細(xì)菌總數(shù)測定精

1、05$食品加工技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫FCK» PROCESSMG TECWCXOeY PROFtSS»OMAL TEACKNG RE-SCuBCES BAIWAE菌落總數(shù)測定（一）實(shí)驗(yàn)材料1. 儀器與設(shè)備：恒溫培養(yǎng)箱、托盤天平、電爐、吸管、三角瓶、平皿、試管、試管 架、酒精燈、滅菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蠟筆。2. 培養(yǎng)基和試劑：75%乙醇、0.85%生理鹽水、平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基：胰蛋白胨5.0g、 酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、瓊脂15.0g、蒸餾水1000mL、pH 7.0 ±.23. 待檢樣：利樂包裝鮮牛奶250mL（二）實(shí)驗(yàn)方法與步驟1. 檢驗(yàn)程序菌

2、落總數(shù)檢驗(yàn)程序：檢樣一做成幾個適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液 一選擇3個適宜稀釋度各以1mL之量分別入滅 菌平皿內(nèi)每皿內(nèi)加入46°C 15-20mL營養(yǎng)瓊脂置36± °C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)（48i2） h取 出菌落數(shù)報告2. 檢樣稀釋及培養(yǎng)（1） 以無菌操作，將檢樣包裝打開，用吸管取 25mL鮮牛奶，放于含有225mL滅 菌生理鹽水的500mL滅菌玻璃三角瓶內(nèi)（瓶內(nèi)預(yù)先置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠），經(jīng)充分振搖 做成1:10的均勻稀釋液。（2）用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理 鹽水的試管內(nèi)（注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液，下同），振搖試管混合均勻，做成

3、 1:100的稀釋液。（3）另取1mL的滅菌吸管，按上項(xiàng)操作順序作 10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀 釋一次，即換用1支1mL滅菌吸管。（4） 根據(jù)食品衛(wèi)生檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)要求和檢樣的菌落數(shù)量，選擇3個連續(xù)適宜稀釋度即10、101、10 2,分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個稀釋度作兩個平皿。（5）稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時將涼至46C營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿15mL20mL，并轉(zhuǎn)動平皿使與稀釋檢樣混合均勻，同時將平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內(nèi)作空白對照。（6） 等瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置 36±C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)（48

4、±0 h取出，計算平 板內(nèi)菌落數(shù)目乘以倍數(shù)，即得1mL樣品所含菌落總數(shù)。（三）檢樣中細(xì)菌菌落總數(shù)的計算與報告1菌落計算方法（1）菌落計數(shù)方法做平板菌落計數(shù)時，可用肉眼觀查，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平 板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。（2）菌落計數(shù)的報告 平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在30- 300 CFU之間的平板作為菌落總數(shù)測定標(biāo)準(zhǔn)。一個稀釋度使用兩個平板，應(yīng)采用兩個平板平均數(shù)， 稀釋度的選擇應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30- 300 CFU之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之。若有兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30 - 300之間，按以下公式計算：Z CN =-g

5、+0.1 n2 d式中：N =樣品中菌落數(shù)工C =含適宜范圍CFU的平板菌落數(shù)之和n1 =第一稀釋度（低稀釋度）平板個數(shù)n2 =第二稀釋度（高稀釋度）平板個數(shù)d =稀釋因子（第一稀釋度）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于 300 CFU，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以 稀釋倍數(shù)報告之，若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于 30 CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以 稀釋倍數(shù)報告若所有稀釋度及樣品原液均無菌落生長，則以小于I乘以最低稀釋倍數(shù)報告之，若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在 30-300 CFU之間，其中一部分大于300 CFU或小于 30 CFU時，則以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。 菌落數(shù)的報告菌落數(shù)小于100 CFU時，按 四舍五入”原則修約，以整數(shù)報告。菌落數(shù)大于或等于100 CFU時，第3位數(shù)字采用 四舍五入”原則修約后，取前2位 數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來表示，按四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù)，則報告菌落蔓延。若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以 CFU/mL為單位報告。（四）實(shí)驗(yàn)報告平皿菌落計數(shù)時，可用肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板 的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板的平