PCR技術(shù)及其應(yīng)用考試試卷2014年

1、PCR技術(shù)及其應(yīng)用課程考試試卷（碩士研究生）班級(jí)： 碩士12班 學(xué)號(hào)： 20141100043 姓名 戴鵬輝 得分 ： 一、下頁(yè)試題為單項(xiàng)選擇題，請(qǐng)將每題的正確答案填在試卷首頁(yè)的答題欄內(nèi)（共50題，每題1.8分，總分90分）題號(hào)12345678910答案題號(hào)11121314151617181920答案題號(hào)21222324252627282930答案題號(hào)31323334353637383940答案題號(hào)41424344454647484950答案二、簡(jiǎn)述RACE的原理和技術(shù)(10分)1、PCR反應(yīng)的五個(gè)要素是：（ ）引物 dNTP Mg離子 模板 水 TaqDNA聚合酶水請(qǐng)選擇A、B、C、D、2、

2、PCR產(chǎn)物鑒定常用的方法是：（ ）A、凝膠電泳法B、雜交法C、免疫法3、PCR反應(yīng)中隨著復(fù)性溫度升高，擴(kuò)增的特異性：（ ）A、 升高B、 下降C、 不變4、原位PCR技術(shù)中對(duì)組織和細(xì)胞進(jìn)行固定的目的是：（ ）A、 維持細(xì)胞形態(tài)B、 創(chuàng)造一個(gè)既便于試劑進(jìn)入細(xì)胞，又能減少產(chǎn)物滲出的內(nèi)環(huán)境C、 防止操作中的細(xì)胞移動(dòng)5、增效PCR包括（ ）輪PCR擴(kuò)增A、1B、2C、3D、越多越好6、增效PCR第一輪擴(kuò)增的目的是（ ）增加引物量增加模板量延長(zhǎng)作用時(shí)間，降低聚合酶作用速度，以提高忠實(shí)性阻止過(guò)多引物間的作用的二聚體的形成，提高特異性A、B、C、D、7、增效PCR第二輪擴(kuò)增的目的是（ ）增加模板量提高特異性

3、延長(zhǎng)非特異性條帶增加特異靶序列產(chǎn)量A、B、C、D、8增效PCR第一輪擴(kuò)增時(shí)要求引物的量比通常其它PCR方法（ ）A、 高B、 一樣C、 低D、 無(wú)所謂9增效PCR反應(yīng)總的循環(huán)次數(shù)比其它PCR方法多的原因是（ ）A、 為了得到更大量的產(chǎn)物B、 為了提高特異性C、 為了提高敏感性D、 雖然引物總量未變，但由于分兩次加入，使每次反應(yīng)濃度降低了，為了得到相同的擴(kuò)增產(chǎn)物必須增加循環(huán)次數(shù)10、膜結(jié)合PCR之所以可以對(duì)很少的模板或污染比較嚴(yán)重的樣品進(jìn)行擴(kuò)增，其主要依據(jù)是：A、 模板與膜固定后可以作徹底漂洗B、 模板與膜結(jié)合后可以提高PCR擴(kuò)增效率C、 模板與膜結(jié)合后，可用不同引物先后對(duì)不同區(qū)段進(jìn)入擴(kuò)增D、

4、薄膜可以吸附其它雜質(zhì)從而消除污染物的影響提高信噪比11、對(duì)模板進(jìn)行固定以前首先應(yīng)使樣品變性，其原因是：（ ）A、 為PCR反應(yīng)作準(zhǔn)備B、 使樣品中的雜質(zhì)變性后除去C、 薄膜結(jié)合單鏈DNA的能力強(qiáng)D、 提高Taq聚合酶的活力12、膜結(jié)合PCR的擴(kuò)增效率比液相擴(kuò)增法為：（ ）A、 低B、 高C、 相同D、 不一定13、膜結(jié)合PCR必須（ 0A、 適當(dāng)減少循環(huán)次數(shù)B、 適當(dāng)減少引物用量C、 適當(dāng)延長(zhǎng)延伸反應(yīng)時(shí)間D、 適當(dāng)增加循環(huán)次數(shù)14、膜結(jié)合PCR不能減輕下列（ ）樣品的污染：A、 蛋白質(zhì)和肽類B、 核酸C、 脂類物質(zhì)D、 小分子代謝產(chǎn)物15、反向PCR擴(kuò)增到的序列與通常PCR的差別在于：（ 0A

5、、 反向PCR擴(kuò)增的是已知序列之間的未知，而通常PCR反應(yīng)擴(kuò)增的是已知序列兩側(cè)的已知序列。B、 反向PCR擴(kuò)增的是已知序列兩側(cè)的未知序列，而通常PCR反應(yīng)擴(kuò)增的是已知序列之間的序列。C、 反向PCR擴(kuò)增的是未知序列兩側(cè)的已知序列，而通常PCR擴(kuò)增的是已知序列兩側(cè)的已知序列。D、 反向PCR擴(kuò)增的是已知序列，而常規(guī)PCR擴(kuò)增的是未知序列。16、反向PCR之所以能擴(kuò)增未知序列的原因在于：（ ）A、 通過(guò)限制性酶切然后環(huán)化改變了序列的拓?fù)潢P(guān)系B、 通過(guò)控制反應(yīng)條件改變了聚合酶的聚合方向C、 通過(guò)限制性酶切然后環(huán)化，改變了序列的內(nèi)外關(guān)系D、 設(shè)計(jì)的特殊引物改變了延伸反應(yīng)方向17、反向PCR中為何要將環(huán)

6、化的DNA分子切成結(jié)狀（ ） A、 環(huán)狀雙鏈DNA分子易于形成超螺旋結(jié)構(gòu)不利于進(jìn)行PCR反應(yīng)B、 DNA聚合酶不能有效結(jié)合環(huán)狀分子C、 環(huán)狀雙鏈分子使擴(kuò)增的非特異性太強(qiáng)D、 環(huán)狀雙鏈無(wú)法解鏈，也就無(wú)法與引物結(jié)合18、將環(huán)狀DNA分子切成線性分子時(shí)要求限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)位于：（ ）A、 已知序列外側(cè)B、 未知序列內(nèi)側(cè)C、 已知序列內(nèi)側(cè)D、 不易判斷19、可在成環(huán)的DNA分子中引入切割的方法有：（ ）煮沸法限制性酶切法EDTA-寡核苷酸介導(dǎo)的特異裂解法機(jī)械剪切法A、B、C、D、20、重組PCR的重組過(guò)程實(shí)質(zhì)上發(fā)生在：（ ）A、 體外B、 體內(nèi)C、 體外體內(nèi)都有關(guān)D、 不易判斷21、重組PCR能實(shí)現(xiàn)重

7、組的原因在于：（ ）A、 將要重組的核酸分子共同轉(zhuǎn)化細(xì)胞，細(xì)胞自身就具有使其發(fā)生重組的功能B、 將要重組的分子酶切后以人工方式拼接到一起實(shí)現(xiàn)重組C、 在要重組的兩個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物端部設(shè)計(jì)上同源序列以實(shí)現(xiàn)同源重組D、 重組實(shí)質(zhì)上是一種隨機(jī)交換DNA的過(guò)程，無(wú)法人為控制22、用重組PCR進(jìn)行定點(diǎn)誘變時(shí)，通常將錯(cuò)配位點(diǎn)設(shè)計(jì)在引物的（ ）A、3端B、5端C、中部D、無(wú)法人為控制23、用重組PCR進(jìn)行定點(diǎn)誘變時(shí)，突變位點(diǎn)的局限性在于：（ ）A、 只能位于序列中部B、 只能位于序列的兩側(cè)C、 只能引入單個(gè)突變堿基D、 只能引入兩個(gè)突變堿基24、重疊延伸法不能（ 0A、 將突變引入序列中部B、 實(shí)現(xiàn)基因拼接C、

8、引入多個(gè)突變堿基D、 擴(kuò)增未知序列并引入突變25、一般來(lái)說(shuō)巢式PCR分為（ ）擴(kuò)增循環(huán)。A、1個(gè) B、2個(gè) C、3個(gè) D、多個(gè)26、巢式PCR之所以要用兩對(duì)引物分別進(jìn)行擴(kuò)增，原因是（ 0提高擴(kuò)增效率節(jié)約試劑用量保證反應(yīng)的高特異性簡(jiǎn)化常規(guī)PCR操作A、B、C、D、27、有關(guān)巢式一步PCR的說(shuō)法中正確的是：（ ）第一輪PCR引物較第二輪PCR引物短第一輪PCR引物比第二輪PCR引物退火溫度高第一輪PCR引物比第二輪PCR引物退火溫度低第一輪PCR引物較第二輪PCR引物長(zhǎng)A、B、C、D、28、固著PCR是：（ ）A、 將模板與固相的瓊脂糖珠相連B、 將引物與薄膜固定C、 將DNA聚合酶用耦聯(lián)劑固定到

9、瓊脂糖珠上D、 將引物用耦聯(lián)劑固定到瓊脂糖珠上29、固著PCR的主要優(yōu)點(diǎn)在于（ ）A、 擴(kuò)增產(chǎn)物處于溶液中易于分離純化B、 便于聚合酶在高忠實(shí)性條件下進(jìn)行擴(kuò)增C、 擴(kuò)增產(chǎn)物與固定化的瓊脂糖珠相連，便于分離D、 因?yàn)橐锱c瓊脂糖珠相連，所以可以容易把擴(kuò)增產(chǎn)物同引物分開(kāi)30、與膜結(jié)合PCR相比，固著PCR的不同點(diǎn)在于（ 0膜結(jié)合PCR將膜板結(jié)合到膜上，而固著PCR使引物固相化膜結(jié)合PCR便于純化樣品，而固著PCR便于純化分離擴(kuò)增產(chǎn)物膜結(jié)合PCR所用引物無(wú)特殊要求，而固著PCR所用引物應(yīng)能與固相底質(zhì)發(fā)生耦聯(lián)兩種PCR對(duì)聚合酶有不同要求A、B、C、D、31、單一特異引物PCR的通用引物可與（ ）配對(duì)結(jié)

10、合。A、 載體中的特定序列B、 插入片段的特異序列C、 載體中的非特異序列D、 插入片段的非特異序列32、單一特異引物PCR的特異引物可與（ ）配對(duì)結(jié)合。A、載體中的特定序列B、插入片段的特異序列C、載體中的非特異序列D、插入片段的非特異序列33、單一特異引物PCR的特異性擴(kuò)增體現(xiàn)在（ ）A、通用引物可與載體中的特定序列特異結(jié)合B、通用引物可與插入片段的特異序列特異結(jié)合C、特異引物可與載體中的特異序列特異結(jié)合D、特異引物可與插入片段的特異序列特異結(jié)合34、重復(fù)DNA序列引物擴(kuò)增法對(duì)重復(fù)序列的要求是（ ）A、 序列為低度重復(fù)B、 序列為串邊重復(fù)C、 序列為散布重復(fù)D、 序列為高度重復(fù)35、重復(fù)D

11、NA序列引物擴(kuò)增法得到的產(chǎn)物是（ ）A、 均一的B、 不均一的C、 不特異的D、 難以判斷36、下列關(guān)于逆轉(zhuǎn)錄PCR的說(shuō)法中不正確的是（ ）A、 樣品中混有少量DNA對(duì)擴(kuò)增結(jié)果無(wú)影響B(tài)、 需要將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA才能進(jìn)行PCRC、 逆轉(zhuǎn)錄PCR方法比其它許多RNA研究方法的靈敏度高D、 逆轉(zhuǎn)錄PCR要求RNA比較完善37、逆轉(zhuǎn)錄PCR對(duì)RNA樣品的要求是（ ）RNA分子完整 不含DNA 不含蛋白質(zhì)和其它雜質(zhì) RNA的來(lái)源有限制A、B、C、D、38、逆轉(zhuǎn)錄PCR反應(yīng)中合成cDNA需要的引物種類有（ ）隨機(jī)六聚體下游引物寡聚（dT）寡聚（dA）A、B、C、D、39、有關(guān)引物設(shè)計(jì)中哪一個(gè)不正確（

12、 ）A、 引物的跨度以180-500KB為宜B、 5和3無(wú)回文結(jié)構(gòu)C、 引物最好跨越一個(gè)內(nèi)含子D、 上下引物的Tm值應(yīng)有較大差異40、一步逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增法所依據(jù)的是（ ）A、 新一代Taq聚合酶既具有聚合酶活性也有逆轉(zhuǎn)錄酶活性B、 適當(dāng)控制反應(yīng)條件C、 特殊的離子濃度D、 特殊的擴(kuò)增對(duì)象41、常規(guī)PCR存在的問(wèn)題是（ ）A、 加熱太慢，反應(yīng)不能恰開(kāi)始B、 PCR反應(yīng)前升溫過(guò)程中聚合酶產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增C、 緩慢的升溫過(guò)程使聚合本科活力不能有效出現(xiàn)D、 加熱過(guò)程破壞了引物和靶序列的結(jié)合影響聚合反應(yīng)42、熱啟動(dòng)PCR克服常規(guī)PCR問(wèn)題的辦法是（ ）高溫時(shí)加入必須的反應(yīng)成份加快加熱過(guò)程加入無(wú)活性的酶然后高

13、溫激活改變擴(kuò)增對(duì)象A、B、C、D、43、在提取核酸過(guò)程中，除去大量蛋白質(zhì)的操作是（ ）A、 煮沸 B、蛋白酶K C、酚/氯仿抽提 D、乙醇沉淀44、RNA應(yīng)保存于：（ ）A、 水中B、 TE緩沖液C、 DEPC處理的離子水中D、 凍干保存45、如何監(jiān)制PCR實(shí)驗(yàn)的污染情況？（ ） 設(shè)立陰性和陽(yáng)性對(duì)照重復(fù)實(shí)驗(yàn)合成新引物消毒試劑A、B、C、D、46、下列說(shuō)法不正確的是：（ ）A、 放射線不會(huì)造成核酸分子結(jié)構(gòu)的破壞B、 多數(shù)放射性核素半衰期較短，必須隨標(biāo)隨用C、 放射性核素與相應(yīng)的元素具有完全相同的化學(xué)性質(zhì)D、 放射性核素的檢測(cè)具有極高的特異性47、PCR進(jìn)行DNA的生物素標(biāo)記錯(cuò)誤的是（ ）A、 反應(yīng)中生物素化dUTP濃度不能太高B、 以重組質(zhì)粒為模板，模板DNA量不能太多C、 一般標(biāo)記生物素化探針長(zhǎng)度小于500bpD、 瓊脂糖凝膠電泳分析PCR產(chǎn)物，標(biāo)記的DNA較未標(biāo)記的產(chǎn)物泳動(dòng)快48、欲減少成套寡核苷酸篩選cDNA文庫(kù)的雜交陽(yáng)性克隆總數(shù)應(yīng)（ ）A、 采用雜交溶劑如氯化四甲銨B、 設(shè)計(jì)較短的寡核苷酸C、 改變探針G+C含量D、 增加簡(jiǎn)并性49、體外轉(zhuǎn)錄生成的RNA探針