葡萄糖的一般雜質(zhì)檢查

1、實(shí)驗(yàn)二葡萄糖的一般雜質(zhì)檢查一、目的要求1掌握一般雜質(zhì)檢查的原理、操作方法及限量計(jì)算方法。2.熟悉藥物中一般雜質(zhì)檢查的目的和意義。二、基本原理葡萄糖是用淀粉以無(wú)機(jī)酸水解或在酶催化下經(jīng)過(guò)水解得稀葡萄糖液，再經(jīng)脫色、濃縮結(jié)晶制得。1 .國(guó)內(nèi)生產(chǎn)方法有以下幾種：酸水解法：以無(wú)機(jī)酸將淀粉水解為葡萄糖。HCI(CeHio05)n + nH2On C6Hi2QA雙酶水解法：以生物酶為催化劑將淀粉水解為葡萄糖。生物醐(C6HioO5)n + nH20 土物酷 nC6H12Q酸酶水解法：以鹽酸為液化劑，糖化酶為催化劑，將淀粉水解為葡萄糖。(C6H10Q) n + nH2O -十 糖化酶尸 nC3Hl205 A根

2、據(jù)葡萄糖生產(chǎn)工藝特點(diǎn)，應(yīng)進(jìn)行氯化物、重金屬、珅鹽等一般雜質(zhì)檢查，進(jìn)行 蛋白質(zhì)、可溶性淀粉等特殊雜質(zhì)檢查。2 .各種雜質(zhì)檢查原理如下：(1)氯化物檢查法氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀作用，生成氯化銀白色渾濁 液，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液和硝酸銀在同樣條件下處理生成的氯化銀渾濁相比 較，測(cè)定供試品中氯化物的限量。+IC1 + Ag> AgCI J硫酸鹽檢查法 藥物中微量硫酸鹽與氯化用貝在酸性溶液中作用，生成硫酸領(lǐng)微 粒而顯白色渾濁液，同一定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液與氯化鎖在同樣條件下，用同法處理生 成的渾濁比較，判斷藥物中含硫酸鹽的限量。2 2+SQ-十 Ba > BaSQ J鐵鹽檢查法 三價(jià)

3、鐵鹽在硝酸酸性溶液中與硫氟酸鹽生成紅色可溶性硫 氨酸鐵 絡(luò)離子，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液用同法處理后進(jìn)行比色。Fe3+6SCN- - Fe(SCN)63- 紅色進(jìn)行葡萄糖的鐵鹽檢查時(shí)，需在顯色前加硝酸3滴，煮沸5min，使Fe?+氧化 為F£3+。由于硝酸中可能含有亞硝酸，亞硝酸也能與硫氨酸根離子反應(yīng)生成紅色 的 亞硝酰硫氧化物，影響比色，因此加入顯色劑之前加熱煮沸有助于除去氧化氮，以消 除氧化氮生產(chǎn)的亞硝酸干擾。重金屬檢查法重金屬是指在實(shí)驗(yàn)條件下，能與S2作用生成硫化物而顯色的金屬雜質(zhì)，如，銀、鉛、汞、銅、鎘、韌、珅、睇、錫、鋅、鉆、銀等。在藥品生產(chǎn)過(guò) 程中遇到鉛的機(jī)會(huì)較多，且鉛在體內(nèi)易

4、積蓄中毒，故檢查時(shí)以鉛為代表。硫代乙酰胺 (thioacetamide在弱酸性(PH約3.5)溶液中水解，產(chǎn)生硫化氫，可與重金屬離子結(jié)合 生成有色硫化物的均勻沉淀，可與對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)液同法處理比較。本方法的適宜目視比色 范圍為27mL溶液中含鉛1020乜，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液12mL,檢查中根據(jù)規(guī)定 含重金屬的限量確定供試品的取用量。CH3CSNH2+H2O -> CH3coNH2+H2sPb2+H2sPbSJ + 2H +珅鹽檢查法中國(guó)藥典主要采用古蔡氏（GUtZeit）法檢查珅鹽。其原理是利用金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中的微量碎鹽作用生成具揮發(fā)性 的珅 化氫，遇漠化汞（或氯化汞）試紙

5、，產(chǎn)生黃色至棕色的珅斑，與定量標(biāo)準(zhǔn)珅溶液所 生成的珅斑比較，可判定藥物中含珅鹽的限量。其反應(yīng)如下：AsO3 3- + 3Zn + 9H+f AsHs f + 3Zn2+ + 3 出 0AsH3 + 2HgBr2-2HBr +ASH （HgBr） 2 （黃色）AsH3 + 3 HgBr2f 3HBr + AS （HgBr） 3 （棕色）五價(jià)珅在酸性溶液中也能被金屬鋅還原為珅化氫，但生成珅化氫的速度較三價(jià) 珅慢，故在反應(yīng)液中加入碘化鉀及酸性氯化亞錫將五價(jià)珅還原為三價(jià)碑，碘化鉀被氧 化生成的碘又可被氯化亞錫還原為碘離子。3 +3AsO4 - + 2I + 2H ->ASO3 - + | 2 +

6、 H2OASO43 + Sn2+ 2H+f AsOa3- + Sn4+ H2Ol2+Sn2+f 2I- + Sn4+溶液中的碘離子，與反應(yīng)中產(chǎn)生的鋅離子能形成配合物，使生成碑化氫的反應(yīng) 不斷進(jìn)行。一 2+2.4I + ZM -> Znl42氯化亞錫與碘化鉀存在，可抑制睇化氫的生成,因睇化氫也能與溟化汞試紙作 用生成睇斑，在實(shí)驗(yàn)條件下looJg睇存在不會(huì)干擾測(cè)定。氯化亞錫又可與鋅作用，在 鋅粒表面形成鋅錫齊，起去極化作用，從而使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生。（6）干燥失重測(cè)定法 干燥失重是指藥物在規(guī)定條件下經(jīng)干燥后所減失的重 量，根 據(jù)所減失的重量和取樣量計(jì)算供試品干燥失重的百分率。干燥失重檢查法

7、主要控制藥 物中的水分，也包括其他揮發(fā)性物質(zhì)如乙醇等。熾灼殘?jiān)鼨z查法熾灼殘?jiān)抵赣袡C(jī)藥物經(jīng)加熱炭化后再被硫酸破壞，于高溫（70OC800C）熾灼，有機(jī)物質(zhì)被破壞分解為揮發(fā)性物質(zhì)逸出，殘留的非揮發(fā)性無(wú)機(jī)雜質(zhì)（多為金屬的氧化物或鹽類(lèi)）成為硫酸鹽，稱(chēng)為熾灼殘?jiān)?。如熾灼殘?jiān)?留作重金屬檢查，則控制熾灼溫度在500c600co三、儀器與試劑電熱恒溫干燥箱，高溫電爐（馬福爐），普通電爐，水浴鍋，50mL比色管，量筒，50mL燒杯；葡萄糖，硝酸銀，硝酸，硫酸，氯化鋼，硫氨酸鏤，硫代乙酰胺， 甘油，氫氧化鈉，漠化鉀，碘化鉀，20目無(wú)珅鋅粒，氯化亞錫，醋酸鉛，漠化汞， 磺基水楊酸。四、實(shí)驗(yàn)方法1 .酸度取本品

8、2.0g,加水20mL溶解后，加酚猷指示液（取酚猷1 g，加乙醇100mL使 溶解，即得。）3滴與氫氧化鈉滴定液（0.02moPL） 0.20mL,應(yīng)顯粉紅色。2 .溶液的澄清度與顏色取本品5.0g,加熱水溶解后，放冷，用水稀釋至10mL,溶液應(yīng)澄清無(wú)色；如顯 渾濁，與1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液比較，不得更濃；如顯色，與對(duì)照液（取比色用氯化鉆液3.0mL、比色用銘酸鉀液3.0mL與比色用硫酸銅液6.0mL,加水稀釋成50mL） 1.0mL加水稀釋至10mL比較，不得更深。濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備稱(chēng)取于105c干燥至恒重的硫酸陰1.00g,置lOOmL 量瓶中，加水適量使溶解，必要時(shí)可在40c的水浴中溫?zé)崛芙猓?/p>

9、并用水稀釋至刻 度，搖勻，放置46h;取此溶液與等容量的10%烏洛托品溶液混合，搖勻，于 25C避光靜置24h,即得。本液置冷處避光保存，可在兩個(gè)月內(nèi)使用，用前搖勻。濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的制備取濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液15.0mL,B lOOOmL量瓶中，加水稀 釋至刻度，搖勻，取適量，置1cm吸收池中，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在550nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定，其吸光度應(yīng)在0.12O.15范圍內(nèi)。本液應(yīng)在48h內(nèi)使用，用前搖勻。濁度標(biāo)準(zhǔn)液的制備（1號(hào)）取濁度標(biāo)準(zhǔn)原液5.0mL加水95.0mL ,搖勻，即得。3 .乙醇溶液的澄清度取本品1.Og,加9。%乙醇30mL,置水浴上加熱回流約10min,溶液應(yīng)澄清。4 .氯化

10、物取本品O.6Og,加水溶解使成25mL （如溶液呈堿性，可滴加硝酸使遇石蕊試 紙 顯中性反應(yīng)），再加稀硝酸（取105mL硫酸加水稀釋至lOOOmL,即得。）10mL，溶 液如不澄清，應(yīng)濾過(guò)；置50mL納氏比色管中，加水使成約40mL，搖勻，即得供 試液。另取標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液6.0mL置50mL納氏比色管中，加稀硝酸IOmL,用水稀 釋使成約40mL，搖勻，即得對(duì)照液。向供試液與對(duì)照液中分別加硝酸銀試液（O.lmoPL） 1QmL ,用水稀釋使成50mL，搖勻，暗處放置5min，同置黑色背 景 上，從比色管上方向下觀察，如發(fā)生渾濁，樣品管不得比對(duì)照管更濃（0.01% ）°標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液

11、的制備：稱(chēng)取氯化鈉。1659,置10。01量瓶中，加水適量使 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量貯備液10mL，置lOOmL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每ImL相當(dāng)于1O©）5 硫酸鹽取本品2Qg,加水溶解使成約40mL （如溶液顯堿性，可滴加鹽酸使遇石蕊試紙 顯中性反應(yīng)）；溶液如不澄清，應(yīng)濾過(guò)；置50mL納氏比色管中，加稀鹽酸（取234mL硫酸加水稀釋至lOOOmL,即得。）2mL, 25%氯化鋼溶液5mL，加水稀釋 使 成50mL，搖勻，放置1Omin,如發(fā)生渾濁，與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液2QmL同法制 成的對(duì) 照液比較，不得更濃（OQ1%）。標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液的制備

12、：稱(chēng)取硫酸鉀CM81g,置1000mL量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每ImL相當(dāng)于10。©的SO4）6 .亞硫酸鹽與可溶性淀粉取本品1.Og,加水10mL溶解后，加碘試液（OQ5moPL） 1滴，應(yīng)即顯黃色。1 干燥失重取本品約1.0g，然后在105C干燥至恒重，減失重量不得過(guò)9.5%。8 .熾灼渣取本品1Q2Qg置已熾灼至恒重的瓷堪煙中，精密稱(chēng)定，緩緩熾灼至完全 炭化，放冷，力口硫酸0.51mL潤(rùn)濕，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡，在700C-800C熾灼 使完全灰化，移置干燥器內(nèi)，放冷，精密稱(chēng)定后，再在700c800c熾灼至恒重， 所得熾灼殘?jiān)坏贸^(guò)0.1% O9 .

13、蛋白質(zhì)取本品1.0g,加水10mL溶解后，加磺基水楊酸溶液（1-5） 3mL，不得發(fā)生沉 淀。10 .鐵鹽取本品2.0g,加水20mL溶解后，力口硝酸3滴，緩緩煮沸5min，放冷，加水 稀釋 使成45mL，加硫氨酸鏤溶液（30- 100） 3mL，搖勻，如顯色，與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液2.0mL 用同一方法制成的對(duì)照液比較，不得更深（0.001%） o標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液的制備：稱(chēng)取硫酸鐵鏤（FeNH4 （SO4）212H2O） 0.863g,置 1000mL量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5mL ,用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備 液。臨用前,精密量取貯備液10mL,1 100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即 得

14、（每ImL相當(dāng)于10|ig的Fe）11 .重金屬取本品4.0g置于25mL納氏比色管中，力口 23mL水溶解后，加醋酸鹽緩沖液 （pH3.5） 2mL，加硫代乙酰胺試液2mL，放置2min后，與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（10八階L Pb2+） 2mL用同一方法制成的對(duì)照液同置白紙上自上向下比較，不得更深（百萬(wàn)分 之五）°醋酸鹽緩沖液（PH=3.5）:取醋酸鏤25g加水25mL溶解后，加7mopt鹽酸溶 液38mL，用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準(zhǔn)確調(diào)節(jié)PH至3.5 （電位法指示），用 水稀釋至100mL,即得。硫代乙酰胺試液配制：取硫代乙酰胺4g,加水使溶解成100mL,置于冰箱中保

15、存。臨用前取混合液由氫氧化鈉液（1moH） 15mL,水5.0mL及甘油20mL組 成5.0mL ,加上述硫代乙酰胺溶液1.0mL,置水浴上加I熱20s,冷卻，立即使用。標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的制備：稱(chēng)取硝酸鉛0.160g,置1000mL量瓶中，加硝酸5mL與 水 50mL溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前,精密量取貯備液10mL,置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即 得（每1mL相當(dāng)于lOpg的Pb） O配制與貯存的玻璃容器均不得含鉛。12 .珅鹽取本品2.0g,置檢碎瓶中，加水5mL溶解后，加稀硫酸5mL與漠化鉀.漠試 液 （取漠30g,與溟化鉀30g,加水使溶解成100mL）

16、0.5mL,置水浴上加熱約20min , 使保持稍過(guò)量的浪存在，必要時(shí)，再補(bǔ)加濕化鉀漠試液適量，并隨時(shí)補(bǔ)充蒸發(fā)的水 分，放冷，加鹽酸5mL與水適量使成28mL，加碘化鉀試液5mL及酸性氯化亞錫試 液（取氯化亞錫1.5g,加水10mL與少量的鹽酸使溶解，即得。本液應(yīng)臨用新配）5 滴，在室溫放置10min后，加鋅粒2g,迅速將瓶塞塞緊（瓶塞上已安放好裝有醋酸 鉛棉及漠化汞試紙的導(dǎo)氣管），保持反應(yīng)溫度在25c40c （視反應(yīng)快慢而定，但 不應(yīng)超過(guò)40C）,反應(yīng)45min后，取出漠化汞試紙，將生成的 珅斑與標(biāo)準(zhǔn)珅溶液一定 量制成的標(biāo)準(zhǔn)珅斑比較，顏色不得更深（0.0001%）。標(biāo)準(zhǔn)碑溶液的制備：稱(chēng)取三氧

17、化二珅0.132g,置1000mL量瓶中，力口 20%氫 氧 化鈉溶液5mL溶解后，用適量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10mL,用水稀釋至 刻度， 搖勻，作為貯備液。臨用前,精密量取貯備液10mL,置1000mL量瓶中，加稀硫酸10mL,用水 稀釋 至刻度，搖勻，即得（每1mL相當(dāng)于1 Q的AS）。標(biāo)準(zhǔn)珅斑的制備：精密吸取標(biāo)準(zhǔn)珅溶液2mL置另一檢珅瓶中，加鹽酸5mL與水 21mL,自“再加碘化鉀試液5mL及”起，依法操作即可。五、操作注意事項(xiàng)1 -納氏比色管的選擇與洗滌比色或比濁操作，一般均在納氏比色管中進(jìn)行，因 此在選用比色管時(shí)，必須注意使樣品與標(biāo)準(zhǔn)管的體積相等，玻璃色質(zhì)一致，最好不帶 任何顏色

18、，管上的刻度均勻，如有差別，不得大于2mm。納氏比色管用后應(yīng)立即沖 洗，比色管洗滌時(shí)避免用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁劃出條痕影響比色或比濁。2平行操作原則進(jìn)行比色、比濁、碎鹽檢查時(shí)，樣品液與對(duì)照液的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng) 盡可能一致，嚴(yán)格按照操作步驟平行操作，按規(guī)定順序加入試劑。比色、比濁前可利 用手腕轉(zhuǎn)動(dòng)360。的旋搖使比色管內(nèi)試劑充分混勻。比色方法一般是將兩管同置于白 色背景上，從側(cè)面觀察；比濁方法是將兩管同置于黑色或白色背景上，自上而下地 觀察。3 實(shí)驗(yàn)中應(yīng)準(zhǔn)確選用量具，雜質(zhì)檢查中允許的誤差為± 10%，量筒的絕對(duì)誤差 為ImL,刻度吸管的絕對(duì)誤差為0.010.1mL,在實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)根據(jù)樣品、標(biāo)準(zhǔn)液的取用 量正確選用量器。例如，取標(biāo)準(zhǔn)液2mL應(yīng)選擇刻度吸管或移液管吸取 標(biāo)準(zhǔn)液。取 樣品2g,允許的誤差為0.2g,可選用稱(chēng)量精度為0.1g的普通天平。4 .進(jìn)行鐵鹽檢查時(shí)，采用硝酸將Fe2+氧化為Fe3+,標(biāo)準(zhǔn)液應(yīng)與樣品液同法操 作。樣品液加硝酸煮沸時(shí)，應(yīng)注意防止暴沸，必要時(shí)補(bǔ)充適量水。5 .碑鹽檢查時(shí)采用濕法破壞葡萄糖，在酸性溶液中用澳進(jìn)行有機(jī)破壞使珅游 離。有機(jī)破壞可在檢珅瓶中進(jìn)行，20min內(nèi)要保持過(guò)量的澳存在，隨時(shí)補(bǔ)充消耗的 漠化鉀澳試液和水分，使溶液呈黃色，20min后必須將多余的溟除盡，