五指毛桃水提液對輻射致小鼠肺細(xì)胞DNA損傷的保護(hù)作用研究

1、五指毛桃水提液對輻射致小鼠肺細(xì)胞DNA損傷的保護(hù)作用研究王曉平1，黃翔2，段麗菊3，陸奇豐1，岑業(yè)文（1.玉林師范學(xué)院化學(xué)與生物系，玉林市537000；2.玉林師范學(xué)院體育系，玉林市537000；3.鄭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，鄭州市450001）中圖分類號R285；R142.3文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號1001-0408（2011）03-0201-0360摘要目的：研究五指毛桃水提液對60Co射線致小鼠肺細(xì)胞DNA損傷的保護(hù)作用。方法：Co射線單次全肺照射復(fù)制小鼠肺損傷模型，實驗設(shè)計分輻射前給藥、輻射后給藥2個模塊，各模塊分陰性對照組、輻射模型組和五指毛桃水提液高、中、低劑量（20、10、5g·

2、;kg-1）組，灌胃給藥，連續(xù)7d，通過單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)檢測肺細(xì)胞DNA損傷情況。結(jié)果：各模塊的輻射模型組小鼠肺細(xì)胞DNA的尾部DNA百分率（TailDNA）和尾矩（TailMoment）高于陰性對照組（P0.01）；各給藥組的TailDNA和TailMoment均顯著低于輻射模型組（P0.01），且隨著給藥劑量的增加，TailDNA和TailMoment逐漸降低。結(jié)論：五指毛桃水提液對輻射造成的小鼠肺細(xì)胞DNA損傷有一定的保護(hù)作用。關(guān)鍵詞五指毛桃；DNA損傷；單細(xì)胞凝膠電泳；防治作用；輻射PreventiveEffectofAqueousExtractfromFicussimpliciss

3、imaonRadiation-inducedDNAInjuryofLungCellsinMiceWANGXiao-ping，LUQi-feng，CENYe-wen（Dept.ofChemicalandBiology，YulinNormalCollege，Yulin537000，China）HUANGXiang（Dept.ofPhysicalEducation，YulinNormalCollege，Yulin537000，China）DUANLi-ju（CollegeofPublicHeath，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450001，China）KEYWORDSF

4、icussimplicissima；DNAinjury；Singlecellgelelectrophoresis；Preventiveeffect；Radiation放射治療是肺癌、食管癌和乳腺癌等胸部腫瘤的主要治療手段。在治療過程中，正常肺組織不可避免地受到射線照射而造成損傷，從而引起危害較大的并發(fā)癥，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量。輻射作用于機體后，可直接作用于DNA等生物大分子，使分子變性和細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，并可產(chǎn)生大量的自由基，進(jìn)而引起一系列損傷1。目前，對放射性肺損傷的臨床治療主要是使用腎上腺皮質(zhì)激素聯(lián)合抗生素，但療效不理想，而且激2素治療易引起腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。細(xì)胞保護(hù)劑氨磷汀可一定限度地保護(hù)正

5、常組織，但存在較大毒副作用，且價格昂貴3。因此，尋找高效、低毒的放射性肺損傷防治藥物，已成為當(dāng)今研究的熱點。中藥毒性低，來源廣泛，在防治放射性損傷的研究中顯示出巨大的優(yōu)勢和潛力。五指毛桃是華南地區(qū)廣泛使用的一種中藥，具有健脾益氣、化濕舒筋、益肺止咳之功效4。近年來的研究表明，五指毛桃能夠抑制細(xì)胞內(nèi)自由基反應(yīng)，具有抗脂質(zhì)廣西教育廳科研項目（200809MS124；200911MS195）副教授。研究方向：藥理學(xué)、生理學(xué)。電話E-mail：sywxp年第3過氧化作用5。本研究以60Co射線照射小鼠建立放射性肺損傷模型，應(yīng)用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)，探討五指毛桃對輻射引起的小鼠

6、肺細(xì)胞DNA損傷的防治作用，為五指毛桃這一天然抗輻射藥物在臨床上改善輻射損傷的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。1.1儀器與材料儀器FYC-50H60Co治療機（上海醫(yī)用核子儀器廠）；DYY-型電泳槽、DYY-11B型三恒電泳儀（北京市六一儀器廠）；BX51·R-32FB3F01正置熒光相差生物顯微鏡（日本Olympus公司）；150萬相素接口數(shù)字功能輸出相機（CCD，日本Nikon公司）；L420臺式低速自動平衡離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）。1.2試藥五指毛桃購自玉林市中藥材公司，經(jīng)筆者鑒定為真品；正常熔點瓊脂糖（NMA）、低熔點瓊脂糖（LMA）均購自美國Sigma公司；TritonX-1

7、00、十二烷基肌氨酸鈉、溴化乙錠（EB）均購自美國Premega公司；二甲亞砜（DMSO）、乙二胺四乙酸二鈉（Na2EDTA）、三羥甲基氨基甲烷（Tris-base）和氫氧化鈉Pharmacy2011Vol.22·201·（NaOH）均為國產(chǎn)分析純。1.3動物SPF級昆明種小鼠80只，6周齡，體重（20±2）g，購自廣西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗動物中心（動物生產(chǎn)許可證號：SCXK桂2009-0002）。DNA百分率和彗尾長度的乘積。2.4統(tǒng)計學(xué)方法試驗結(jié)果以±s表示，采用Origin7.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。3結(jié)果2.1方法與結(jié)果五指毛桃水提液的制備五指毛

8、桃水提液的制備參照文獻(xiàn)6方法略加改進(jìn)：取五指毛桃干燥藥材，用10倍體積的蒸餾水浸泡1h，加熱煮沸3h，趁熱濾取藥液；再加8倍量體積蒸餾水，煮沸30min，合并2次濾液，濃縮至相當(dāng)于生藥2g·mL-1。4貯藏，用時稀釋至所需濃度。2.2復(fù)制模型及分組80只小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7d后，隨機分為2個模塊，即輻射前給藥和輻照后給藥。輻射前給藥模塊的給藥方式為先ig五指毛桃水提液，每天1次，連續(xù)7d，最后一次給藥1h后照射；輻射后給藥模塊的給藥方式為先照射，后ig五指毛桃水提液，每天1次，連續(xù)7d。每模塊各5組，即陰性對照（Control）組、輻射模型（IR）組、輻射+低劑量給藥（IR+LD）組、輻

9、射+中劑量給藥（IR+MD）組、輻射+高劑量給藥（IR+HD）組，每組8只。五指毛桃水提液低、中、高劑量按相當(dāng)于生藥5、10、20g·kg-1給予，control組、IR型組給予等量生理鹽水。除control組外，其余組小鼠進(jìn)行60Co射線單次全肺照射，照射率為182.28cGy·-1min，照射野為18cm×18cm，照射距離為75cm，照射劑量為6Gy。-1新配制的電泳緩沖液（1mmol·LNa2EDTA，300mmol·-1LNaOH，pH13.0）浸泡20min，以便雙鏈DNA解螺旋。室溫下調(diào)節(jié)緩沖液液面高低，于19V、190mA下電泳

10、20min。隨后將玻片浸入0.4mol·L-1Tris-base緩沖液（pH7.5）中，中和30min。DNA和TailMoment與Control組比較均顯著升高（P0.01），提示復(fù)制模型成功。IR+LD、IR+MD、IR+HD組的TailDNA和TailMoment均顯著低于IR組（P0.01），且隨著給藥劑量的增加，TailDNA和TailMoment逐步降低。輻射前給藥IR+HD組的TailMoment與Control組比較無顯著差異（P0.05）。五指毛桃水提液對小鼠肺細(xì)胞DNA的影響見表1。（x±s）表1五指毛桃水提液對小鼠肺細(xì)胞DNA的影響Tab1Effec

11、tofaqueousextractfromF.simplicissimaon（x±s）DNAoflungcellsinmice組別Control組IR組IR+LD組IR+MD組IR+HD組#與control組比較：P0.01；與IR組比較：P0.01#vs.controlgroup：P0.01；vs.IRgroup：P0.014討論放射治療是惡性腫瘤的主要治療手段之一，但在胸部腫瘤的放射治療中，部分肺組織不可避免地受到一定劑量的射線照射而損傷。其中，肺組織DNA是輻射的主要靶分子。很多實驗證實，肺損傷的重要原因之一是氧自由基的生成。氧自由基能損傷內(nèi)皮細(xì)胞膜，增加肺毛細(xì)血管的通透性，引

12、起肺水腫和肺氣體交換受損7。本研究結(jié)果表明，小鼠經(jīng)6Gy60Co射線照射后，肺細(xì)胞的TailDNA及TailMoment升高，表明60Co射線可引起小鼠肺細(xì)胞DNA鏈的斷裂。DNA鏈斷裂是輻射所致生物效應(yīng)中最重要的原初損傷8，被認(rèn)為是啟動和促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素。當(dāng)肺細(xì)胞DNA鏈斷裂后，基因不能正常表達(dá)，造成細(xì)胞錯誤生長，機體內(nèi)各項活動受到干擾。中醫(yī)理論認(rèn)為，輻射引起的肺損傷屬于熱毒傷津、氣陰兩虛、肺失宣肅證，治療以益氣養(yǎng)陰、潤肺止咳、清熱解毒、健脾9和胃為主要治則。臨床與實驗研究表明，一些具有清熱解毒、養(yǎng)陰益氣、活血化瘀功效的中藥具有不同程度的預(yù)防和治11療放射性肺損傷的作用10，。五指

13、毛桃具有益氣補虛、行氣解12郁、健脾化濕、止咳化痰的功效，在臨床上廣泛使用。本研究結(jié)果表明，在輻射前和輻射后給予五指毛桃水提液均可使小鼠肺細(xì)胞的TailDNA及TailMoment值降低，提示五指毛桃對60Co射線造成的小鼠肺細(xì)胞DNA損傷有一定的保護(hù)作用。五指毛桃含有豐富的生物堿、補骨脂素和多糖等活性成分，這些物質(zhì)具抗氧化作用，能提高機體的免疫力，對輻射損傷有一定的防治作用。五指毛桃對輻射肺損傷有一定的療效，但其抗輻射損傷機制有待于進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn)中國藥房年第22卷第3期參麥注射液增強羥基喜樹堿對腫瘤血管生成的抑制作用研究1劉萍1，沈培強2，吳東方（1.武漢大學(xué)中南醫(yī)院藥學(xué)部，武漢市43

14、0071；2.正大青春寶藥業(yè)有限公司，杭州市310023）中圖分類號R285；R979.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號1001-0408（2011）03-0203-03摘要目的研究參麥注射液聯(lián)合羥基喜樹堿對腫瘤血管生成的影響。方法：將人結(jié)腸癌細(xì)胞株（CW-2）細(xì)胞分為4組，即空白、參麥、羥基喜樹堿、聯(lián)合用藥組。分組后的CW-2細(xì)胞培養(yǎng)12h，制得條件培養(yǎng)液，條件培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC），MTT法檢測細(xì)胞生存率，并用細(xì)胞培養(yǎng)小室檢測其細(xì)胞遷移活性。結(jié)果：與空白組比較，其他3個用藥組的HUVEC生存率和遷移活性均顯著降低（P0.05）；聯(lián)合用藥組與參麥組、羥基喜樹堿組比較，HUVEC生存率和遷移

15、活性則進(jìn)一步降低。結(jié)論：參麥注射液聯(lián)合羥基喜樹堿可增強對腫瘤血管生成的抑制作用。關(guān)鍵詞參麥注射液；羥基喜樹堿；腫瘤；人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；血管生成；抑制作用InhibitionEffectofHCPTonTumorAngiogenisisEnhancedbyShenmaiInjectionLIUPing，WUDong-fang（Dept.ofPharmacy，ZhongnanHospitalofWuhanUniversity，Wuhan430071，Chi-na）SHENPei-qiang（ZhengdaQingchunbaoPharmaceuticalCo.，Ltd.，Hangzhou31002

16、3，China）ABSTRACTOBJECTIVE：ToexploretheeffectofShenmaiinjectioncombinedwithHCPTontumorangiogenesis.METHODS：CW-2cellsweredividedinto4groups：blankgroup，Shenmaiinjectiongroup，HCPTgroup，ShenmaiinjectioncombinedwithHCPTgroup.CW-2cellswereculturedfor12htoobtainconditionalculturemedium.HUVECwereconditionall

17、ycultured，thensurvivalratewasmeasuredbyMTTassays，migratoryactivitywasdetectedbyTranswellroom.RESULTS：Comparedwithblankgroup，thesurvivalrateandmigratoryactivityofHUVECin3experimentalgroupsalldecreasedsignificantly（P0.05）.Thesur-vivalrateandmigratoryactivityofHUVECinShenmaiinjectioncombinedwithHCPTgro

18、upreducedsignificantly，comparedwithShenmaiinjectiongroupandHCPTgroup.CONCLUSION：ShenmaiinjectioncombinedwithHCPTcouldincreaseinhibitioneffectofHCPTontumorangiogenesis.KEYWORDSShenmaiinjection；HCPT；Tumor；HUVEC；Angiogenesis；Inhibitioneffect參麥注射液是根據(jù)“生脈散”的配方研制出的一種靜脈注射液，主要原料為紅參和麥冬，有效成分為人參皂苷、麥冬皂苷、麥冬黃酮和微量的人參多糖。羥基喜樹堿是珙桐類植物喜樹的提取物