植物細(xì)胞工程和動物細(xì)胞工程

1、專題專題2 2細(xì)胞工程細(xì)胞工程現(xiàn)代生物科技專題現(xiàn)代生物科技專題細(xì)細(xì)胞胞工工程程細(xì)胞生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)分子生物學(xué)細(xì)胞整體水平或細(xì)細(xì)胞整體水平或細(xì)胞器水平胞器水平按照人們的意愿來改按照人們的意愿來改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品或獲得細(xì)胞產(chǎn)品應(yīng)用的原理和方法應(yīng)用的原理和方法概念概念分類分類研究的目的研究的目的研究的水平研究的水平植物細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)是植物細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)是什么？通常采用的技術(shù)手段有哪什么？通常采用的技術(shù)手段有哪些？些？一植物細(xì)胞工程的基本技術(shù)一植物細(xì)胞工程的基本技術(shù)所采用技術(shù)的理論基礎(chǔ) 植物細(xì)胞工程

2、通常采用的技 術(shù) 手 段 植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng) 植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞的全能性一、植物組織培養(yǎng)的基本原理一、植物組織培養(yǎng)的基本原理植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞的全能性原因：原因：表現(xiàn)的條件：表現(xiàn)的條件：在植物體中未表現(xiàn)的原因：在植物體中未表現(xiàn)的原因：每個細(xì)胞都含有本物種的全部遺傳信息，每個細(xì)胞都含有本物種的全部遺傳信息，都具有發(fā)育成一個完整個體的潛能。都具有發(fā)育成一個完整個體的潛能。離體離體無菌、無毒的環(huán)境無菌、無毒的環(huán)境適宜的培養(yǎng)基適宜的培養(yǎng)基(營養(yǎng)物質(zhì)和植物激營養(yǎng)物質(zhì)和植物激素素) 適宜的環(huán)境條件適宜的環(huán)境條件(溫度等溫度等)在個體發(fā)育過程中，基因在特定的時空

3、條件下選擇在個體發(fā)育過程中，基因在特定的時空條件下選擇性表達的結(jié)果。性表達的結(jié)果。1、有關(guān)全能性的表述中，不正確的是（、有關(guān)全能性的表述中，不正確的是（ ） 受精卵在自然條件下能使后代細(xì)胞形成完受精卵在自然條件下能使后代細(xì)胞形成完 整個體，因此全能性最高整個體，因此全能性最高 生物體內(nèi)細(xì)胞由于分化全能性不能表達生物體內(nèi)細(xì)胞由于分化全能性不能表達 卵細(xì)胞和受精卵一樣，細(xì)胞未分化，全能卵細(xì)胞和受精卵一樣，細(xì)胞未分化，全能 性很高性很高 植物細(xì)胞離體培養(yǎng)在一定條件下能表現(xiàn)出植物細(xì)胞離體培養(yǎng)在一定條件下能表現(xiàn)出 全能性全能性C2、在一個生物體內(nèi)，細(xì)胞沒有表現(xiàn)出、在一個生物體內(nèi)，細(xì)胞沒有表現(xiàn)出全能性，原

4、因是（全能性，原因是（ ） 細(xì)胞失去了全能性細(xì)胞失去了全能性細(xì)胞中的基因部分丟失細(xì)胞中的基因部分丟失 細(xì)胞中的基因選擇性表達細(xì)胞中的基因選擇性表達細(xì)胞中的基因變異不同細(xì)胞中的基因變異不同C、植物組織培養(yǎng)的概念、植物組織培養(yǎng)的概念 （一）植物組織培養(yǎng)技術(shù)（一）植物組織培養(yǎng)技術(shù)、植物組織培養(yǎng)的過程、植物組織培養(yǎng)的過程3 3、自我評價、自我評價 叢芽（胚叢芽（胚狀體）狀體）外植體外植體植物體植物體脫分化脫分化再分化再分化過程過程（分化）（分化）（未分化）（未分化）（分化）（分化）幼芽或幼根？幼芽或幼根？條件？條件？優(yōu)點？優(yōu)點？特點？特點？繁殖速度快繁殖速度快不受季節(jié)限制不受季節(jié)限制幼苗無毒幼苗無毒保

5、持優(yōu)良性狀保持優(yōu)良性狀適宜溫度、無光適宜溫度、無光照、照、 pH和無菌環(huán)和無菌環(huán)境。境。無機、有機成分無機、有機成分和植物激素（和植物激素（生長生長素，細(xì)胞分裂素和素，細(xì)胞分裂素和赤霉素赤霉素）無定形狀態(tài)無定形狀態(tài)薄壁細(xì)胞薄壁細(xì)胞高度液泡化高度液泡化排列疏松、無規(guī)則排列疏松、無規(guī)則分化程度低分化程度低去分化較易去分化較易離體的植物離體的植物器官、組織器官、組織或細(xì)胞或細(xì)胞愈傷組織愈傷組織1、關(guān)于愈傷組織形成過程的正確敘述是（、關(guān)于愈傷組織形成過程的正確敘述是（ ） A、愈傷組織的形成是離體植物細(xì)胞分化的結(jié)果、愈傷組織的形成是離體植物細(xì)胞分化的結(jié)果 B、愈傷組織的形成是離體植物細(xì)胞分裂的結(jié)果、愈

6、傷組織的形成是離體植物細(xì)胞分裂的結(jié)果 C 、愈傷組織的形成是離體動物細(xì)胞分化的結(jié)果愈傷組織的形成是離體動物細(xì)胞分化的結(jié)果 D 、愈傷組織的形成是離體植物細(xì)胞脫分化的結(jié)果愈傷組織的形成是離體植物細(xì)胞脫分化的結(jié)果D2 、植物組織培養(yǎng)形成的愈傷組織進行培養(yǎng)，植物組織培養(yǎng)形成的愈傷組織進行培養(yǎng)， 又又可以分化形成根、芽等器官，這一過程稱為可以分化形成根、芽等器官，這一過程稱為( ) A、脫分化、脫分化 B、去分化、去分化 C、再分化、再分化 D、脫分化或去分化、脫分化或去分化C1.微型繁殖 微型繁殖技術(shù):快速繁殖優(yōu)良品種的植物組織培養(yǎng)技術(shù)。 二植物細(xì)胞工程的實際應(yīng)用二植物細(xì)胞工程的實際應(yīng)用特點:保持優(yōu)

7、良品種的遺傳特性； 高效快速地實現(xiàn)種苗的大量繁殖。 (1)材料:無病毒的莖尖。 (2)脫毒苗:切取莖尖進行組織培養(yǎng)獲得。2.作物脫毒3.神奇的人工種子 (1)技術(shù):植物組織培養(yǎng)。(2)結(jié)構(gòu):人工薄膜胚狀體或不定芽或頂芽或腋芽。(3)特點:保持親本優(yōu)良性狀；不受氣候,季節(jié)和地域限制。1.單倍體育種 (1)方法:花藥離體培養(yǎng)。 (2)優(yōu)點: 后代穩(wěn)定遺傳,都是純合體; 明顯縮短育種年限。2.突變體的利用 (1)產(chǎn)生:植物組織培養(yǎng)； (2)利用:篩選對人們有利突變體,進而培育新品種。1.種類:蛋白質(zhì),脂肪,糖類,藥物,香料,生物堿等。2.技術(shù):植物的組織培養(yǎng)。植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交 1你認(rèn)為兩

8、個來自不同植物的體細(xì)胞完成融你認(rèn)為兩個來自不同植物的體細(xì)胞完成融合，遇到的第一個障礙是什么？合，遇到的第一個障礙是什么？ 2怎么樣去解決這個障礙呢？怎么樣去解決這個障礙呢？ 3兩個原生質(zhì)體能發(fā)生融合，這與細(xì)胞膜的兩個原生質(zhì)體能發(fā)生融合，這與細(xì)胞膜的什么特性有關(guān)？什么特性有關(guān)？(2)(3)(4)(5)(1)(1)去壁去壁雜雜種種植植株株融合的融合的原生質(zhì)原生質(zhì)體體ABAB再再生生出出細(xì)細(xì)胞胞壁壁脫脫分分化化愈愈傷傷組組織織再再分分化化植物體細(xì)胞雜交的過程植物體細(xì)胞雜交的過程植物細(xì)胞的融合植物細(xì)胞的融合植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞植物細(xì)胞A A原生質(zhì)體原生質(zhì)體B B原生質(zhì)體原生質(zhì)體A A雜種雜

9、種細(xì)胞細(xì)胞ABAB去去 壁壁去去 壁壁人人工工誘誘導(dǎo)導(dǎo)方法？方法？促進融合促進融合的方法？的方法？融合融合完成完成的的標(biāo)志標(biāo)志植物細(xì)胞植物細(xì)胞B B實例實例 番茄番茄- -馬鈴薯馬鈴薯 在克服在克服遠源雜交不親和遠源雜交不親和的障礙、培育作物的障礙、培育作物新品種方面所取得的重大突破。新品種方面所取得的重大突破。 意義：意義：未解決的問題：未解決的問題：未能未能讓雜種植物按照人們的讓雜種植物按照人們的需要表現(xiàn)出親代的優(yōu)良性狀。需要表現(xiàn)出親代的優(yōu)良性狀。原理：原理：植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞的全能性和和細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性2.利用多倍體育種能獲得這種白菜利用多倍體育種能獲得這種白菜-甘藍嗎

10、？怎樣獲得？甘藍嗎？怎樣獲得？2N=142N=141.植物體細(xì)胞雜交得到的白菜甘藍是幾倍體、幾個染色體組、多少染色體，是否植物體細(xì)胞雜交得到的白菜甘藍是幾倍體、幾個染色體組、多少染色體，是否可育？可育？是四倍體、四個染色體組、是四倍體、四個染色體組、28條染色體、可育條染色體、可育能，先讓兩者進行有性雜交，對雜交所得種子在萌發(fā)成幼能，先讓兩者進行有性雜交，對雜交所得種子在萌發(fā)成幼苗時，用秋水仙素處理，使其染色體加倍，恢復(fù)育性。苗時，用秋水仙素處理，使其染色體加倍，恢復(fù)育性。思考：思考：1 1下列屬于組織培養(yǎng)的是下列屬于組織培養(yǎng)的是 ( )( )A A花粉培育成單倍體植株花粉培育成單倍體植株 B

11、 B芽發(fā)育成枝條芽發(fā)育成枝條C C根尖分生區(qū)發(fā)育成成熟區(qū)根尖分生區(qū)發(fā)育成成熟區(qū) D D未受精的卵細(xì)胞發(fā)育成個體未受精的卵細(xì)胞發(fā)育成個體 A A2.2.植物體細(xì)胞雜交的過程實質(zhì)是（植物體細(xì)胞雜交的過程實質(zhì)是（ ）A A、細(xì)胞質(zhì)融合的過程、細(xì)胞質(zhì)融合的過程 B B、細(xì)胞核融合的過程、細(xì)胞核融合的過程C C、細(xì)胞膜融合的過程、細(xì)胞膜融合的過程 D D、細(xì)胞原生質(zhì)體融合的過程、細(xì)胞原生質(zhì)體融合的過程D D3.3.在植物細(xì)胞工程中，當(dāng)原生質(zhì)體融合成一個細(xì)胞后在植物細(xì)胞工程中，當(dāng)原生質(zhì)體融合成一個細(xì)胞后，需需要誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞壁，參與這一過程的細(xì)胞器（要誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞壁，參與這一過程的細(xì)胞器（ ）A A、葉綠體

12、、高爾基體、葉綠體、高爾基體 B B、線粒體、高爾基體、線粒體、高爾基體C C、葉綠體、線粒體、葉綠體、線粒體 D D、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)B B4.4.用雜合種子盡快獲得純合子植株的方法是（用雜合種子盡快獲得純合子植株的方法是（ ）A A、種植、種植F1F1選出不分離者選出不分離者純合子純合子 B B、種植、種植秋水仙素處理秋水仙素處理純合子純合子C C、種植、種植生長素處理生長素處理純合子純合子D D、種植、種植花藥離體培養(yǎng)花藥離體培養(yǎng)單倍體幼苗單倍體幼苗秋水仙素處理秋水仙素處理純合子純合子D D5.5.下面關(guān)于植物細(xì)胞工程的敘述，正確的是下面關(guān)于植物細(xì)胞工程的敘述，正確的是(

13、(多選多選) ) ( )( )A A葉肉細(xì)胞脫分化后可形成具有分裂能力的薄壁細(xì)胞葉肉細(xì)胞脫分化后可形成具有分裂能力的薄壁細(xì)胞B B葉肉細(xì)胞經(jīng)再分化過程可形成愈傷組織葉肉細(xì)胞經(jīng)再分化過程可形成愈傷組織C C融合植物葉肉細(xì)胞時，應(yīng)先去掉細(xì)胞膜融合植物葉肉細(xì)胞時，應(yīng)先去掉細(xì)胞膜D D葉肉細(xì)胞離體培養(yǎng)時，可以表現(xiàn)出全能性葉肉細(xì)胞離體培養(yǎng)時，可以表現(xiàn)出全能性ADAD 6.6.下圖為植物體細(xì)胞雜交過程示意圖，據(jù)圖回答：下圖為植物體細(xì)胞雜交過程示意圖，據(jù)圖回答： 步驟是去掉步驟是去掉 ，使植物細(xì)胞成為，使植物細(xì)胞成為 ，最，最常用的方法是常用的方法是 。步驟一般常用的化學(xué)試劑是步驟一般常用的化學(xué)試劑是 ，目

14、的是目的是 。在利用雜種細(xì)胞培育成為雜種植株的過程中，運用的在利用雜種細(xì)胞培育成為雜種植株的過程中，運用的技術(shù)手段是技術(shù)手段是 ，其中步驟相當(dāng)于，其中步驟相當(dāng)于 ，步驟相當(dāng)于步驟相當(dāng)于 。細(xì)胞壁細(xì)胞壁 原生質(zhì)體原生質(zhì)體 酶解法酶解法 聚乙二醇聚乙二醇 誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合 組織培養(yǎng)組織培養(yǎng) 脫分化脫分化 再分化再分化 植物體細(xì)胞雜交的目的是獲得新的雜種植株，使兩株植物體細(xì)胞雜交的目的是獲得新的雜種植株，使兩株植物的性狀能夠在新的植物體上有所表現(xiàn)，其根本原因植物的性狀能夠在新的植物體上有所表現(xiàn)，其根本原因是是 。從理論上講，雜種植株的育性為從理論上講，雜種植株的育性為 。若運用傳。若

15、運用傳統(tǒng)有性雜交方法能否實現(xiàn)？統(tǒng)有性雜交方法能否實現(xiàn)？ 因此，這因此，這項研究對于培養(yǎng)作物新品種方面的重大意義在于項研究對于培養(yǎng)作物新品種方面的重大意義在于 。利用植物體細(xì)胞雜交的方法培育作物新品種的過程中，利用植物體細(xì)胞雜交的方法培育作物新品種的過程中，遺傳物質(zhì)的傳遞是否遵循孟德爾的遺傳規(guī)律？為什么？遺傳物質(zhì)的傳遞是否遵循孟德爾的遺傳規(guī)律？為什么？雜種細(xì)胞具有兩個親本的遺傳物質(zhì)雜種細(xì)胞具有兩個親本的遺傳物質(zhì) 可育可育 不能不能 克服遠緣雜交不親和的障礙克服遠緣雜交不親和的障礙 不遵循，植物體細(xì)胞雜交屬于無性生殖。不遵循，植物體細(xì)胞雜交屬于無性生殖。7.7.基因型為基因型為AaBbAaBb的水

16、稻（的水稻（2424條染色體）的花藥通過無菌條染色體）的花藥通過無菌操操作，接入試管后，在一定條件下培養(yǎng)形成試管苗。作，接入試管后，在一定條件下培養(yǎng)形成試管苗。愈傷組織是花粉細(xì)胞不斷分裂后形成的不規(guī)則的細(xì)胞團愈傷組織是花粉細(xì)胞不斷分裂后形成的不規(guī)則的細(xì)胞團愈傷組織形成中，必須從培養(yǎng)基中獲得愈傷組織形成中，必須從培養(yǎng)基中獲得 和小和小分分子有機物等營養(yǎng)物質(zhì)。子有機物等營養(yǎng)物質(zhì)。要促進花粉細(xì)胞分裂生長，培養(yǎng)基中應(yīng)有要促進花粉細(xì)胞分裂生長，培養(yǎng)基中應(yīng)有 和和 兩類激素。兩類激素。組織培養(yǎng)技術(shù)不能直接用于（組織培養(yǎng)技術(shù)不能直接用于（ ）A A、快速繁殖、快速繁殖 B B、培育無病毒植株、培育無病毒植株

17、C C、植物產(chǎn)品的工廠化生產(chǎn)、植物產(chǎn)品的工廠化生產(chǎn) D D、培養(yǎng)抗病菌植株、培養(yǎng)抗病菌植株用組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖植物體時，不可能發(fā)生的是用組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖植物體時，不可能發(fā)生的是（ ）A A、基因重組、基因重組 B B、基因突變、基因突變 C C、染色體變異、染色體變異 D D、染色體分離、染色體分離水、無機鹽水、無機鹽 細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素 生長素生長素 D A A 試管苗的細(xì)胞核中含有試管苗的細(xì)胞核中含有 個個DNADNA分子。分子。培養(yǎng)成的試管苗可能出現(xiàn)的基因型有培養(yǎng)成的試管苗可能出現(xiàn)的基因型有 。如果要獲得育種需要的植株，并能繁殖新品種，后面的如果要獲得育種需要的植株，并能繁殖新品種，后面

18、的育種步驟是育種步驟是 。1212 AB Ab aB abAB Ab aB ab 用一定濃度的秋水仙素處理組織用一定濃度的秋水仙素處理組織培養(yǎng)獲得的幼苗培養(yǎng)獲得的幼苗 8.8.下面所列過程是植物組織培養(yǎng)的簡略過程。請據(jù)此回下面所列過程是植物組織培養(yǎng)的簡略過程。請據(jù)此回答：答：脫分化脫分化再分化再分化表示表示 ，它能被培養(yǎng)成的根本原因，它能被培養(yǎng)成的根本原因是是 。表示表示 ，它的細(xì)胞特點，它的細(xì)胞特點是是 ，它，它的顏色特點是的顏色特點是 。若想制造人工種子，應(yīng)選擇（寫編號）若想制造人工種子，應(yīng)選擇（寫編號） 。外植體外植體植物細(xì)胞全能性植物細(xì)胞全能性 愈傷組織愈傷組織 細(xì)胞排列疏松，高度液泡

19、化無定形狀態(tài)細(xì)胞排列疏松，高度液泡化無定形狀態(tài) 色淺色淺 若是花藥，則是若是花藥，則是 ，這項技術(shù)可用，這項技術(shù)可用在在 上。上。 單倍體植株單倍體植株 單倍體育種單倍體育種 9.9.下圖為植物細(xì)胞融合及組織培養(yǎng)過程示意圖。下列說法下圖為植物細(xì)胞融合及組織培養(yǎng)過程示意圖。下列說法不正確的是不正確的是（ ）A A植物體細(xì)胞雜交的最大優(yōu)點是可以克服遠緣雜交不親植物體細(xì)胞雜交的最大優(yōu)點是可以克服遠緣雜交不親和的障礙和的障礙B B雜種細(xì)胞經(jīng)過和過程可以培育成雜種植株，說明雜種細(xì)胞經(jīng)過和過程可以培育成雜種植株，說明雜種細(xì)胞具有全能性雜種細(xì)胞具有全能性C C盡盡管愈傷組織可以進行光合作用，但其培養(yǎng)基中仍需

20、管愈傷組織可以進行光合作用，但其培養(yǎng)基中仍需要糖類、氨基酸等有機營養(yǎng)要糖類、氨基酸等有機營養(yǎng)D D若若A A的基因型為的基因型為RrRr，B B的基因型為的基因型為YyYy，則最終形成的雜，則最終形成的雜種植株的基因型為種植株的基因型為RrYyRrYyC C 二二 、動物細(xì)胞工程、動物細(xì)胞工程(第二課時第二課時)讀下面一段文字資料，思考以下問題：讀下面一段文字資料，思考以下問題：長期以來，為了獲得抗體，采用的是把某種抗原反復(fù)注射長期以來，為了獲得抗體，采用的是把某種抗原反復(fù)注射到動物體內(nèi)，然后從動物血清中分離出所需抗體的方法。到動物體內(nèi)，然后從動物血清中分離出所需抗體的方法。用這種方法獲得的抗

21、體，不僅產(chǎn)量低，而且抗體的特異性用這種方法獲得的抗體，不僅產(chǎn)量低，而且抗體的特異性差，純度低，反應(yīng)不夠靈敏。人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫差，純度低，反應(yīng)不夠靈敏。人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的細(xì)胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個特異性抗體，但是每個B B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個B B細(xì)胞進行無性繁殖，即克隆細(xì)胞進行無性繁殖，即克隆。 1、請從以上文字資料中找出單克隆抗體的概念、請從以上文字

22、資料中找出單克隆抗體的概念2、怎樣才能獲得單克隆抗體？、怎樣才能獲得單克隆抗體？提示提示1 1：僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？：僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？提示提示2 2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？提示提示3 3：有什么方法能使：有什么方法能使B B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力和細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力和腫瘤細(xì)胞無限增殖能力同時具備呢？腫瘤細(xì)胞無限增殖能力同時具備呢？用單個用單個B B細(xì)胞進行克隆，得到的細(xì)胞群能夠分泌一種化學(xué)性細(xì)胞進行克隆，得到的細(xì)胞群能夠分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。質(zhì)單一、特異性強的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。五

23、、動物細(xì)胞培養(yǎng) 從動物機體中取出相關(guān)的從動物機體中取出相關(guān)的 ，將它分散，將它分散成成 ，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞這些細(xì)胞 。 1概念：動物胚胎或動物胚胎或幼齡動物的組織、器官幼齡動物的組織、器官如：腎、肺等如：腎、肺等細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強原理：細(xì)胞增殖使細(xì)胞和培養(yǎng)液充分接觸使細(xì)胞和培養(yǎng)液充分接觸組織組織單個細(xì)胞單個細(xì)胞生長和增殖生長和增殖2、過程：取什么樣的組織？如何將組織分散成單個細(xì)胞？如何制備細(xì)胞懸液？什么叫原代培養(yǎng)？什么叫傳代細(xì)胞培養(yǎng)？如何進行傳代培養(yǎng)？什么是細(xì)胞貼壁現(xiàn)象？什么是細(xì)胞接觸抑制取幼齡組織或器官如：腎

24、臟 肌肉用胰蛋白酶處理加入細(xì)胞培養(yǎng)液u細(xì)胞貼壁：培養(yǎng)過程中，細(xì)胞貼附在瓶壁上的現(xiàn)象。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒細(xì)胞接觸抑制細(xì)胞接觸抑制 細(xì)胞在貼壁生長過程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個單層，此時細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長停止，數(shù)量不再增加。原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)：從機：從機體取出后立即培體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。養(yǎng)的細(xì)胞。 10代以內(nèi)代以內(nèi)用胰蛋白酶分散成單個細(xì)胞傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)：分瓶后的培養(yǎng)，從10代培養(yǎng)到4050代細(xì)胞2、過程、過程取取 的組織、器官的組織、器官細(xì)胞懸浮液細(xì)胞懸浮液 酶酶 貼滿瓶壁的細(xì)胞貼滿瓶壁的細(xì)胞單個細(xì)胞單個細(xì)胞加入加入 液液動物胚胎或幼齡動動物胚

25、胎或幼齡動物物胰蛋白胰蛋白 培養(yǎng)培養(yǎng)接觸抑制接觸抑制原代原代 培養(yǎng)培養(yǎng)1-10代細(xì)胞代細(xì)胞4050代細(xì)胞代細(xì)胞(細(xì)胞株細(xì)胞株)傳代傳代培養(yǎng)培養(yǎng)無限傳代（無限傳代（細(xì)胞系細(xì)胞系）用 處理胰蛋白酶遺傳物質(zhì)不變遺傳物質(zhì)改變，能無限增殖（癌變）3 3、條件：、條件：1、無菌、無毒的環(huán)境、無菌、無毒的環(huán)境 2、營養(yǎng)、營養(yǎng)3、溫度和、溫度和PH 4、氣體環(huán)境：、氣體環(huán)境：（添加一定量的（添加一定量的抗生素抗生素，定期更換培養(yǎng)液），定期更換培養(yǎng)液）補充合成培養(yǎng)基補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)中缺乏的物質(zhì)36.5 +0.5度 ；PH為7.2-7.4。 O2作用：進行作用：進行 呼吸，提供能量呼吸，提供能量 CO2

26、作用：維持培養(yǎng)液的作用：維持培養(yǎng)液的PH值值（95%空氣和空氣和5% CO2 ）（葡萄糖葡萄糖、氨基酸、無機鹽、微量元素、氨基酸、無機鹽、微量元素、動物血清動物血清、血漿等。、血漿等。）有氧有氧（1 1）生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品：病毒疫苗、干）生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品：病毒疫苗、干 擾素、單克隆抗體等。擾素、單克隆抗體等。（2 2）獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮。）獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮。（3 3）用于檢測有毒物質(zhì)）用于檢測有毒物質(zhì)（4 4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)4、應(yīng)用 實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?

27、 :制備單克隆抗體制備單克隆抗體. . 實驗原理：實驗原理：B B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生抗體，骨髓瘤淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生抗體，骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖，雜交瘤細(xì)胞既能產(chǎn)生抗細(xì)胞能無限增殖，雜交瘤細(xì)胞既能產(chǎn)生抗體又能無限增殖。體又能無限增殖。 實驗材料：小白鼠實驗材料：小白鼠 實驗器材：培養(yǎng)皿、針筒等等。實驗器材：培養(yǎng)皿、針筒等等。 實驗過程：如下頁實驗過程：如下頁 單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程 注射抗原注射抗原B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群特定抗體的細(xì)胞

28、群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體（1 1）為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與）為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B B淋巴細(xì)胞融合淋巴細(xì)胞融合? ?（小鼠骨髓瘤細(xì)胞可以在體外培養(yǎng)條件下大量增殖，（小鼠骨髓瘤細(xì)胞可以在體外培養(yǎng)條件下大量增殖，B B淋巴細(xì)胞能夠產(chǎn)生抗體，淋巴細(xì)胞能夠產(chǎn)生抗體，細(xì)胞的同源性越近，融合形成的雜種細(xì)胞越易成活。細(xì)胞的同源性越近，融合形成的雜種細(xì)胞越易成活。（2 2）骨髓瘤細(xì)胞是癌細(xì)胞嗎）骨髓瘤細(xì)胞是癌細(xì)胞嗎? ? 有無限增殖能力的細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞，有無限增殖能力的細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞， 具有轉(zhuǎn)移能力的腫瘤細(xì)胞，稱為癌細(xì)胞，具有轉(zhuǎn)移能力的腫瘤細(xì)胞，稱為癌細(xì)胞，

29、所以說，瘤細(xì)胞不能等于癌細(xì)胞。所以說，瘤細(xì)胞不能等于癌細(xì)胞。（3 3）整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選）整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選? ?（第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種），（第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種），第二次需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個雜交瘤第二次需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個雜交瘤細(xì)胞的情況下開始培養(yǎng)，然后再篩選出細(xì)胞的情況下開始培養(yǎng)，然后再篩選出能產(chǎn)生特異性能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群?？贵w的細(xì)胞群。 由于該細(xì)胞群是單個雜交瘤細(xì)胞克隆得來的，所由于該細(xì)胞群是單個雜交瘤細(xì)胞克隆得來的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強的單以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強的單克隆抗體。這里的克隆抗體。這里的單克隆單克隆確有確有單個細(xì)胞單個細(xì)胞克隆的含義，克隆的含義，只不過克隆的不是只不過克隆的不是B B淋巴細(xì)胞，而是淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞。）。） 胚胎移植技術(shù)胚胎移植技術(shù)試管動物（嬰兒）培養(yǎng)過程試管動物（嬰兒）培養(yǎng)過程卵細(xì)胞卵細(xì)胞精子精子體外受精體外受精受精卵受精卵胚胎胚胎新個體新個體母體子宮內(nèi)母體子宮內(nèi)孕育、產(chǎn)出孕育、產(chǎn)出核移植技術(shù)核移植技術(shù)克隆羊培育過程克隆羊培