毛細血管采血微量吸管牛鮑計數(shù)板的使用及顯微鏡法紅細胞計數(shù)ppt課件

1、實驗二實驗二 毛細血管采血、微量吸管及改良牛毛細血管采血、微量吸管及改良牛鮑計數(shù)板運用及顯微鏡法紅細胞計鮑計數(shù)板運用及顯微鏡法紅細胞計數(shù)數(shù) 醫(yī)學檢驗技術(shù)教研醫(yī)學檢驗技術(shù)教研室室 13級級檢驗用檢驗用一、毛細血管采血法目的：掌握毛細血管采血方法。實驗器材：公用“采血針、微量定量吸管、標本容器等。標本：末梢血。操作方法首先用手指按摩采血部位，使中指或無名指指尖自然充血，再用75%酒精棉球消毒皮膚，待酒精揮發(fā)枯燥后，用左手拇指和食指固定采血部位，右手持消毒刺針，自指尖腹側(cè)迅速刺入2 mm3 mm，讓血液自然流出，用消毒棉球擦去第一滴血后，按需求依次采血，采血終了，用消毒干棉球壓住傷口片刻即可。 本卷

2、須知 所選擇的采血部位，不能有凍瘡、紫所選擇的采血部位，不能有凍瘡、紫紺、水腫、炎癥等；皮膚消毒后，一定要紺、水腫、炎癥等；皮膚消毒后，一定要乙醇揮發(fā)枯燥后采血，否那么流出的血會乙醇揮發(fā)枯燥后采血，否那么流出的血會四處分散而不成滴；為防止交叉感染，采四處分散而不成滴；為防止交叉感染，采血針在運用前應進展高壓滅菌，并嚴厲實血針在運用前應進展高壓滅菌，并嚴厲實行一人一針制；如穿刺后血液不易流出，行一人一針制；如穿刺后血液不易流出，可于傷口遠端稍加壓力，或重新穿刺。切可于傷口遠端稍加壓力，或重新穿刺。切忌用力擠壓，以免混入大量組織液，使血忌用力擠壓，以免混入大量組織液，使血液稀釋影響檢驗結(jié)果，且血液

3、更易凝固；液稀釋影響檢驗結(jié)果，且血液更易凝固；進展多項檢查時，采取標本的順序為血小進展多項檢查時，采取標本的順序為血小板計數(shù)、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定、白板計數(shù)、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定、白細胞計數(shù)等；出血時間測定需另外刺一部細胞計數(shù)等；出血時間測定需另外刺一部位，凝血時間另行測定。位，凝血時間另行測定。二、微量吸管運用1、目的：掌握微量吸管的實驗方法。2、原理：擠壓乳膠頭使微量吸管產(chǎn)生負壓而汲取液體。3、實驗用品：一次性微量吸管、帶孔乳膠吸頭、試管、2ml吸管、NS等。4、標本：新穎抗凝血5、操作方法1預備吸管 將帶孔的乳膠吸頭套在微量吸管上，銜接處應嚴密不漏氣。2加稀釋液 取試管1支，加生

4、理鹽水2ml.3持管吸血 右手拇指和中指夾住吸管及吸頭交接處，示指蓋住吸頭小孔，三個指頭細微用力，排出適量的氣體使管內(nèi)構(gòu)成較小的負壓，將管尖插入抗凝血或末梢血，三個指頭漸漸松勁，汲取抗凝血到所需刻度后，抬起示指，留意管尖一直不要分開液面，以免吸入氣泡，也不要過度用力將血液吸入乳膠吸頭。 4拭凈余血 用干棉球順微量吸管口拭凈余血。 5稀釋血液 將微量吸管插入含生理鹽水或稀釋液的試管底部，漸漸排出吸管內(nèi)的血液，再用上清液沖洗管內(nèi)余血2-3次。 6洗滌吸管 依次用蒸餾水洗凈，95%乙醇脫水。乙醚枯燥。如為一次性微量吸管，可省略該步驟。6、本卷須知1操作步驟3需反復練習才干準確汲取血液到所需量。2一次

5、汲取血液到所需的量，吸管內(nèi)不能有空節(jié)也不能汲取血液過多，最好不要超越所需刻度的2mm.3稀釋血液前一定要拭凈管外余血，釋放血液時的動作不能太猛烈，防止破壞血液成分或不能利用上清液將管內(nèi)血液洗凈。7、實驗評價 微量吸管運用是手工法血細胞分析的第一步，有很多要素影響檢驗結(jié)果的準確性和準確度，如一次性吸管的質(zhì)量、操作者的技術(shù)熟練程度和責任心等。三、改良牛鮑計數(shù)板的運用一目的：掌握改良牛鮑計數(shù)板構(gòu)造及運用方法。二原理：一定倍數(shù)稀釋的血液或體液混勻后滴入具有固定體積和精細劃分刻度的改良牛鮑計數(shù)板中，在顯微鏡下對所選擇的區(qū)域中的細胞進展計數(shù)，在乘以稀釋倍數(shù)，即可換算成單位體積內(nèi)的細胞數(shù)。三、實驗用品1、器

6、材 改良牛鮑計數(shù)板、公用蓋玻片、光學顯微鏡、綢布、微量吸管、帶孔乳膠吸頭、刻度吸管、試管。2、試劑 紅細胞稀釋液四標本：抗凝血五操作1、稀釋血液 取試管1支，加紅細胞稀釋液2ml,加抗凝血10微升，立刻混勻，制成紅細胞懸液。2、預備計數(shù)板 用綢布拭凈改良牛鮑計數(shù)板和專業(yè)蓋玻片，采用推式法從計數(shù)板下緣向前平推蓋玻片，將其蓋在計數(shù)池上。3、沖池 用完了吸管汲取制備好的再次混勻的紅細胞懸液，沿蓋玻片與計數(shù)板之間的縫隙沖入計數(shù)池。充液量以恰好充溢一側(cè)計數(shù)池為宜，不可過多、過少或有氣泡，否那么需重新操作。附：牛鮑計數(shù)板根本構(gòu)造 血球計數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有四個槽構(gòu)成三個平臺。中間的平臺較

7、寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各刻有一小方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分九個大方格，中央的一大方格作為計數(shù)用，稱為計數(shù)區(qū)。計數(shù)區(qū)的刻度有兩種：一種是計數(shù)區(qū)分為16個中方格大方格用三線隔開，而每個中方格又分成25個小方格；另一種是一個計數(shù)區(qū)分成25個中方格中方格之間用雙線分開，而每個中方格又分成16個小方格。但是不論計數(shù)區(qū)是哪一種構(gòu)造，它們都有一個共同特點，即計數(shù)區(qū)都由400個小方格組成。 計數(shù)區(qū)邊長為1mm，那么計數(shù)區(qū)的面積為lmm2，每個小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片后，計數(shù)區(qū)的高度為0.1mm，所以每個計數(shù)區(qū)的體積為0.1mm3，每個小方格的體積為1/4000mm3。四、

8、顯微鏡法紅細胞計數(shù) 原理 用等滲稀釋液將血液稀釋一定的用等滲稀釋液將血液稀釋一定的倍數(shù)后，滴入計數(shù)板，在顯微鏡下計倍數(shù)后，滴入計數(shù)板，在顯微鏡下計數(shù)一定范圍內(nèi)紅細胞數(shù)，經(jīng)換算可求數(shù)一定范圍內(nèi)紅細胞數(shù)，經(jīng)換算可求得每升血液中的紅細胞數(shù)。得每升血液中的紅細胞數(shù)。紅細胞稀釋液 HayemHayem液赫姆氏紅細胞稀釋液液赫姆氏紅細胞稀釋液 枸櫞酸鈉稀釋液枸櫞酸鈉稀釋液 普通生理鹽水或加普通生理鹽水或加1%1%甲醛的生理鹽水甲醛的生理鹽水 Hayem液主要成分及作用：主要成分及作用：NaCl NaCl 調(diào)理浸透壓；調(diào)理浸透壓；Na2SO4 Na2SO4 調(diào)理浸透壓，提高比重防止細胞粘調(diào)理浸透壓，提高比重

9、防止細胞粘連；連；HgCl2 HgCl2 防腐；防腐；缺陷：遇高球蛋白血癥患者，由于蛋白質(zhì)沉缺陷：遇高球蛋白血癥患者，由于蛋白質(zhì)沉淀而使紅細胞易凝集。淀而使紅細胞易凝集。枸櫞酸鈉稀釋液主要成分及作用：主要成分及作用：NaCl NaCl 調(diào)理浸透壓；調(diào)理浸透壓；枸櫞酸鈉枸櫞酸鈉 調(diào)理浸透壓，抗凝；調(diào)理浸透壓，抗凝；甲醛甲醛 防腐；防腐； 優(yōu)點：配制簡單，可使紅細胞在稀釋后較長優(yōu)點：配制簡單，可使紅細胞在稀釋后較長時間堅持正常形狀并且不凝集，故運用較時間堅持正常形狀并且不凝集，故運用較廣。廣。普通生理鹽水或加1%甲醛的生理鹽水 急時用。急時用?！静僮鞣椒ā俊静僮鞣椒ā?l、取紅細胞稀釋液、取紅細胞

10、稀釋液1.99ml毫升，放入一小試毫升，放入一小試管內(nèi)。管內(nèi)。2、用微量吸管吸血至、用微量吸管吸血至l0ul處。處。3、擦去管尖外部余血將血液迅速悄然吹入盛、擦去管尖外部余血將血液迅速悄然吹入盛有紅細胞稀釋液的試管內(nèi)，吸上清液嗽洗有紅細胞稀釋液的試管內(nèi)，吸上清液嗽洗吸管吸管2-3次，立刻搖勻。次，立刻搖勻。4、用微量吸管或玻棒取混懸液少量，充入計、用微量吸管或玻棒取混懸液少量，充入計數(shù)池內(nèi)。數(shù)池內(nèi)。5、待、待23分鐘，讓紅細胞完全下沉后，將計分鐘，讓紅細胞完全下沉后，將計數(shù)板平放在顯微鏡臺上，用低倍鏡察看，數(shù)板平放在顯微鏡臺上，用低倍鏡察看，如紅細胞分布均勻即可換高倍鏡進展計數(shù)。如紅細胞分布均

11、勻即可換高倍鏡進展計數(shù)。 紅細胞計數(shù)的區(qū)域紅細胞計數(shù)的區(qū)域: 中心大方格中的中心大方格中的5個中方格個中方格(正中一正中一個和四角各一個個和四角各一個)。充液位置充液位置充液位置充液位置為紅細胞計數(shù)區(qū)域為紅細胞計數(shù)區(qū)域 計數(shù)原那么計數(shù)原那么: 數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的計數(shù)原那數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的計數(shù)原那么么 即凡壓在中方格邊線即凡壓在中方格邊線(雙線雙線)上的紅細胞，上的紅細胞，只計上側(cè)與左側(cè)線上的細胞，而壓在下側(cè)只計上側(cè)與左側(cè)線上的細胞，而壓在下側(cè)與右側(cè)線上者不計入。與右側(cè)線上者不計入。壓線細胞的計數(shù)原那么：壓線細胞的計數(shù)原那么：數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下 【計算】【計

12、算】 紅細胞數(shù)紅細胞數(shù)/L=5個中方格內(nèi)紅細胞數(shù)個中方格內(nèi)紅細胞數(shù)510200106 /L=5個中方格內(nèi)紅細胞數(shù)個中方格內(nèi)紅細胞數(shù)1010 /L =5個中方格內(nèi)個中方格內(nèi)RBC數(shù)數(shù)/1001012 式中式中: 5: 5個中方格換算成個中方格換算成1個大方格個大方格 10: 1個大方格容積為個大方格容積為0.1ul，換算成，換算成 1.0 uL。 200： 血液的稀釋倍數(shù)血液的稀釋倍數(shù) 106 : 由由1uI換算成換算成1L例：紅細胞稀釋液例：紅細胞稀釋液1.99ml1.99ml，加血，加血10ul10ul，混勻。充液，靜置混勻。充液，靜置2 23min3min，計數(shù)中央，計數(shù)中央大大方格內(nèi)四角

13、和正中五個中方格內(nèi)的紅細方格內(nèi)四角和正中五個中方格內(nèi)的紅細胞，共胞，共600600個，請計算紅細胞計數(shù)結(jié)果。個，請計算紅細胞計數(shù)結(jié)果。 RBC/LRBC/L600 / 5600 / 525251010 200200 1061066.06.010121012報告方式：報告方式： RBC: X.XX l012/L七七. . 參考值參考值男性：男性： (4.0 (4.05.5)5.5)10121012L L 女性：女性： (3.5 (3.55.0)5.0)10121012L L新生兒：新生兒：(6.0(6.07.0)7.0)10121012L L 400 400550 550 萬萬/ul/ul 35

14、0 350500 500 萬萬/ul/ul( RBC )【本卷須知】【本卷須知】 1、吸管、試管要留意清潔、枯燥以防溶、吸管、試管要留意清潔、枯燥以防溶血，操作迅速防止血液凝固，如有血凝塊應血，操作迅速防止血液凝固，如有血凝塊應重新采血。重新采血。 同時做血紅蛋白測定，白細胞計數(shù)和分類同時做血紅蛋白測定，白細胞計數(shù)和分類計數(shù)，在采血時應先做血膜再做紅細胞，然計數(shù)，在采血時應先做血膜再做紅細胞，然后做白細胞，血紅蛋白檢驗，防止紅細胞破后做白細胞，血紅蛋白檢驗，防止紅細胞破壞。壞。 2、充液：、充液： 充液前，紅細胞復液要充分搖勻，紅細充液前，紅細胞復液要充分搖勻，紅細胞懸液注入計數(shù)池內(nèi)要求分布均勻，不可胞懸液注入計數(shù)池內(nèi)要求分布均勻，不可有氣泡，亦不可有多余液體外溢。有氣泡，亦不可有多余液體外溢。 3、質(zhì)量控制：、質(zhì)量控制： 中方格內(nèi)紅細胞