微生物棉簽擦拭取樣方法驗(yàn)證方案

1、微生物棉簽擦拭取樣方法驗(yàn)證方案1主題內(nèi)容 本方案規(guī)定了微生物棉簽擦拭取樣驗(yàn)證的目的、原理、標(biāo)準(zhǔn)及內(nèi)容。2適用范圍本方案適用微生物棉簽擦拭法取樣。3責(zé)任人質(zhì)量部現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控員：負(fù)責(zé)棉簽擦拭取樣方法驗(yàn)證方案的起草及實(shí)施。 質(zhì)量部QC負(fù)責(zé)按計(jì)劃完成相關(guān)檢驗(yàn)任務(wù)，確保檢驗(yàn)結(jié)論正確可靠。質(zhì)量部QA負(fù)責(zé)監(jiān)督驗(yàn)證實(shí)施的全過(guò)程。驗(yàn)證管理員：協(xié)助驗(yàn)證方案的起草，組織協(xié)調(diào)驗(yàn)證工作，并總結(jié)驗(yàn)證結(jié)果， 出具驗(yàn)證報(bào)告。質(zhì)量管理部部長(zhǎng)：負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案及驗(yàn)證報(bào)告的審核。質(zhì)量授權(quán)人：負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案及驗(yàn)證報(bào)告的批準(zhǔn)。組長(zhǎng)：質(zhì)量管理部部長(zhǎng)驗(yàn)證小組成員：QA主管QC主管微生物限度檢驗(yàn)員現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控員 4內(nèi)容4.1 概述 制藥企業(yè)生產(chǎn)設(shè)備、生產(chǎn)

2、場(chǎng)所、用具等需要清潔，清潔后殘留物限度經(jīng) 檢驗(yàn)應(yīng)符合要求。檢驗(yàn)殘留物限度的方法有兩種：一是最終淋洗水取樣；二 是擦拭取樣。擦拭取樣優(yōu)點(diǎn)是能對(duì)最難清潔部位直接取樣，通過(guò)考察有代表 性的最難清潔部位的殘留物限度評(píng)價(jià)生產(chǎn)設(shè)備的清潔狀況。但取樣方法需驗(yàn) 證其可行性。因此需通過(guò)取樣方法驗(yàn)證確定清潔方法的有效性。能消除藥品 交叉污染及微生物污染。4.2 驗(yàn)證目的 通過(guò)對(duì)清洗消毒后微生物取樣方法的回收率實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)取樣方法的有效性、代表性和科學(xué)性，并為證明清潔方法有效性提供基本依據(jù)。4.3 驗(yàn)證原理 通過(guò)物理的擦拭對(duì)那些已經(jīng)干燥的殘留物取樣。通過(guò)選擇適當(dāng)?shù)牟潦萌軇⒉潦霉ぞ吆筒潦梅椒?，可將清洗過(guò)程中未溶解的，

3、已“干結(jié)”在設(shè)備表 面或溶解度很小的物質(zhì)擦拭下來(lái)。檢驗(yàn)結(jié)果能直接反映出個(gè)取樣點(diǎn)的清潔狀 況。4.4清潔方法執(zhí)行XX機(jī)清潔SOP、房間清潔SOP。4.5 驗(yàn)證方法4.5.1 .試驗(yàn)器具包括不銹鋼載片(規(guī)格50mm< 50mr)i、培養(yǎng)皿90mm醫(yī)用棉簽，以上器具均需要經(jīng)過(guò)121C、30分鐘滅菌后使用。4.5.1.1. 金黃色葡萄球菌菌液的制備接種金黃色葡萄球菌 CMCC(B)26 003新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培 養(yǎng)基中，30-35 C培養(yǎng)18-24小時(shí)。取上述培養(yǎng)物用 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液做10 倍系列稀釋制成每0.1ml含菌數(shù)50-100CFU的工作菌液，并采用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

4、計(jì)數(shù)。4.5.1.2. 白色念珠菌菌液的制備接種白色念珠菌CMCC(F)98D01 新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁或改良馬丁瓊脂培 養(yǎng)基中，23-28 C培養(yǎng)24-48小時(shí)。取上述培養(yǎng)物用 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液做10 倍系列稀釋制成每0.1ml含菌數(shù)50-100CFU的工作菌液，并采用改良馬丁瓊脂培 養(yǎng)基計(jì)數(shù)。4.5.1.3. 染菌不銹鋼載片制備載片脫脂處理：載片放在含肥皂的水中煮沸30分鐘，以純化水洗凈；用純化水煮沸10分鐘；用純化水漂洗至PH中性晾干備用。菌液滴染將經(jīng)滅菌的不銹鋼載片平鋪于無(wú)菌平皿內(nèi)， 滴加金黃色葡萄球菌、 白色念珠菌含 菌量為50-100CFU的菌液0.1ml，并均勻涂布于整個(gè)載

5、體表面。滴染菌液后，載 片置潔凈工作臺(tái)晾干備用。每種菌平行制備 2 個(gè)染菌不銹鋼載片。4.5.1.4. 擦拭取樣取無(wú)菌醫(yī)用棉簽 2 支，用 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液潤(rùn)濕后，在錐形瓶上擠壓除去 多余的溶液。 將其中 1 支棉簽頭按在染菌載片上， 用力使其稍彎曲， 平穩(wěn)而緩慢 地擦拭取樣表面， 擦拭路線按下圖所示， 擦拭過(guò)程應(yīng)覆蓋整個(gè)表面。 另取 1 支棉 簽再次對(duì)該不銹鋼載片表面擦拭， 擦拭路線和上次擦拭路線垂直。 擦拭完后， 用 無(wú)菌手術(shù)刀把棉簽的頭部（棉花部位）剪斷，投入裝有50ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液的錐形瓶中，密閉。共制備 12份檢品。取適宜稀釋的菌液0.1ml （約50-100CFU分

6、別注入平皿中，立即傾入冷卻至 45°C左右的培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備 2個(gè)平皿，測(cè)定所涂布的試驗(yàn)菌數(shù)。4.5.1.5. 檢驗(yàn) 將裝有樣品的錐形瓶反復(fù)振搖，使面前上的微生物釋放到溶液中。取樣品溶液 50ml 薄膜過(guò)濾，取出濾膜，菌面朝上，貼于培養(yǎng)基上。金黃色葡萄球菌用營(yíng)養(yǎng) 瓊脂培養(yǎng)基，白色念珠菌用改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基。4.5.1.6 培養(yǎng)及計(jì)數(shù)檢驗(yàn)結(jié)束后，將細(xì)菌平皿倒置于30-35 C培養(yǎng)箱培養(yǎng) 3天，霉菌平皿倒置于23-28 C培養(yǎng)箱培養(yǎng) 5 天，計(jì)數(shù)。4.5.2可接受標(biāo)準(zhǔn)：陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，總回收率不低于70% RSDC 20%4.6 檢驗(yàn)結(jié)果：見檢驗(yàn)記錄。4.7 驗(yàn)證次數(shù)：進(jìn)行

7、三次驗(yàn)證。5結(jié)論與評(píng)價(jià) 驗(yàn)證小組根據(jù)驗(yàn)證情況對(duì)驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)審，做出驗(yàn)證結(jié)論，由質(zhì) 量受權(quán)人作出是否批準(zhǔn)的決定及負(fù)責(zé)發(fā)放驗(yàn)證證書。 對(duì)驗(yàn)證結(jié)果評(píng)審應(yīng)包括： 驗(yàn)證試驗(yàn)是否有遺漏？ 驗(yàn)證實(shí)施過(guò)程中對(duì)驗(yàn)證方案有無(wú)修改？修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過(guò)批 準(zhǔn)？驗(yàn)證記錄是否完整？ 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求？ 是否需要進(jìn)一步補(bǔ)充試驗(yàn)？ 綜合驗(yàn)證的結(jié)果，判定取樣方法的有效性。6再驗(yàn)證：有以下情況需要進(jìn)行再驗(yàn)證。6.1 到了規(guī)定的再驗(yàn)證周期。6.2 若取樣方法有變化應(yīng)進(jìn)行再驗(yàn)證。6.4 潔凈區(qū)環(huán)境包括溫、濕度有重大變化應(yīng)進(jìn)行再驗(yàn)證。7附表7.1表一取樣檢驗(yàn)記錄可 接 受 標(biāo) 準(zhǔn)總回收率不低于70% RSDC 20%金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)白色念珠困檢驗(yàn)陽(yáng) 性 菌陰 性 菌1號(hào)樣2號(hào)樣3號(hào)樣4號(hào)樣5號(hào)樣RSD/ 檢驗(yàn) 人陽(yáng) 性 菌陰 性 菌1號(hào)樣2號(hào)樣3號(hào)樣4號(hào)樣5號(hào)樣RSD/ 檢驗(yàn) 人第次第次第次總 回 收 率結(jié) 論復(fù)核人： 日期：7.2表二驗(yàn)證結(jié)論與評(píng)價(jià)驗(yàn)證結(jié)論評(píng)