化藥1005紫外快速測定法

1、百度文庫-讓每個人平等地提升自我紫外快速測定法測維生素C的含量 化藥10056 吳郡一、 實驗原理：Vc的一二氯酚靛酚容量法，操作步驟較繁瑣，而且受其它還原性 物質(zhì)、樣品色素顏色和測定時間的影響。紫外快速測定法，是根 據(jù)Vc具有對紫外產(chǎn)生吸收和對堿不穩(wěn)定的特性，于243nm處測 定樣品液與堿處理樣品液兩者消光值之差，通過查標準曲線，即 可計算樣品中Vc的含量。R義V忌Vc 的含量（Rg/g）二V、X %式中：口從標準曲線上查得的抗壞血酸的含量（jig）V.測消光值時吸取樣品溶液的體積（ml）V總樣品定容體積（ml）可總稱樣重量（g）二、儀器與試劑：儀器：紫外分光光度計、分析天平、離心機、容量

2、瓶25ml）、移液管（,）,吸管、研缽。試劑：1（）%HCK 1%HCK IMNaOH三、實驗步驟（一）標準曲線的制作1.抗壞血酸標準溶液的配制：用分析天平準確稱取抗壞血酸10mg, 加2mli（）%鹽酸，加蒸惚水定容至100ml,混勻。此抗壞血酸溶液的濃 度為 lOOpig/mlo2.取帶塞刻度試管8支并編號，分別按表內(nèi)所規(guī)定的量加入抗壞血 酸標準溶液和蒸餡水。12345678標準抗壞血酸溶液加入體積（ml）蒸鍋水加入體積（ml）總體積（ml）抗壞血酸溶液濃度（9 g/ml）50608()1()標準抗壞血酸溶液吸光值A(chǔ)3.消光值的測定：以蒸鏘水為空的，在243nm處測定標準系列抗壞 血酸溶液

3、的消光值，以抗壞血酸的含量（|ig）為橫坐標，以相應(yīng)的消 光值為縱坐標作標準曲線。標準曲線：6波長入=246nm標準曲線Vc標準溶液含量(UN)0. 02, 04. 06. 08. 010. 012. 01.0000. 9000. 8000. 7000. 6000. 5000. 4000. 3000. 2000. 1000. 000(二)樣品的測定1 .樣品的提取：將果蔬樣品洗凈、擦干、切碎、混勻。稱取于研 體中，加入4-l()ml 1%HC1,勻漿，轉(zhuǎn)移到5()ml容量瓶中，稀釋至刻 度。若提取液澄清透明，則可直接取樣測定，若有渾濁現(xiàn)象，可通過 離心(1 0000g, lOmin)來消除。2

4、 .樣品的測定：取1ml提取液，放入盛有2mli0%HQ的5()ml 容量瓶中，用蒸鏘水稀釋至刻度后搖勻。以蒸儲水為空白，在 243nm處測定其消光值。3 .待測堿處理液的制備：分別吸取1ml提取液，2ml蒸偏水和4ml IM NaOH溶液依次放入50ml容量瓶中，混勻，15min后加入4ml 10%HCl,混勻，并定容至刻度。以蒸播水為空白。在243nm處測 定其。D值。4 .由待測樣品與待測堿處理樣品的消光值之差和標準曲線，即可 計算出樣品中Vc的含量。5 .也可直接以待測堿處理液為空白，測出待測液的消光值，通過 查標準曲線，計算出樣品的Vc的含量。樣品待測堿吸光度（A值）四、數(shù)據(jù)整理丫=

5、樣品吸光值-待測堿吸光值二將y值代入函數(shù)式:y = x=|A=jigk義V總x 50Vc 的含量（Ng/gL= =568|_ig/g本實驗測得檸檬中Vc含量為568pig/g即每100克含568毫克實驗分析：由于Vc會被氧化，同時不同植物體內(nèi)不同程度地含有已 被氧化成深色產(chǎn)物的糅酸等成分，為盡量避免背景物質(zhì)、有色物質(zhì)的產(chǎn)生， 準確測定Vc含量，實險過程中應(yīng)盡量迅速操作。2, 6-二氯靛酚滴定法的優(yōu)點：它具有簡便、快速、比較準確等優(yōu)點， 適用于許多不同類型樣品的分析。但有下列缺點：1.在生物組織內(nèi)和組織提取液中，抗壞血酸能以脫氫抗 壞血酸及結(jié)合抗壞血酸的形式存在。它們同樣具有維生素的生理功能，但

6、 不能將2, 6-二氯酚靛酚還原脫色。（總抗壞血酸的量常用2, 4-二硝基苯肺 法和熒光分光光度法測定）2.生物組織提取物和生物體液中常含有其它還 原性物質(zhì)，其中有些在同樣的條件下也可使2, 6-二氯酚靛酚還原脫色。3. 在生物組織中，常有色素類物質(zhì)存在，給滴定終點的觀察造成困難*分光光度法優(yōu)點：1）無需標準化的試劑溶液，免去了大量的標準物質(zhì)的準備工作（配制，標 定）2）只需要一個高質(zhì)量的供電器，計時器，小鈞絲電極，且易于實現(xiàn)自動化 控制3）若電流維持一個定值，可大大縮短了電解時間4）電量容易控制及準確測量；方法靈敏度，準確度較高5）滴定劑來自電解時的電極產(chǎn)物，可實現(xiàn)容量分析中不易實現(xiàn)的滴定過程, 如Cu +