發(fā)酵罐操作講課講稿

1、發(fā)酵罐操作操作前請(qǐng)認(rèn)真檢查冷水機(jī)、空壓機(jī)、反應(yīng)器、進(jìn)出水管、氣管情況。填好使用說(shuō)明書(shū)。 開(kāi)機(jī)：先打開(kāi)其他單元上的開(kāi)關(guān)，再打開(kāi)主機(jī)背后的開(kāi)關(guān)。關(guān)機(jī)：先把控制器上所有單元的參數(shù)狀態(tài)調(diào)到of，把進(jìn)氣開(kāi)關(guān)打開(kāi)后關(guān)機(jī)；關(guān)機(jī)時(shí)先關(guān)控制器后面的開(kāi)關(guān)，再關(guān)其他單元上的開(kāi)關(guān)。滅菌操作1、取下馬達(dá)，平放于桌上。罐頂端套上黑色保護(hù)帽。2、由罐上取下溫度傳感器，該傳感器不需要滅菌。3、取下PH電纜線，蓋上紅色保護(hù)帽；將 PH電極要插到底。務(wù)必?cái)Q緊電極的上下兩個(gè)固定螺帽。PH電極滅菌前要標(biāo)定。PH電極標(biāo)定：接好電纜后擰開(kāi)電極的固定螺帽（第一個(gè)），將PH電極取出后用去離子水沖洗干凈后，輕輕用面紙吸干上面的水后先放入標(biāo)準(zhǔn)溶

2、液4.01中校正，等控制器上數(shù)據(jù)穩(wěn)定后在 set zero處輸入4.01 （不管實(shí)際數(shù)值的微弱差 別）；輸入完閉后從標(biāo)準(zhǔn)液中取出電極，沖洗、吸干后放入7.00的標(biāo)準(zhǔn)溶液中，等控制器上數(shù)據(jù)穩(wěn)定后在set span處輸入7.00 （不管實(shí)際數(shù)值的微弱差別）。 PH電極校正后不要關(guān) 控制器。4、 取下DO電纜線，DO電纜接口處用錫箔紙包好后套上黑色帽。DO電極滅菌完后標(biāo)定。 DO電極要插到底，擰緊電極的上下兩個(gè)固定螺帽。滅菌前要注意溶氧電極里頭的保護(hù)液是 否還有，沒(méi)有則要進(jìn)行添加。5、取下消泡或液位電纜線，將消泡或液位電纜插到底，滅菌后定位到所需要的高度后就不要再壓下去。消泡電極的高度離液面約1.5

3、cm處。6、拆下發(fā)酵罐上和冷凝器上的進(jìn)、出水管，拆下的同時(shí)要用夾子夾住拆下水管的接頭處， 以防水流出。7、發(fā)酵罐上的過(guò)濾器的兩端多要用夾子夾死，過(guò)濾器的出口處用錫箔包好，所有過(guò)濾器的 兩端多要用夾子夾住。發(fā)酵完畢倒罐后注意檢查過(guò)濾器是否被打濕，若有則趕快用吸球?qū)?其中的液體吹出。8、用鐵夾夾死收獲管上的硅膠管以防在滅菌鍋內(nèi)跑液。收獲管不用時(shí)上面一定要卡死不 移走。9、在滅菌前.將發(fā)酵罐的六個(gè)固定螺帽擰松出氣，其他螺帽一定要擰緊！滅菌完后打開(kāi)高 壓鍋后立刻將其擰緊，注意戴上手套防止被燙傷。10、酸不要放高壓鍋內(nèi)滅菌，將空的酸液瓶上的過(guò)濾器用錫箔包好，并將瓶蓋擰松出汽。 滅菌完后去掉錫箔過(guò)濾器上的

4、錫箔紙作為出汽口。（注意與酸瓶相連的硅膠管不要卡 死）；堿液瓶和硅膠管可以一起滅菌（與堿液瓶相連的硅膠管要卡死）。11、取下電熱夾套將其平鋪于桌面。12、滅菌前調(diào)整好攪拌葉的位置，底下的攪拌葉盡量靠近空氣分布器，上面的一個(gè)位置調(diào) 整到所加發(fā)酵液的中間位置。13、取樣器的位置不要靠近擋板的位置，盡量靠中間位置。14、滅菌前將取樣器的吸球取下。所有的硅膠管不要靠到高壓鍋的內(nèi)壁上。 滅菌完畢后1、將六個(gè)松開(kāi)的固定螺帽和酸堿瓶蓋擰緊。2、去掉包在過(guò)濾器上的錫箔紙和卡硅膠管的夾子。3、裝上馬達(dá)，若馬達(dá)內(nèi)側(cè)潤(rùn)滑油干了，涂上適量的凡士林。4、 接上溶氧電纜線后進(jìn)行DO電極標(biāo)定：滅菌完后接上 DO電極的電纜線

5、后在 set zero處輸入0 ;將反應(yīng)器的空氣流量控制在1L/min,Agitation調(diào)到100r/min過(guò)夜，早上開(kāi)在 setspan處輸入100后按確認(rèn)鍵。5、 等溫度降到發(fā)酵所需溫度時(shí)接好各進(jìn)出水管、PH電纜線，消泡電纜線。6、在放入溫度電極之前，先往溫度電極的進(jìn)口里滴加甘油，插入電極后繼續(xù)滴加到冒出 止。注意溫度電極要插到底。7、 檢查空壓機(jī)的輸出壓力，應(yīng)在0.71.0kg/cm 3范圍內(nèi)。&消泡劑的硅膠管要按從下往上順序在泵上安裝。冷水機(jī)工作溫度的設(shè)定開(kāi)機(jī)：接好進(jìn)出水管 t打開(kāi)總電源t進(jìn)行溫度設(shè)計(jì)t打開(kāi)循環(huán)泵t開(kāi)始制冷 關(guān)機(jī)：先關(guān)制冷開(kāi)關(guān) T關(guān)循環(huán)泵開(kāi)關(guān) T同時(shí)將進(jìn)、出水

6、口閥門(mén)關(guān)閉 T關(guān)上電源 溫度設(shè)定：開(kāi)機(jī) t面板顯示“ PPO.O”按T移位鍵”和 調(diào)整鍵”后顯示“ PP0.1” t按SET鍵確認(rèn)t此時(shí)面板顯示上限值，按移位鍵”和調(diào)整鍵”設(shè)定上限值T按SET鍵確認(rèn)t此時(shí)面板顯示下限值，按移位鍵”和調(diào)整鍵”設(shè)定下限值t按SET鍵確認(rèn)t再按SET鍵t再按SET鍵t面板顯示結(jié)束標(biāo)志 -”，按SET鍵回到測(cè)量顯示，設(shè)置結(jié)束。上述操作結(jié)束后準(zhǔn)備接種接種準(zhǔn)備：準(zhǔn)備好鐵擋板、打火機(jī)、酒精噴壺、接種圈、裝95%乙醇的搪瓷缸容器、尖頭鉗子、活動(dòng)扳手，接種瓶。接種操作1、移開(kāi)接種口附近的膠管，將鐵擋板圍住接種口后用酒精噴壺朝接種口處噴酒精后點(diǎn)著，（注意：如果有火焰順著酒精溢出鐵

7、板外，則需要吹滅鐵板兩側(cè)溢出的火焰。）2、將接種圈沾酒精點(diǎn)著后套住接種口處，將扳手或鉗子沾酒精后擰開(kāi)螺帽后用鉗子將其夾住拿出，吹滅螺帽和鉗子上的火焰后迅速放入裝95%乙醇的搪瓷缸容器里。3、將接種瓶在火焰處拔開(kāi)后迅速倒入發(fā)酵罐內(nèi)。完畢后用鉗子夾出螺帽擰上。整個(gè)過(guò)程確 保無(wú)菌操作！溶氧設(shè)定：發(fā)酵模式下溶氧的控制由有四種情況：按off鍵t按control鍵t按Auto鍵t setup t cascade選擇以下四種模式。1、None狀態(tài)：溶氧的控制主要通過(guò)增加空氣流量和設(shè)定好固定的轉(zhuǎn)速來(lái)控制。2、Agit狀態(tài)：溶氧的控制主要通過(guò)提高轉(zhuǎn)速來(lái)控制，此狀態(tài)在空氣流量保持不變的情況下 溶氧隨著細(xì)胞消耗降低

8、時(shí)通過(guò)增加轉(zhuǎn)速來(lái)提高溶氧水平。直到轉(zhuǎn)速達(dá)到設(shè)訂的轉(zhuǎn)速上限值 為止。該過(guò)程為自動(dòng)控制。3、02狀態(tài)：該狀態(tài)主要通過(guò)控制氧氣與空氣的混合百分比來(lái)控制。溶氧隨著氧氣百分比的 增加而增加。為自動(dòng)控制過(guò)程。4、Agit/ 02狀態(tài)：該狀態(tài)中溶氧的控制先是通過(guò)提高轉(zhuǎn)速來(lái)增加的，當(dāng)轉(zhuǎn)速達(dá)到設(shè)定的上 限值時(shí)若實(shí)際溶氧值仍沒(méi)達(dá)到所需要的設(shè)定值，此時(shí)轉(zhuǎn)速控制在上限值，開(kāi)始以從小到大 的百分比自動(dòng)提高氧氣的進(jìn)入量，直到達(dá)到所設(shè)定的溶氧值附近為止。該過(guò)程亦為自動(dòng)控 制過(guò)程。注意：在使用 Agit狀態(tài)和Agit/ 02狀態(tài)時(shí)，若實(shí)際溶氧值與設(shè)定值相差太大，則要確保所 設(shè)定的攪拌轉(zhuǎn)速上限值不要太大，否則轉(zhuǎn)速會(huì)瞬間內(nèi)增大帶

9、來(lái)太大的剪切力和大量的泡 沫。實(shí)際操作中可以同時(shí)通過(guò)空氣流量計(jì)的手動(dòng)控制來(lái)輔助操作。按off鍵t按control鍵t按Auto鍵tsetup t此時(shí)界面中出現(xiàn)的 p Gain和I Gain為兩個(gè)出廠 設(shè)定好的參數(shù)，不要改動(dòng)。其他控制操作：選擇U1: 1、開(kāi)機(jī)后t按use鍵t按U1U4單元的Fermentation或cell culture鍵選擇發(fā)酵 模式或細(xì)胞培養(yǎng)模式；連續(xù)按翻閱鍵t分別對(duì)U1U4單個(gè)單元進(jìn)行控制操作。2、Temr按of鍵t按control鍵t 按Auto鍵t按setpoint鍵，輸入設(shè)定值 t按確定鍵 t按 Disp Hi輸入上限值后按確定鍵 t按DispLo輸入下限值后按確

10、定鍵；輸入值若有錯(cuò)誤按刪除鍵后更改。攪拌設(shè)定：按off鍵t按control鍵宀按Auto鍵宀按setpoint鍵宀輸入設(shè)定轉(zhuǎn)速值 宀按確定 鍵tDisp Hi和DispLo值的設(shè)定如上。Pump A: 1、off T按 control鍵t按manual t按setpoint設(shè)定百分比(以 10秒為單位，如鍵 入20%表示轉(zhuǎn)2秒停8秒：100%表示連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)) tDisp Hi和 DispLo的設(shè)定同上。 PumpB 和PumpC的設(shè)定與PumpA相同。2、off T按 control鍵t按Antiforma(消泡)鍵t wet on和wet off分別調(diào)節(jié)液位的高低。3、 PumpC暫時(shí)沒(méi)有連接

11、蠕動(dòng)泵；蠕動(dòng)泵3與堿相連，蠕動(dòng)泵 4與酸相連。PH值設(shè)定：1.off按control鍵t按Auto鍵t按setpoint鍵t輸入設(shè)定值后按確定鍵 t Disp Hi和Disp Lo值的設(shè)定如上。dO2值設(shè)定：按of鍵t按control鍵t 按Auto鍵t 按setpoint鍵t輸入設(shè)定值后按確定 鍵。O2流量設(shè)定：按 control鍵t按Auto鍵t按setpoint鍵輸入設(shè)定的百分比。Unit2、Unit3、Unit4 的操作同上。GRJ-D生物發(fā)酵罐的操作規(guī)程及注意事項(xiàng)一、發(fā)酵罐、生物發(fā)酵罐使用前的技術(shù)準(zhǔn)備1. 對(duì)發(fā)酵罐操作人員上崗前的技術(shù)培訓(xùn)：GRJ-D發(fā)酵罐是機(jī)電一體化的高科技設(shè)備，因

12、此；操作人員上崗前必須進(jìn)行技術(shù)培訓(xùn)，使他們熟悉整個(gè)發(fā)酵系統(tǒng)的工作原理、管路、閥 門(mén)的操作程序，并對(duì)空壓機(jī)、電熱蒸汽發(fā)生器能正確操作使用。未經(jīng)培訓(xùn)的人員，不得單 獨(dú)上崗操作。2. 在發(fā)酵罐開(kāi)機(jī)使用之前，應(yīng)先檢查電源是否正常，空壓機(jī)、蒸汽發(fā)生器、循環(huán)水系統(tǒng)是 否能正常工作。3. 檢查整個(gè)系統(tǒng)上的閥門(mén)、接頭及緊固螺釘是否擰緊。4. 開(kāi)動(dòng)空壓機(jī)，用0.15Mpa壓力，檢查發(fā)酵罐、過(guò)濾器、管路、閥門(mén)的密封性能是否良好，有無(wú)泄漏。5. 溶氧儀、pH儀、PLC系統(tǒng)應(yīng)根據(jù)使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢查、校正。6. 上崗人員對(duì)上述發(fā)酵罐的各項(xiàng)必須能熟練操作。二、空消在投料前，氣路、料路、發(fā)酵罐必須用蒸汽進(jìn)行滅菌，消除所有死

13、角的雜菌，保證系統(tǒng)處 于無(wú)菌狀態(tài)。1. 空氣管路的空消(1) 空氣管路上有除水減壓閥，和除菌過(guò)濾器。除水減壓閥不能用蒸汽滅菌，因此在空氣管路通蒸汽前，必須將通向除水減壓閥的閥門(mén)KQF1關(guān)死，使蒸汽通過(guò)蒸汽過(guò)濾器然后進(jìn)入除菌過(guò)濾器。(2) 空消過(guò)程中，除菌過(guò)濾器下端的排氣閥應(yīng)微微開(kāi)啟，排除冷凝水。(3) 空消時(shí)間應(yīng)持續(xù) 40分鐘左右，當(dāng)設(shè)備初次使用或長(zhǎng)期不用后啟動(dòng)時(shí)，最好采用間歇 空消，即第一次空消后，暫定35小時(shí)再空消一次，以便消除芽孢。(4) 經(jīng)空消后的過(guò)濾器，應(yīng)通氣吹干，約2030分鐘，然后將氣路閥門(mén)關(guān)閉。2發(fā)酵罐空消(1) 發(fā)酵罐是將蒸汽直接通入罐內(nèi)進(jìn)行空消。(2) 空消時(shí)，應(yīng)將罐上的接

14、種口，排氣閥，及料路閥門(mén)微微打開(kāi)，使蒸汽通過(guò)這些閥門(mén)排出，同時(shí)保持罐壓為0.130.15Mpa。(3) 空消時(shí)間為3040分鐘，特殊情況下，可采用間歇空消。(4) 空消結(jié)束后，應(yīng)將罐內(nèi)冷凝水排掉。注意：1發(fā)酵罐空消時(shí)，應(yīng)將夾套內(nèi)的水放掉，空消時(shí)最好將夾套排水閥打開(kāi)，以防夾套水排不凈。2空消時(shí)，溶氧、pH電極應(yīng)取出，可以延長(zhǎng)其使用壽命。三、實(shí)消實(shí)消是當(dāng)發(fā)酵罐罐內(nèi)加入培養(yǎng)基后，用蒸汽對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的過(guò)程。1. 空消結(jié)束后，首先需將pH、Do電極校正好后裝入罐體中的接頭中，然后將配好的培養(yǎng)基從加料口加入罐內(nèi)，此時(shí)夾套內(nèi)應(yīng)無(wú)冷卻水。2. 培養(yǎng)基在進(jìn)罐之前，應(yīng)先糊化，一般培養(yǎng)基的配方量以罐體全容積的7

15、0%左右計(jì)算（泡沫多的培養(yǎng)基為 65%左右，泡沫少的培養(yǎng)基可達(dá)7580%），考慮到冷凝水和接種量因素，加水量約為罐體全容積的5060 %左右，加水量的多少與培養(yǎng)基溫度和蒸汽壓力等因素有關(guān)，需在實(shí)踐中摸索。3. 為了減少蒸汽冷凝水，實(shí)消先利用夾套通蒸汽對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行預(yù)熱，保持夾套壓力< 0.1Mpa待培養(yǎng)基溫度到達(dá) 90C后，關(guān)閉夾套蒸汽，改為直接向罐內(nèi)通入蒸汽。4. 當(dāng)罐壓升至 0.12Mpa，溫度升到121123 C時(shí)，控制蒸汽閥門(mén)開(kāi)度，保持罐壓不變，30分鐘后停止供汽。5. 打開(kāi)冷卻水的進(jìn)排閥門(mén)，在夾套內(nèi)通水冷卻。注意：1.在夾套通水冷卻時(shí)，罐壓會(huì)急劇下降，當(dāng)罐內(nèi)壓力降至0.05Mpa

16、時(shí)，微微開(kāi)啟排氣閥和進(jìn)氣閥，開(kāi)啟電機(jī)進(jìn)行通氣攪拌，加速冷卻速度，并保持罐壓為0.05Mpa，直到罐溫降至接種溫度。四、接種、培養(yǎng)1. 本設(shè)備采用火焰封口接種，接種前應(yīng)事先準(zhǔn)備好酒精棉花、鉗子、鑷子和接種環(huán)。2. 菌種裝入三角燒瓶?jī)?nèi)，接種量根據(jù)工藝要求確定。3. 將酒精棉花圍在接種口周?chē)c(diǎn)燃，用鉗子或鐵棒擰開(kāi)接種口，此時(shí)應(yīng)向罐內(nèi)通氣，使接 種口有空氣排出。4. 將三角瓶的菌種在火環(huán)中間倒入罐內(nèi)。5. 將接種口蓋在火焰上滅菌后擰緊。6. 接種后即可通氣培養(yǎng)，罐壓保持在0.05Mpa。7. 發(fā)酵溫度根據(jù)工藝要求而定，通過(guò)調(diào)節(jié)循環(huán)水的溫度來(lái)控制發(fā)酵溫度，當(dāng)環(huán)境溫度高于 發(fā)酵溫度時(shí)，需用冷水降溫。8. 溶氧量的大小主要通過(guò)調(diào)節(jié)進(jìn)氣量來(lái)實(shí)現(xiàn)。9. pH的調(diào)節(jié)是由控制系統(tǒng)通過(guò)執(zhí)行機(jī)構(gòu)（蠕動(dòng)泵）自動(dòng)加堿來(lái)實(shí)現(xiàn)。10. 泡沫報(bào)警是由泡沫探頭探測(cè)到泡沫液位信號(hào)在觸摸屏上以指示燈的形式來(lái)實(shí)現(xiàn)。11. 在發(fā)酵中途要取樣檢查時(shí)，可通過(guò)取樣口取樣。取樣前，取樣管路閥門(mén)需用蒸汽滅菌， 防止雜菌污染而引起誤導(dǎo)，取樣結(jié)束后同樣要用蒸汽沖洗取樣管道閥門(mén)。五、出料1. 本設(shè)備的出料是利用罐壓將發(fā)酵液從出料管道排出，根據(jù)發(fā)酵液的濃度，罐壓可控制在0.05 0.1Mpa。2.