Eppendorf plus 移液槍校準(zhǔn)方法

1、Eppendorf plus 移液槍校準(zhǔn)方法1、準(zhǔn)備超純水、萬分之一天平（如果校正0.52.5ul量程的，至少要十萬分之一的天平）、溫濕度計(jì)、恒溫室，還需準(zhǔn)備一個(gè)小口容器，防止水分揮發(fā)。2、按移液器總量程的100%、50%、10%分別進(jìn)行第三和第四步。3、吸頭要反復(fù)吸取超純水三次后，吸取固定容積的超純水，推入放置在天平上的小口容器中，待數(shù)據(jù)穩(wěn)定讀取天平數(shù)值，同時(shí)記錄溫度。重復(fù)10次。4、將測(cè)量的數(shù)據(jù)用iso8655中的計(jì)算公式計(jì)算獲得對(duì)應(yīng)溫度下的體積，取平均值。5、根據(jù)三個(gè)測(cè)量點(diǎn)的偏差，用移液器專用的校正扳手通過移液器的校正窗進(jìn)行調(diào)整。6、重復(fù)3、4步，直至偏差在ISO8655的要求內(nèi)為止。I

2、SO 8655-1-2002活塞式容量測(cè)量儀器.第1部分:術(shù)語、一般要求和用戶使用建議ISO 8655-2-2002 活塞式容量測(cè)量儀器.第2部分:活塞式吸量管ISO 8655-6-2002 活塞式容量測(cè)量儀器.第6部分:確定測(cè)量誤差的重量分析法三、校準(zhǔn)方法及步驟操作環(huán)境：溫度應(yīng)控制在15-30，恒定在±0.5，相對(duì)濕度50%-80%，要保持較高的空氣濕度以減少水分蒸發(fā)對(duì)結(jié)果造成的影響。建議使用防蒸發(fā)裝置。測(cè)試應(yīng)在獨(dú)立無通風(fēng)的房間內(nèi)進(jìn)行，并配備溫度和濕度顯示。所需設(shè)備： 1、分析天平一臺(tái)。確保室內(nèi)空氣流動(dòng)平緩，應(yīng)避免天平正對(duì)空調(diào)出風(fēng)口。根據(jù)所測(cè)試的移液器的容量來選擇適合的天平：移液器

3、容量范圍天平可讀性天平的重復(fù)性和線性測(cè)量不準(zhǔn)確度1l10l0.001mg0.002mg0.002mg10100l0.01mg0.02mg0.02mg>100l0.1mg0.2mg0.2mg 2、純水、三蒸水或去離子水，需達(dá)到ISO 3696三級(jí)水的標(biāo)準(zhǔn)。3、獨(dú)立工作間，配備防震、防塵、遠(yuǎn)離熱源、無陽光直射的操作臺(tái)。4、溫度計(jì)、濕度計(jì)。校準(zhǔn)操作：為確保校準(zhǔn)的準(zhǔn)確性，采用三點(diǎn)移液十次，具體步驟如下：1、同溫處理，將移液器、吸頭、天平、測(cè)試用水、操作臺(tái)等校準(zhǔn)用具放置在同一工作間內(nèi)，至少四小時(shí)。2、在正式操作前，先預(yù)洗吸頭，吸排測(cè)試用水5次。3、用最大體積、50%最大體積和最小體積（或

4、10%最大體積），各移液10次，記錄每次移液的質(zhì)量。4、計(jì)算每組數(shù)據(jù)的平均值，代入計(jì)算公式，計(jì)算出不準(zhǔn)確度與不精確度。5、對(duì)比可允許的最大誤差限度，根據(jù)實(shí)際需要確定進(jìn)行調(diào)整。附：相關(guān)計(jì)算公式質(zhì)量體積轉(zhuǎn)換公式1：V=(w+e)×Z 式中： V=體積（l）w=質(zhì)量（mg）e=蒸發(fā)損失（mg）Z轉(zhuǎn)換因子以上公式參考ISO 8655標(biāo)準(zhǔn)。蒸發(fā)損失對(duì)測(cè)量小體積液體影響較大，因此應(yīng)將蒸發(fā)損失計(jì)算在內(nèi)。方法：在稱過重的容器中注入定量清水，按下秒表觀察30秒，讀出損失量，然后算出每秒的損失量。（若30s內(nèi)質(zhì)量損失3mg，則損失量為3mg÷30s=0.1mg/s）。記錄移液時(shí)間，將移液時(shí)間乘

5、以每秒損失量，算出實(shí)際蒸發(fā)損失量，代入上述公式計(jì)算實(shí)際體積。若使用防蒸發(fā)裝置，通常可以忽略蒸發(fā)損失量。不同溫度、壓力下水的質(zhì)量和體積不同，具體轉(zhuǎn)換因子Z值請(qǐng)查看附錄1。公式2：V20=m×K(t)式中： V20=標(biāo)準(zhǔn)溫度20下實(shí)際體積（l）m=質(zhì)量（mg）K(t)值以上公式參考JJG 646-2006移液器檢定規(guī)程。根據(jù)天平測(cè)試蒸餾水的質(zhì)量，以及檢測(cè)時(shí)溫度所對(duì)應(yīng)的K(t)值，即可計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)溫度下蒸餾水的實(shí)際體積。具體K(t)值請(qǐng)查看附表2。計(jì)算式時(shí)，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際需要，選擇公式進(jìn)行計(jì)算。不準(zhǔn)確度（系統(tǒng)誤差）不準(zhǔn)確度是指實(shí)際移取體積和顯示體積的差異。A=- V0 式中： A=不準(zhǔn)確度=平均

6、值V0 =標(biāo)稱容量A%=100%×A/V0 不精確度（隨機(jī)誤差）不精確度指每次實(shí)際移取體積與實(shí)際體積平均值的差異，其變化是不可預(yù)計(jì)的測(cè)量誤差的一部分。它可以表示為標(biāo)準(zhǔn)差S或變異系數(shù)CV：式中：S =標(biāo)準(zhǔn)偏差=平均值n =測(cè)量次數(shù)Vi =單次測(cè)量數(shù)值CV=100%×S附表1：轉(zhuǎn)換因子Z(l/mg)數(shù)值表（無菌水）溫度氣壓（KPa） 1KPa=10hPa（）80859095100101.310515.001.00171.00181.00191.00191.00201.00201.002015.501.00181.00191.00191.00201.00201.00201.002

7、116.001.00191.00201.00201.00211.00211.00211.002216.501.00201.00201.00211.00211.00221.00221.002217.001.00211.00211.00221.00221.00231.00231.002317.501.00221.00221.00231.00231.00241.00241.002418.001.00221.00231.00231.00241.00251.00251.002518.501.00231.00241.00241.00251.00251.00261.002619.001.00241.0025

8、1.00251.00261.00261.00271.002719.501.00251.00261.00261.00271.00271.00281.002820.001.00261.00271.00271.00281.00281.00291.002920.501.00271.00281.00281.00291.00291.00301.003021.001.00281.00291.00291.00301.00311.00311.003121.501.00301.00301.00311.00311.00321.00321.003222.001.00311.00311.00321.00321.0033

9、1.00331.003322.501.00321.00321.00331.00331.00341.00341.003423.001.00331.00331.00341.00341.00351.00351.003623.501.00341.00351.00351.00361.00361.00361.003724.001.00351.00361.00361.00371.00371.00381.003824.501.00371.00371.00381.00381.00391.00391.003925.001.00381.00381.00391.00391.00401.00401.004025.501

10、.00391.00401.00401.00411.00411.00411.004226.001.00401.00411.00411.00421.00421.00431.004326.501.00421.00421.00431.00431.00441.00441.004427.001.00431.00441.00441.00451.00451.00451.004627.501.00451.00451.00461.00461.00471.00471.004728.001.00461.00461.00471.00471.00481.00481.004828.501.00471.00481.00481

11、.00491.00491.00501.005029.001.00491.00491.00501.00501.00511.00511.005129.501.00501.00511.00511.00521.00521.00521.005330.001.00521.00521.00531.00531.00541.00541.0054 附表2：K（t）值表（=0.00045/）水溫K(t)水溫K(t)水溫K(t)cm3/gcm3/gcm3/g15.01.00421318.41.00326121.81.00243615.11.00418318.51.00323521.91.00241415.2

12、1.00415318.61.00320922.01.00239115.31.00412318.71.00318422.11.00236915.41.00409418.81.00315822.21.00234715.51.00406418.91.00313222.31.00232515.61.00403519.01.00310722.41.00230315.71.00400619.11.00308222.51.00228115.81.00397719.21.00305622.61.00225915.91.00394819.31.00303122.71.00223816.01.00391919.4

13、1.00300622.81.00221616.11.00389019.51.00298122.91.00219516.21.00386219.61.00295623.01.00217316.31.00383319.71.00293123.11.00215216.41.00380519.81.00290723.21.00213116.51.00377719.91.00288223.31.00211016.61.00374920.01.00285823.41.00208916.71.00372120.11.00283423.51.00206816.81.00369320.21.00280923.6

14、1.00204716.91.00366520.31.00278523.71.00202617.01.00363720.41.00276123.81.00200617.11.00361020.51.00273723.91.00198517.21.00358220.61.00271424.01.00196517.31.00355520.71.00269024.11.00194517.41.00352820.81.00266624.21.00192417.51.00350120.91.00264324.31.00190417.61.00347421.01.00261924.41.00188417.7

15、1.00344721.11.00259624.51.00186417.81.00342021.21.00257324.61.00184517.91.00339321.31.00255024.71.00182518.01.00336721.41.00252724.81.00180518.11.00334021.51.00250424.91.00178618.21.00331421.61.00248125.01.00176618.31.00328821.71.002459   附表3：移液器容量允許誤差和測(cè)量重復(fù)性簡表JJG-646ISO 8655檢定點(diǎn)系統(tǒng)誤差（容量

16、允差）隨機(jī)誤差（重復(fù)性）標(biāo)稱容量系統(tǒng)誤差（容量允差）隨機(jī)誤差（重復(fù)性）l±（%）（%）l±（%）（%）0.120.010.0   0.220.010.0   0.520.010.0   112.06.015.05.0212.06.024.02.058.04.052.51.5108.04.0101.20.8204.02.0201.00.5254.02.0   403.01.5   503.01.5501.00.41002.01.

17、01000.80.31252.01.0   1502.01.0   2001.51.02000.80.32501.51.0   3001.51.0   5001.00.55000.80.310001.00.510000.80.312501.00.5      20000.80.325000.50.2   50000.60.250000.80.3100000.60.2100000.60.3

18、 注：標(biāo)稱容量為制造商在移液器上標(biāo)注的可使用的最大容量，如量程范圍是50-1200l，其標(biāo)稱容量為1200l。JJG-646中，同一個(gè)檢定點(diǎn)在不同的量程范圍，容量允差、重復(fù)性要求一致，即無論是1-10l的移液器還是10-100l的移液器，10l這一檢定點(diǎn)容量允差都為8%，重復(fù)性都為4%。ISO 8655中，所有有效量程點(diǎn)的容量允差、重復(fù)性都與標(biāo)稱容量的一致，即10-100l的移液器，10l、20l、50l、100l，其容量允差要求都為0.8%，重復(fù)性都為0.3%。四、維護(hù)保養(yǎng)1 清潔和消毒為確保移液器的準(zhǔn)確度和精確度，應(yīng)根據(jù)具體使用情況進(jìn)行定期保養(yǎng)。尤其在移取腐蝕性溶劑后，應(yīng)該對(duì)移液

19、器進(jìn)行清潔。通過簡單的清潔和保養(yǎng)，可適當(dāng)?shù)匮娱L移液器的使用壽命。注意：在清潔或消毒前，請(qǐng)務(wù)必將電池取出。 外部清洗方法：根據(jù)使用情況，可以用沾有70%乙醇或60異丙醇的濕棉布拭擦移液器表面，去除外部污垢，再用雙蒸水拭擦一遍，然后晾干。每天開始工作前，檢查移液器外表是否有灰塵或污垢，尤其是吸頭連桿部分。 內(nèi)部清洗清潔步驟：1、按照步驟拆卸需要清潔的部件。2、外套柄、吸頭連桿用沾有70%乙醇或60異丙醇的濕棉布拭擦，再用雙蒸水淋洗，然后晾干。3、一般情況，O型圈、活塞無需清潔。如沾有固體顆狀物，請(qǐng)用干凈的干棉布輕輕拭去即可。4、給O型圈、活塞上潤滑脂，只需涂上薄薄一層即可。5、按步驟組裝好移液器。

20、 消毒移液器清潔干凈后，在121,1bar下，消毒20分鐘。消毒后在室溫下冷卻至少2個(gè)小時(shí)后方可使用。部分手動(dòng)移液器可整支消毒，電動(dòng)移液器只可以下端消毒，請(qǐng)根據(jù)產(chǎn)品的具體情況進(jìn)行消毒。整支在紫外線下進(jìn)行消毒滅菌，無需拆卸。2 日常維護(hù)針對(duì)不同性質(zhì)的液體，有不同的清洗和保養(yǎng)方法，見下表：處理液體預(yù)防方法清洗和保養(yǎng)方法水溶液和緩沖液 拆卸移液器下端，用雙蒸水沖洗受污染的部件，在60以下干燥或者自然晾干，并給活塞涂抹少量潤滑脂無機(jī)酸或堿=使用帶有濾芯的吸頭移液結(jié)束后，將移液器下端拆下，并放在通風(fēng)處。必要時(shí)可用雙蒸水沖洗受污染的部件，在60以下干燥或者自然晾干，并給活塞涂抹少量潤滑脂傳染性液

21、體=使用帶有濾芯的吸頭=正向移液將移液器下端拆下，放在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)的消毒劑中浸泡30分鐘，隨后用雙蒸水清洗，對(duì)受污染的部件進(jìn)行121、1bar、20分鐘高壓滅菌細(xì)胞培養(yǎng)物=使用帶有濾芯的吸頭將移液器下端拆下，放在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)的消毒劑中浸泡30分鐘，隨后用雙蒸水清洗，對(duì)受污染的部件進(jìn)行121、1bar、20分鐘高壓滅菌有機(jī)溶劑=快速移液移液結(jié)束后，將移液器下端拆下，并放在通風(fēng)處。必要時(shí)可用雙蒸水沖洗受污染的部件，在60以下干燥或者自然晾干，并給活塞涂抹少量潤滑脂放射性溶液=使用帶有濾芯的吸頭=正向移液將移液器下端拆下，將受污染部件放在復(fù)合溶液或?qū)Ｓ玫那鍧嵢芤褐薪?0分鐘后，用雙蒸水清洗，在60下烘

22、干或自然晾干，并給活塞涂抹少量潤滑脂核酸或蛋白質(zhì)溶液=使用帶有濾芯的吸頭=正向移液核酸：在氨基乙酸或鹽酸緩沖液(pH2.0)中煮沸10分鐘，用雙蒸水清洗干凈，在60下烘干或自然晾干，并給活塞涂抹少量潤滑脂蛋白質(zhì)：將移液器下端拆下，用去污劑清洗，再用雙蒸水淋洗，在60下烘干或自然晾干 故障排除現(xiàn)象原因解決方法活塞運(yùn)動(dòng)異常=活塞安裝過緊=活塞潤滑不充分=活塞表面潤滑脂凝固=活塞表面有異物或損壞=在活塞、O型圈和吸頭連桿之間有雜質(zhì)和顆粒=O型圈損壞拆開下端，重新組裝給活塞上潤滑脂清除舊潤滑脂，上新潤滑脂清潔活塞或更換活塞清潔并潤滑O型圈和吸頭連桿更換O型圈移液體積不準(zhǔn)確或漏液=吸頭安裝不當(dāng)=吸頭不匹配=在吸頭與吸頭連桿之間有雜質(zhì)顆粒=吸頭損壞=移液過快=吸頭離開液面過快=活塞表面有異物或損壞=在活塞、O型圈和吸頭連桿之間有雜質(zhì)和顆粒=O型圈與活