聲提取法操作簡(jiǎn)便、快捷，常用 ?必要時(shí)，要對(duì)上述方法作比較，以優(yōu)選出最佳提必要時(shí)，要對(duì)上述方法作比較，以優(yōu)選出最佳提取方法。取方法。 二、理化性質(zhì)與提取分離二、理化性質(zhì)與提取分離 8、生物堿樣品預(yù)處理、生物堿樣品預(yù)處理精制精制 (1)萃取法萃取法

13、酸堿萃取法酸堿萃取法經(jīng)典法經(jīng)典法 ? Alk離子對(duì)萃取法，依據(jù)離子對(duì)萃取原理離子對(duì)萃取法，依據(jù)離子對(duì)萃取原理 ? 生物堿在弱酸性介質(zhì)生物堿在弱酸性介質(zhì)陽(yáng)離子陽(yáng)離子+ +大分子大分子(離子對(duì)試劑離子對(duì)試劑) 復(fù)鹽復(fù)鹽（水溶性小，溶于有機(jī)溶劑）（水溶性小，溶于有機(jī)溶劑） 與水溶性雜質(zhì)分離與水溶性雜質(zhì)分離 ?若離子對(duì)試劑為有機(jī)染料，則該法還可用于生物堿的定量分若離子對(duì)試劑為有機(jī)染料，則該法還可用于生物堿的定量分析，如：小蘗堿可加入析，如：小蘗堿可加入 pH8.5pH8.5的四溴酚酞乙酯緩沖液，的四溴酚酞乙酯緩沖液， CHCH2 2ClCl2 2萃取，取萃取，取CHCH2 2ClCl2 2液比色測(cè)定。

14、液比色測(cè)定。 (2) (2)色譜法色譜法柱色譜、色譜小柱柱色譜、色譜小柱 三、定性鑒別三、定性鑒別 （一）一般理化鑒別（一）一般理化鑒別 常用鑒別有：常用鑒別有：Alk的沉淀反應(yīng)、的沉淀反應(yīng)、特殊顯色反應(yīng)、色譜鑒別等特殊顯色反應(yīng)、色譜鑒別等 l、Alk的沉淀反應(yīng)的沉淀反應(yīng) ?三種以上試劑呈陽(yáng)性反應(yīng)。注意干擾三種以上試劑呈陽(yáng)性反應(yīng)。注意干擾 2 2、特殊顯色反應(yīng)、特殊顯色反應(yīng) (1)(1)對(duì)二甲氨基苯甲醛試劑對(duì)二甲氨基苯甲醛試劑吲哚類顯藍(lán)吲哚類顯藍(lán) (2)(2)小蘗堿小蘗堿鹽酸過(guò)氧化氫試劑，呈紅紫鹽酸過(guò)氧化氫試劑，呈紅紫 (3)Vitali(3)Vitali醇制醇制KOHKOH試劑，莨菪烷類呈紫

15、試劑，莨菪烷類呈紫 (4)Labat(4)Labat反應(yīng)反應(yīng)次亞甲二氧基反應(yīng)次亞甲二氧基反應(yīng) (5)(5)雙縮脲反應(yīng)雙縮脲反應(yīng)麻黃堿呈紫色麻黃堿呈紫色 （二）色譜鑒別（二）色譜鑒別 方法：方法：TLC、PC、HPLC、GC等。多用等。多用TLC法。法。 中藥名中藥名 黃連、黃黃連、黃柏柏(小蘗小蘗堿堿) 麻黃麻黃 (麻黃堿麻黃堿) 元胡元胡 (延胡索延胡索乙素乙素) 烏頭烏頭(烏烏 頭堿頭堿) 展開(kāi)劑展開(kāi)劑 吸附吸附劑劑 正丁醇正丁醇:醋酸醋酸:水水(7:2:1) 硅膠硅膠G 氯仿氯仿:甲醇甲醇(4:1) 氯仿：甲醇：濃氨水氯仿：甲醇：濃氨水(20：硅膠硅膠 G 5：0.5)正丁醇：醋酸：水正

16、丁醇：醋酸：水 (4：1：1滴滴) 硅膠硅膠 乙醚：環(huán)已烷：甲醇乙醚：環(huán)已烷：甲醇(5：3：G或或 0.5) 硅膠硅膠H:已烷已烷:氯仿氯仿:甲甲 醇醇:二已烷二已烷(5:3:0.5:l) 堿性堿性乙醚：石油醚乙醚：石油醚(10:1 氧化氧化顯色方法顯色方法 改良碘化鉍改良碘化鉍鉀試劑或紫鉀試劑或紫外燈外燈365nm 0.5%茚三酮茚三酮 試劑試劑 改良碘化鉍改良碘化鉍鉀試劑鉀試劑 碘蒸氣碘蒸氣 四、含量測(cè)定方法四、含量測(cè)定方法 早期常用的有：酸堿滴定法、沉淀法、酸早期常用的有：酸堿滴定法、沉淀法、酸性染料比色法、雷氏鹽比色法等性染料比色法、雷氏鹽比色法等 ? 現(xiàn)用：分光光度法、現(xiàn)用：分光光度

17、法、TLC、HPLC、GC等等 （一）總生物堿含量測(cè)定（一）總生物堿含量測(cè)定 1 1、經(jīng)典化學(xué)法經(jīng)典化學(xué)法( (重量法、容量法重量法、容量法) ) (1)(1)重量法重量法 ?原理：原理：AlkAlk可與生物堿沉淀試劑定量反應(yīng)生可與生物堿沉淀試劑定量反應(yīng)生成沉淀，根據(jù)沉淀量可間接求出生物堿含成沉淀，根據(jù)沉淀量可間接求出生物堿含量。此法操作較繁，費(fèi)時(shí)、且準(zhǔn)確度較差量。此法操作較繁，費(fèi)時(shí)、且準(zhǔn)確度較差 ?四、含量測(cè)定方法四、含量測(cè)定方法 適用范圍：適用范圍： 凡堿性很弱多不宜用容量法或其他方法測(cè)凡堿性很弱多不宜用容量法或其他方法測(cè)定者定者 揮發(fā)性生物堿不宜用此法揮發(fā)性生物堿不宜用此法 ?例例 苦參

18、總堿測(cè)定：硅鎢酸沉淀法苦參總堿測(cè)定：硅鎢酸沉淀法 苦參片苦參片20%NaOH20%NaOH堿化堿化氯仿回流提取氯仿回流提取稀鹽稀鹽酸溶解酸溶解定容定容 10%10%硅鎢酸沉淀硅鎢酸沉淀 過(guò)濾沉過(guò)濾沉淀淀沉淀干燥稱重，計(jì)算含量沉淀干燥稱重，計(jì)算含量 ? 四、含量測(cè)定方法四、含量測(cè)定方法 (2)容量法容量法 ?分類：酸堿滴定、兩相滴定、絡(luò)合滴定、沉分類：酸堿滴定、兩相滴定、絡(luò)合滴定、沉淀容量法等淀容量法等 I、酸堿滴定原理、酸堿滴定原理 ?生物堿呈堿性，可用酸滴定；生物堿呈堿性，可用酸滴定；pH指示劑指示指示劑指示終點(diǎn)。終點(diǎn)。 ?生物堿鹽，一般呈酸性生物堿鹽，一般呈酸性(強(qiáng)酸弱堿鹽強(qiáng)酸弱堿鹽)，可

19、用強(qiáng)，可用強(qiáng)堿滴定。堿滴定。 ?因其終點(diǎn)在因其終點(diǎn)在70-90%乙醇中比在水中明顯，故乙醇中比在水中明顯，故可用標(biāo)準(zhǔn)堿的醇溶液滴定，以酚酞為指示劑可用標(biāo)準(zhǔn)堿的醇溶液滴定，以酚酞為指示劑四、含量測(cè)定方法四、含量測(cè)定方法 II、兩相滴定原理、兩相滴定原理 BH?In?1?BHIn離子離子 離子離子 分子分子 在水相與水不相溶的有機(jī)溶劑在水相與水不相溶的有機(jī)溶劑(氯仿應(yīng)用最氯仿應(yīng)用最多多)兩相中進(jìn)行滴定兩相中進(jìn)行滴定 注意選擇：注意選擇：合適的合適的PHPH，合適的酸性染料，合，合適的酸性染料，合適的有機(jī)溶劑，以適的有機(jī)溶劑，以PHPH最為重要。最為重要。 四、含量測(cè)定方法四、含量測(cè)定方法 a a、

20、兩相酸堿滴定法：、兩相酸堿滴定法： ?生物堿鹽溶于水，加適量氯仿等有機(jī)溶劑，生物堿鹽溶于水，加適量氯仿等有機(jī)溶劑，NaOH滴定，酚酞指示劑指示終點(diǎn)。滴定產(chǎn)生滴定，酚酞指示劑指示終點(diǎn)。滴定產(chǎn)生游離生物堿轉(zhuǎn)溶有機(jī)溶劑，所以靈敏度比一般游離生物堿轉(zhuǎn)溶有機(jī)溶劑，所以靈敏度比一般酸堿滴定好，又稱為兩相置換滴定酸堿滴定好，又稱為兩相置換滴定 b b、兩相酸性染料滴定法：、兩相酸性染料滴定法： ? 用酸性染料為滴定劑，在水與氯仿兩相中滴用酸性染料為滴定劑，在水與氯仿兩相中滴定生物堿，定生物堿，Alk陽(yáng)離子與酸性染料陰離子締合陽(yáng)離子與酸性染料陰離子締合進(jìn)入氯仿（等有機(jī)溶劑），終點(diǎn)時(shí)，稍過(guò)量酸進(jìn)入氯仿（等有機(jī)溶

21、劑），終點(diǎn)時(shí)，稍過(guò)量酸性染料使水層產(chǎn)生顏色指示終點(diǎn)。利用氯仿層性染料使水層產(chǎn)生顏色指示終點(diǎn)。利用氯仿層可比色定量?？杀壬?。 四、含量測(cè)定方法四、含量測(cè)定方法 III、絡(luò)合滴定原理、絡(luò)合滴定原理 用過(guò)量的重金屬生物堿沉淀試劑，使生物堿用過(guò)量的重金屬生物堿沉淀試劑，使生物堿沉淀，將沉淀溶解，然后用絡(luò)合劑滴定沉淀中沉淀，將沉淀溶解，然后用絡(luò)合劑滴定沉淀中重金屬重金屬 先用過(guò)量重金屬生物堿沉淀試劑，使生物堿先用過(guò)量重金屬生物堿沉淀試劑，使生物堿沉淀，后用絡(luò)合劑滴定溶液中剩余的過(guò)量重金沉淀，后用絡(luò)合劑滴定溶液中剩余的過(guò)量重金屬生物堿沉淀試劑，而間接定量。繁瑣少用屬生物堿沉淀試劑，而間接定量。繁瑣少用

22、 、沉淀容量法、沉淀容量法 利用生物堿與生物堿沉淀試劑的反應(yīng)，直接利用生物堿與生物堿沉淀試劑的反應(yīng)，直接或間接定量或間接定量 2、光譜法定量、光譜法定量 （1）直接測(cè)定）直接測(cè)定 （2 2）比色法（可見(jiàn)分光光度法）比色法（可見(jiàn)分光光度法） 酸性染料比色法、雷氏鹽比色法、苦味酸比酸性染料比色法、雷氏鹽比色法、苦味酸比色法色法 （2 2）比色法（可見(jiàn)分光光度法）比色法（可見(jiàn)分光光度法） I 、酸性染料比色法、酸性染料比色法 ? 原理：與酸性染料滴定法相同原理：與酸性染料滴定法相同 ?本法關(guān)鍵：本法關(guān)鍵：pHpH值、酸性染料種類、有機(jī)溶劑值、酸性染料種類、有機(jī)溶劑 ?常用染料：甲基橙、溴麝香草酚藍(lán)常

23、用染料：甲基橙、溴麝香草酚藍(lán)BTBBTB、溴、溴甲酚綠、溴酚藍(lán)、溴甲酚紫等甲酚綠、溴酚藍(lán)、溴甲酚紫等 ?有機(jī)溶劑選擇：依據(jù)離子對(duì)與有機(jī)相能否形有機(jī)溶劑選擇：依據(jù)離子對(duì)與有機(jī)相能否形成氫鍵以及形成氫鍵能力的強(qiáng)弱成氫鍵以及形成氫鍵能力的強(qiáng)弱 ?常用有機(jī)溶劑：氯仿、二氯甲烷常用有機(jī)溶劑：氯仿、二氯甲烷 ?注意：微量水份可使有機(jī)相混濁，影響比色，注意：微量水份可使有機(jī)相混濁，影響比色，應(yīng)先脫水后測(cè)定應(yīng)先脫水后測(cè)定 （2 2）比色法（可見(jiàn)分光光度法）比色法（可見(jiàn)分光光度法） II 、雷氏鹽比色法雷氏鹽比色法 原理：原理：Alk與雷氏鹽生成紅色沉淀，此沉淀溶于丙酮，于與雷氏鹽生成紅色沉淀，此沉淀溶于丙酮，

24、于520-526nm波長(zhǎng)處，選擇最大吸收波長(zhǎng)，測(cè)定吸收度。根據(jù)雷氏波長(zhǎng)處，選擇最大吸收波長(zhǎng)，測(cè)定吸收度。根據(jù)雷氏鹽丙酮液的鹽丙酮液的為為106.5(單鹽單鹽)或或203.0(雙鹽雙鹽)。按下式計(jì)算樣品生。按下式計(jì)算樣品生成雷氏鹽重量（成雷氏鹽重量（W，g）。）。 W?A?M?V? 1000（2 2）比色法（可見(jiàn)分光光度法）比色法（可見(jiàn)分光光度法） 、異羥肟酸鐵比色法、異羥肟酸鐵比色法 酯鍵結(jié)構(gòu)酯鍵結(jié)構(gòu)堿性加熱水解堿性加熱水解羧基羧基+ +羥胺羥胺異羥肟酸異羥肟酸+Fe3+異羥肟酸鐵異羥肟酸鐵（紫紅色化合物）（紫紅色化合物） 如：烏頭總生物堿的測(cè)定如：烏頭總生物堿的測(cè)定 IV、其它比色法、其它比

25、色法 苦味酸比色法苦味酸比色法 方法：沉淀加堿解離，以有機(jī)溶劑提出生物堿，將苦味酸方法：沉淀加堿解離，以有機(jī)溶劑提出生物堿，將苦味酸的堿性水溶液進(jìn)行比色的堿性水溶液進(jìn)行比色 氯仿提取苦味酸生物堿鹽，堿性緩沖液使鹽解離，并將苦氯仿提取苦味酸生物堿鹽，堿性緩沖液使鹽解離，并將苦味酸提取而進(jìn)行比色味酸提取而進(jìn)行比色 氯仿提取苦味酸鹽而直接進(jìn)行比色。氯仿提取苦味酸鹽而直接進(jìn)行比色。 （二）單體生物堿的含量測(cè)定（二）單體生物堿的含量測(cè)定 主要有主要有HPLC、GC、TLC等等 1、TLC法法 ?對(duì)樣品純化程度要求不高。但一般點(diǎn)樣誤差對(duì)樣品純化程度要求不高。但一般點(diǎn)樣誤差大，定量時(shí)，首先作一標(biāo)準(zhǔn)曲線，考察

26、線性大，定量時(shí)，首先作一標(biāo)準(zhǔn)曲線，考察線性范圍，確定定量方法范圍，確定定量方法(內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo)/外標(biāo)、一點(diǎn)法外標(biāo)、一點(diǎn)法/二二點(diǎn)法點(diǎn)法)，均需同板標(biāo)準(zhǔn)品隨行對(duì)照。同時(shí)要，均需同板標(biāo)準(zhǔn)品隨行對(duì)照。同時(shí)要考察方法的穩(wěn)定性、同板與異板的精密度考察方法的穩(wěn)定性、同板與異板的精密度 ?2、HPLC法法 ?生物堿鹽為離子型化合物生物堿鹽為離子型化合物. .有離子交換、離有離子交換、離子對(duì)、正相子對(duì)、正相HPLC法。法。 ?生物堿為分子型化合物，生物堿為分子型化合物，可用反相、分配可用反相、分配HPLC法，應(yīng)用較多。法，應(yīng)用較多。 ?注意：在注意：在Alk分析中，反相柱硅膠表面仍殘分析中，反相柱硅膠表面仍殘留有游

27、離的硅醇羥基，呈弱酸性，會(huì)吸附堿性留有游離的硅醇羥基，呈弱酸性，會(huì)吸附堿性的生物堿使色譜峰拖尾的生物堿使色譜峰拖尾 克服措施：克服措施： I、固定相、固定相 ? 通常硅醇羥基被覆蓋率越高，分離效果越通常硅醇羥基被覆蓋率越高，分離效果越好。如用好。如用C8比比C18好。好。 2、HPLC法法 II、流動(dòng)相、流動(dòng)相 為減小為減小ALK在反相柱上的拖尾，可采取如下在反相柱上的拖尾，可采取如下措施：措施： a、加入有機(jī)胺類：、加入有機(jī)胺類： 常加入三乙胺或季胺堿鹽。常加入三乙胺或季胺堿鹽。 使流動(dòng)相呈堿性，抑制或掩蔽游離硅醇羥基使流動(dòng)相呈堿性，抑制或掩蔽游離硅醇羥基影響。影響。 b、在流動(dòng)相中加入離子

28、對(duì)試劑：、在流動(dòng)相中加入離子對(duì)試劑： 與與ALK類成分生成離子對(duì)掩蔽其堿性基使類成分生成離子對(duì)掩蔽其堿性基使之不能與固定相表面的硅醇基作用，使之不能與固定相表面的硅醇基作用，使ALK類成分易于出峰，且峰形好。類成分易于出峰，且峰形好。 2、HPLC法法 c、增加流動(dòng)相的脂溶性、增加流動(dòng)相的脂溶性 d、調(diào)整流動(dòng)相的、調(diào)整流動(dòng)相的pH值值 III、柱溫、柱溫 升高柱溫升高柱溫 、樣品液的制備、樣品液的制備 ?是定量分析工作是否成功的關(guān)鍵是定量分析工作是否成功的關(guān)鍵 ?兩大類：溶劑萃取法、色譜分離法兩大類：溶劑萃取法、色譜分離法 （二）單體生物堿的含量測(cè)定（二）單體生物堿的含量測(cè)定 3 3、 GCG

29、C法：法： 適于有揮發(fā)性，遇熱不分解的生物堿類適于有揮發(fā)性，遇熱不分解的生物堿類 ?如麻黃堿、苦參堿和顛茄類生物堿如麻黃堿、苦參堿和顛茄類生物堿 ?例：潔爾陰洗劑中苦參堿的測(cè)定例：潔爾陰洗劑中苦參堿的測(cè)定 4、其他測(cè)定方法、其他測(cè)定方法 五、應(yīng)用實(shí)例五、應(yīng)用實(shí)例 1、含小檗堿的中藥制劑分析、含小檗堿的中藥制劑分析 (1) 萬(wàn)氏牛黃清心丸萬(wàn)氏牛黃清心丸 TLC法鑒別鹽酸小檗堿法鑒別鹽酸小檗堿 UVUV法法/ /一階導(dǎo)數(shù)光譜法測(cè)定鹽酸小檗堿一階導(dǎo)數(shù)光譜法測(cè)定鹽酸小檗堿 (2) 安宮牛黃丸安宮牛黃丸 HPLC法測(cè)定鹽酸小檗堿法測(cè)定鹽酸小檗堿 (3) 香連丸香連丸 HPLC法法 五、應(yīng)用實(shí)例五、應(yīng)用實(shí)例 2、含麻黃堿的中藥制劑分析、含麻黃堿的中藥制劑分析 麻黃堿性質(zhì)：麻黃堿性質(zhì)： ?揮發(fā)性揮發(fā)性 ?堿性較強(qiáng)堿性較強(qiáng) ?