新生兒溶血病HDN血型血清學(xué)檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、新生兒溶血病HDN1B型血清學(xué)檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科HDN 血型血清實(shí)驗(yàn)診斷的技術(shù)操作，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，明確HDN 診斷及其原因，依據(jù)輸血實(shí)驗(yàn)室管理程序 4.1.9 條 款 的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科對(duì)HDN 進(jìn)行血型血清學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷及其實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)的規(guī)范化管理。3、職責(zé)：輸血科技術(shù)人員負(fù)責(zé)本實(shí)驗(yàn)的技術(shù)操作。4、試驗(yàn)方法及原理4.1 試驗(yàn)方法：微柱凝膠卡式法4.2 原理： 本微量定型系統(tǒng)凝膠測(cè)試法基于生物化學(xué)凝膠過(guò)濾技術(shù)和離心技術(shù)及免疫化學(xué)抗原抗體特異反應(yīng)。當(dāng)抗原抗體反應(yīng)，抗人球試驗(yàn)時(shí)，血細(xì)胞發(fā)生凝集。離心時(shí)凝集塊不能通過(guò)凝膠間隙而留在凝膠上層，呈陽(yáng)性反

2、應(yīng)，未凝集細(xì)胞離心時(shí)可通過(guò)凝膠間隙而沉積在凝膠管底部，呈陰性反應(yīng)。5、樣本采集和處理取患兒不抗凝血1-2ml及EDTA-K2抗凝血34m1,24小時(shí)內(nèi) 送檢。將不抗凝血離心分離出血清備用。6、試劑：5.1 0.9% 的生理鹽水；5.2 戴安娜合血卡；5.3 血清抗A （市售）、抗B （市售）、抗A+B （健康O型人血清）、 抗 D 標(biāo)準(zhǔn)血清；5.4 5%A、 B 及 0 型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液；5.5 長(zhǎng)春博迅公司的血型定型試劑卡；7、儀器：1） XTL-4.7 細(xì)胞洗滌離心機(jī)；2） DiaMed-ID Incubator 37 S I 溫育器；3） DiaMed-ID Centrifuge 1

3、2 S 7.5 操作程序：7.5.1 嬰兒及母親ABOffil型鑒定是檢查第一步，以便考慮以后進(jìn)一步檢查程序。7.5.2 如母子ABO不合（母。子A、B,母A子B、AB,母B子A、AB）則按下列步驟進(jìn)行患兒血液三項(xiàng)試驗(yàn)：直接抗人球蛋白試驗(yàn)（DAT （微柱凝膠卡式法）1） 取患兒不抗凝血離心后，用0.9%的生理鹽水配成0.8%的紅細(xì)胞懸液。2） 在戴安娜LISS/Coombs 卡上標(biāo)明患兒的姓名或編號(hào)，撕開(kāi)卡上的鋁箔，加入配好的患兒紅細(xì)胞懸液50以l。3） 將卡放入戴安娜離心機(jī)離心10 分鐘后判讀結(jié)果。4） 結(jié)果觀察：5） 陽(yáng)性：紅細(xì)胞凝集，在凝膠柱中或表面形成紅線。6）陰性：在微管底部形成密集

4、的細(xì)胞扣?；純杭t細(xì)胞抗體放散試驗(yàn)7）患兒紅細(xì)胞用大量生理鹽水洗滌三次，取壓積紅細(xì)胞1ml左右，加等量的生理鹽水混勻。8）將上面?zhèn)浜玫募t細(xì)胞懸液置 57c的水浴箱中振蕩10分鐘后取 出，立刻以2000轉(zhuǎn)/分離心2-3分鐘。9）吸上層紅色液體（即放射液）于清潔試管中備用。10）分別取標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞用稀釋液配成0.8%的懸液，然后在戴安娜LISS/C00mbs卡上標(biāo)明患兒的姓名或編號(hào)，撕開(kāi)卡上的鋁箔， 分別加入50”備好的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液，弁于各孔均加入25 I l放散液。11） 在戴安娜孵育器上孵育15分鐘后于戴安娜離心機(jī)上離心10分鐘后觀察結(jié)果。12） 結(jié)果判定陽(yáng)性：紅細(xì)胞凝集，在凝膠柱中或表面形成紅

5、線。陰性：在微管底部形成密集的細(xì)胞扣。紅細(xì)胞放散液抗體檢測(cè)結(jié)果判讀試劑紅細(xì)胞意義OAB-+-放散出IgG抗A-+放散出IgG抗B-+放散出交叉反應(yīng)性抗體或IgG抗A和抗B （或抗AB抗體）-未放散出抗體+/-+/-放散出不規(guī)則抗體（ABO以外抗體）患兒血清中游離抗體測(cè)定13） 取患兒不抗凝血離心，吸取血清血備用。14） 分別取標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞用稀釋液配成0.8%的懸液，然后在戴安娜LISS/C00mbs卡上標(biāo)明患兒的姓名或編號(hào)，撕開(kāi)卡上的鋁箔，分別加入50 H l備好的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液，弁于各孔均加入25“患兒血清。15） 在戴安娜孵育器上孵育15分鐘后于戴安娜離心機(jī)上離心10分鐘后觀察結(jié)果。16）

6、結(jié)果判定：血漿游離抗體檢測(cè)結(jié)果判讀試劑紅細(xì)胞意義ABO+-游離的IgG抗A-+-游離的IgG抗B+-游離的IgG抗AB （交叉反應(yīng)性抗體）-無(wú)游離IgG抗體-/+-/+游離的不規(guī)則抗體（ABO以外抗體）8、結(jié)果分析:根據(jù)三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果綜合判斷 AB的生兒溶血?。ㄅ懦＜?xì)胞陽(yáng)性情況）直抗試驗(yàn)游離試驗(yàn)放散試驗(yàn)結(jié)論-不能證實(shí)為由血型免疫性抗體引起的HDN+-可以證實(shí)為HDN-+-可疑為HDN-+可以證實(shí)為ABO HDN+-+可以證實(shí)為ABO HDN+-可以證實(shí)為ABO HDN-+可以證實(shí)為ABO HDN+可以證實(shí)為ABO HDN9、注意事項(xiàng)：9.1 母親檢出的IgG類(lèi)紅細(xì)胞血型抗體，如在新生兒紅細(xì)胞上

7、缺 乏相應(yīng)的抗原，則與 HDN關(guān)。9.2 患兒血清及紅細(xì)胞放散液中檢出了 IgG類(lèi)紅細(xì)胞血型同種抗 體，且患兒紅細(xì)胞表達(dá)相應(yīng)的紅細(xì)胞血型抗原、 抗體特異性與母 體血清中紅細(xì)胞血型抗體特異性一致，可明確診斷為 HDN9.3 當(dāng)母親患有IgG抗體自身免疫溶血性疾病時(shí)，IgG抗體可進(jìn) 入胎兒體內(nèi)引起貧血，患兒DAT也可為陽(yáng)性，檢測(cè)母親DAT為陽(yáng) 性有助于鑒別。9.4 鑒定患兒血型時(shí)應(yīng)注意“遮斷現(xiàn)象”影響鑒定結(jié)果，如患兒 為RhD陽(yáng)性且紅細(xì)胞D抗原已完全被來(lái)自母體的IgG抗-D飽和, DAT呈陽(yáng)性，用IgM抗-D鑒定RhD血型可出現(xiàn)假陰性，此時(shí)可用 溫和的熱洗脫法解決 RhD血型鑒定困難問(wèn)題。9.5 當(dāng)新生兒ABOto型鑒定有困難時(shí)，可以根據(jù)其父母的血型推測(cè)新生兒血型（作為參考）。9.6 使用臍血