Waters高效液相色譜系統(tǒng)操作規(guī)程入門

1、規(guī)范 Waters 高效液相色譜系統(tǒng)的使用和維護(hù)。2.范圍本規(guī)程適用于 Waters 高效液相色譜系統(tǒng)的使用和維護(hù)。3.職責(zé)質(zhì)檢室儀器分析員負(fù)責(zé) Waters 高效液相色譜系統(tǒng)的日常使用和維護(hù)。4.系統(tǒng)組成本系統(tǒng)由 Waters 600E 多溶劑輸送系統(tǒng)（有梯度控制器的高壓輸液泵） 、 Waters 在線脫氣機(jī)、 Rheodyne 7725i 手動進(jìn) 樣閥、 Waters 2487 雙通道紫外檢測器、 Millennium32 色譜工作站 /電腦等組成，另外還包括打印機(jī)、斷電保護(hù)器和通風(fēng)柜等輔助設(shè)備。5. 程序0.45 gm濾膜過濾）、樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液5.1. 準(zhǔn)備5.1.1. 使用前應(yīng)根據(jù)待檢

2、樣品的檢驗(yàn)方法準(zhǔn)備所需的流動相（應(yīng)足夠；流動相必須用也可在平衡系統(tǒng)時配制），更換合適的色譜柱（柱進(jìn)出口位置應(yīng)與流動相流向一致）和定量環(huán)。5.1.2. 通電前應(yīng)檢查儀器設(shè)備之間的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。5.2. 開機(jī)和泵操作5.2.1. 開機(jī)5.2.1.1. 接通斷電保護(hù)器的電源，依次打開斷電保護(hù)器、脫氣機(jī)、600E 泵、 2487 檢測器，待檢測器自檢結(jié)束顯示測量狀態(tài)時，打開打印機(jī)、電腦顯示器、主機(jī)。5.2.1.2. 打開 Millennium32 軟件，按 Login. ，輸入用戶名和密碼，按 OK 注冊進(jìn)入系統(tǒng)主界面。在 Project 檔內(nèi)選擇所需的項目，右擊 Run Sa

3、mples 圖標(biāo)，選擇色譜系統(tǒng) “600_2487” 后打開 QuickSet 窗口。5.2.2.更換溶劑5.2.2.1.打開 600E 泵后，轉(zhuǎn)動進(jìn)口集合管閥手柄（以下簡稱手柄）至 RUN 位置；5.2.2.2.將一塑料燒杯放在參照閥出口管下以收集分流的溶劑，向右打開參照閥（斷開柱和進(jìn)樣器）；5.2.2.3.按 Direct 鍵使其顯示直接控制屏幕，設(shè)流速為 1ml/min （梯度配比閥在 0ml/min 時不工作）；5.2.2.4.選擇欲使用的某一溶劑通道，設(shè)其比例為 100% ，其它為 0% ；5.2.2.5.將輸液管從原有溶劑瓶中取出，放入一干凈的空瓶中；5.2.2.6.逆時鐘轉(zhuǎn)動手柄

4、至 DRAW 位置，用啟動注射器從進(jìn)口集合管閥的接口抽出約 2ml 溶劑；5.2.2.7.再將輸液管放入新溶劑瓶內(nèi)，繼續(xù)抽吸直到新溶劑出來并無氣泡為止；5.2.2.8.轉(zhuǎn)動手柄至 RUN 位置，將啟動注射器取下并排掉筒內(nèi)的溶劑。5.2.2.9.重復(fù) 5.2.2.4.5.2.2.8.直至所有即將使用的溶劑更換完畢。5.2.3.排氣泡5.2.3.1.打開參照閥，換流動相為100% 超純水，設(shè)流速為 10ml/min （注意：確認(rèn)參照閥是打開的，否則可能損壞安裝好的柱）；5.2.3.2.轉(zhuǎn)動進(jìn)口集合管閥手柄至DRAW 位置，用啟動注射器抽出約 10ml 水；5.2.3.3.順時鐘轉(zhuǎn)動手柄至 INJ

5、位置，緩慢用力使水通過泵頭從參照閥出口管排出（注意不要將氣泡注入泵中）；5.2.3.4.按 Stop flow 屏幕鍵停泵，關(guān)上參照閥。5.2.3.5.如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下泵出口管，用塑料管連接至塑料燒杯中，設(shè)流速為10ml/min ，沖洗25min或更長時間）后停泵，重新接上柱。5.3. 平衡系統(tǒng)（分兩種情況進(jìn)行）5.3.1.等度模式5.3.1.1.每次以 0.1ml/min 的增量加大流速至 1ml/min ，以超純水沖洗系統(tǒng) 10min 。5.3.1.2.檢查管路連接、柱接口及泵頭處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。5.3.1.3.觀察泵控制屏幕上的壓力值， 壓力波動應(yīng)在平

6、均值的 510% 以內(nèi)。如超出此范圍， 可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，重復(fù) 5.2.3. 下的步驟。5.3.1.4. 壓力波動平穩(wěn)后，換檢驗(yàn)方法規(guī)定的流動相比例沖洗系統(tǒng)。在檢查基線穩(wěn)定性前，讓最少56 倍柱體積的流動相通過系統(tǒng)。5.3.1.5. 在 QuickSet 窗口下的 Instrument Method 檔內(nèi)選擇所需的儀器方法，按 Monitor （此后泵由軟件控制），觀察基線和壓力變化。如果沖洗至基線漂移 <10-3Au/min ，噪聲為 10-4Au 數(shù)量級，且壓力平穩(wěn)時，可認(rèn)為系統(tǒng)已達(dá)到平衡狀態(tài)，可以進(jìn)樣。 5.3.1.6. 按 Abort 圖標(biāo)（左上第五個），停止

7、監(jiān)視基線。5.3.2. 梯度模式5.3.2.1. 按檢驗(yàn)方法規(guī)定的條件沖洗平衡系統(tǒng)，并注意壓力波動變化和排氣泡。5.3.2.2. 在進(jìn)樣前運(yùn)行 12 次空白梯度。5.4. 進(jìn)樣5.4.1. 在 QuickSet 窗口內(nèi)左下部選 Single 標(biāo)簽，在 Sample Name 檔內(nèi)填寫試樣名稱；在 Function 檔內(nèi)選擇試樣類型標(biāo)準(zhǔn)選 “Inject Standards ”；樣品選 “Inject Samples ”）；在 Method Set 檔內(nèi)選擇所需的方法組；在 Injection Volume檔內(nèi)輸入進(jìn)樣體積；在 Run Time 檔內(nèi)輸入記錄時間。5.4.2.用針頭濾器過濾試樣溶

8、液（注射液可不必過濾），用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。5.4.2.1.如按部分裝液法，用微量注射器定容進(jìn)樣時，進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50% ，并要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同；5.4.2.2.如按完全裝液法，用定量環(huán)定容進(jìn)樣時，進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的3 倍（ 510 倍準(zhǔn)確性更佳）。5.4.3.按 Single 標(biāo)簽內(nèi)右邊的進(jìn)樣 （Inject） 按鈕，等待窗口底部狀態(tài)檔內(nèi)顯示 “ Waiting 后”，方可進(jìn)樣。5.4.4.將進(jìn)樣閥手柄轉(zhuǎn)動至 Load 位置，將注射器針完全插入進(jìn)樣閥入口中，平穩(wěn)地注入試樣溶液，除另有規(guī)定外，讓注射器留在進(jìn)樣閥上，將進(jìn)樣閥手柄快速轉(zhuǎn)動至 In

9、ject 位置，系統(tǒng)將自動運(yùn)行，采集數(shù)據(jù)并記錄圖譜。5.4.5. 讓進(jìn)樣閥手柄保持在 Inject 位置，到下次進(jìn)樣前 12min 切換回 Load 位置，將注射器從進(jìn)樣閥中拔出。5.4.6. 先用水再用試樣溶液清洗注射器后，按以上程序繼續(xù)進(jìn)樣，直至完成。5.5. 數(shù)據(jù)處理（外標(biāo)法）和打印5.5.1. 右擊系統(tǒng)主界面下的 Browse Project 圖標(biāo)，選擇相應(yīng)的項目，按 OK 進(jìn)入 Project 窗口，選 Channels 標(biāo)簽。5.5.2. 建立處理方法 選擇一個待積分的標(biāo)準(zhǔn)，右擊后選 “Review"進(jìn)入 Review 窗口。按Processing Method Wiza

10、rd 圖標(biāo)（左邊第一個）進(jìn)入 New Processing Method向?qū)Т翱?，?OK 。5.5.2.1.劃入一個感興趣的最窄的峰，按 Next> ；5.5.2.2.劃入一段包含噪聲的基線，按 Next>；5.5.2.3.劃入一段要積分的區(qū)間，按 Next> 5.5.2.4.根據(jù)情況選擇最小峰面積和最小峰高，按Next> 、 Next>；5.5.2.5.在 Name 檔內(nèi)輸入各組分峰的名稱，按Next> 、 Next>；5.5.2.6.在 Method Name 檔內(nèi)填寫方法名稱，按 Fini

11、sh 。退出 Review窗口。5.5.3.修改標(biāo)準(zhǔn) 選中所有標(biāo)準(zhǔn)，右擊后選 “ Alter Sample 進(jìn)”入 Alter Sample窗口。5.5.3.1.5.5.3.2.在 Sample Type 檔內(nèi)將 Unknown 改成 Standard ； 按 Amount 圖標(biāo)（左上第六個）進(jìn)入 Component Editor 窗口；5.5.3.3. 按 Copy from Process Method 圖標(biāo)（左上第五個） ，選擇剛建立的處理方法， 按 0pen ，在 Value 和 Units檔內(nèi)分別輸入標(biāo)準(zhǔn)所含各組分的數(shù)值和單位，完成后按0K回到Alter Sam pie 窗口;5.5

12、.3.4. 按 Save 圖標(biāo)存盤，退出 Alter Sample 窗口。5.5.4. 積分 先選中所有標(biāo)準(zhǔn)， 再選中所有未知樣品， 右擊后選 “ Process 進(jìn)”入 Background Processing & Reporting窗口，選 Use specified processing methods，在右邊檔內(nèi)選擇剛建立的處理方法，按OK。5.5.5. 打印 在 Project 窗口下選 Results 標(biāo)簽。5.5.5.1. 選中要打印的標(biāo)準(zhǔn) /樣品，右擊后選 “ Preview 進(jìn)”入 Open Report Method窗口，選合適的打印方法，按 OK 進(jìn)入

13、Report Publisher （Preview） 窗口，預(yù)覽打印的結(jié)果。按打印 （Print） 圖標(biāo)（左上第二個）即可打印結(jié)果。5.5.52 按Close可進(jìn)入Report Publisher窗口對報告方法進(jìn)行修改，完成后按 Print圖標(biāo)（右數(shù)第二個）即可打印結(jié)果。5.5.6. 數(shù)據(jù)處理完成后，關(guān)閉所有窗口，在主界面下按 Logout 退出系統(tǒng)，關(guān)閉 Millennium32 軟件，再依次關(guān)閉電腦主機(jī)、顯示器、打印機(jī)。5.6. 清洗系統(tǒng)和關(guān)機(jī)5.6.1.數(shù)據(jù)采集完畢后，關(guān)閉檢測器，繼續(xù)以工作流動相沖洗 10min 后，換水沖洗。5.6.2.清洗進(jìn)樣閥5.6.2.1.用啟動注射器吸 10ml 超純水；5.6.2.2.將注射針導(dǎo)入口沖洗頭（ Rheodyne部件號 7125-054 ）連接到注射器出口上（不要針），并將它們一起接到進(jìn)樣口上； 5.6.2.3. 使進(jìn)樣閥保持在 Inject 位置，慢慢將水推入，水將通過注射針導(dǎo)入口、引導(dǎo)管、注射針導(dǎo)入管和注射針密封圈，由樣品溢出管排出。5.6.3. 清洗柱5.