抗原抗體反應(yīng)及其應(yīng)用ppt課件

1、抗原抗體反響及運用抗原抗體反響及運用 傅慧傅慧 2021 2021年年2 2月月2一、抗原抗體反響的根本原理一、抗原抗體反響的根本原理二、抗原抗體反響的類型二、抗原抗體反響的類型三、免疫標(biāo)志技術(shù)的運用三、免疫標(biāo)志技術(shù)的運用內(nèi)容內(nèi)容3一、抗原抗體反響的根本原理一、抗原抗體反響的根本原理4 抗原與相應(yīng)抗體的特異性結(jié)合反響稱為抗原抗體反響。 抗原抗體反響抗原抗體反響AgAb 好像鑰匙和鎖的關(guān)系好像鑰匙和鎖的關(guān)系5這種反響既可在機體內(nèi)進展，也可以在機體外進展。這種反響既可在機體內(nèi)進展，也可以在機體外進展。體內(nèi)體液免疫反響1.中和作用: 中和毒素等2.溶菌、殺菌、促進吞噬3.免疫損傷: 抗體與組織或細胞

2、反響 沉淀Precipitation凝集Agglutination細胞溶解cell lysis補體結(jié)合Complement fixation體外抗體存在于血清中,常用血清作實驗,因此又名血清學(xué)反響66 6 抗原抗體反響的原理1、抗原抗體結(jié)合力4種2、抗原抗體親和力和親合力3、親水膠體轉(zhuǎn)化疏水膠體抗原抗體反響的原理抗原抗體反響的原理 電荷引力靜電引力 范德華引力 氫鍵結(jié)合力 疏水作用力71 1、抗原抗體結(jié)合力、抗原抗體結(jié)合力 - -靜電引力靜電引力electrostatic forceselectrostatic forces 靜電引力或庫侖引力Cou-lombic forces是因抗原、抗體帶

3、有相反電荷的氨基NH3+與羧基基團COO-間相互吸引的才干，之間的引力，間隔越近引力越大。81 1、抗原抗體結(jié)合力、抗原抗體結(jié)合力 - -范德華引力范德華引力Van der Waals forcesVan der Waals forces分子間或原子間)相互接近，分子極化產(chǎn)生引力，其作用取決于分子空間構(gòu)型，如：凹槽與凸起互補，抗原與抗體，酶與底物。能量小于靜電引力。91 1、抗原抗體結(jié)合力、抗原抗體結(jié)合力 - -氫鍵結(jié)合力氫鍵結(jié)合力hydrogen bond hydrogen bond 是供氫體上的氫原子與受氫體上氫原子間的引力。其結(jié)合力較強于范德華引力 ，能量大于范德華引力。101 1、抗原

4、抗體結(jié)合力、抗原抗體結(jié)合力 - -疏水作用力疏水作用力hydrophobic interactionshydrophobic interactions 水溶液中兩個疏水基團相互接觸，由于對水分子的排斥而趨向聚集的力。作用力最強，占總結(jié)合力的50。11靜電引力：異性相吸electrostatic forces，離子鍵Ionic bond范德華引力: 作用最小van der Waals interactions氫鍵: 最具特異性hydrogen bond 疏水作用力: 作用最大 hydrophobic interactions 疏水作用力疏水作用力 氫鍵結(jié)合力氫鍵結(jié)合力 靜電引力靜電引力 范德華引

5、力范德華引力1 1、抗原抗體結(jié)合力、抗原抗體結(jié)合力122 2、抗原抗體親和力和親合力、抗原抗體親和力和親合力 是指抗體分子上一個抗原結(jié)合點與對應(yīng)的抗原決議簇之間相順應(yīng)而存在著的引力，是抗原抗體間固有的結(jié)合力。親和力親和力affinity)affinity)13親和力是指反響系統(tǒng)中復(fù)雜抗原與相應(yīng)抗體之間的結(jié)合才干。與抗體結(jié)合價、抗體的親和性、抗原有效表位數(shù)目等相關(guān)。親合力親合力(avidity)(avidity)2 2、抗原抗體親和力和親合力、抗原抗體親和力和親合力3 3、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體 抗體和大多數(shù)抗原同屬蛋白質(zhì)。在通常的血清學(xué)反響條件下均帶有負電荷，使極化的水

6、分子在其周圍構(gòu)成水化層，成為親水膠體，因此蛋白質(zhì)不會自行凝集出現(xiàn)沉淀。當(dāng)抗原與抗體結(jié)合后，外表電荷減少，水化層變薄;而且由于抗原抗體復(fù)合物構(gòu)成后，與水接觸的外表積減少，由親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體。此時在電解質(zhì)(如NaCl，的作用下，使各疏水膠體之間進一步靠攏、沉淀，構(gòu)成可見的抗原抗體復(fù)合物。 14 可見反響可見反響 ( (沉淀沉淀) )抗原抗體復(fù)合物抗原抗體復(fù)合物 ( (疏水膠體疏水膠體) )電解質(zhì)電解質(zhì) 抗原抗原( (親水膠體親水膠體) ) 抗體抗體( (親水膠體親水膠體) ) + +;15二、抗原抗體反響的類型二、抗原抗體反響的類型16 抗原抗體反響的類型抗原抗體反響的類型反應(yīng)類型抗原抗體補

7、體沉淀反應(yīng)可溶無標(biāo)記無凝集反應(yīng)顆粒無標(biāo)記無補體參與反應(yīng) 細胞無標(biāo)記有中和反應(yīng)毒素等無標(biāo)記無免疫標(biāo)記標(biāo)記標(biāo)記無或17反應(yīng)類型反應(yīng)類型實驗技術(shù)實驗技術(shù)結(jié)果判斷結(jié)果判斷 沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗觀察沉淀，檢測濁度免疫電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧凝集反應(yīng)直接凝集試驗觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗觀察凝集現(xiàn)象抗球蛋白試驗觀察凝集現(xiàn)象 補體參與 反應(yīng)補體溶血試驗觀察測定溶血現(xiàn)象補體結(jié)合試驗觀察測定溶血現(xiàn)象 抗原抗體反響的類型抗原抗體反響的類型18反應(yīng)類型反應(yīng)類型實驗技術(shù)實驗技術(shù)結(jié)果判斷結(jié)果判斷中和反應(yīng)病毒中和試驗檢測病毒感染性毒素中和試驗檢測外毒素毒性免疫標(biāo)記熒光免疫技術(shù)檢測熒光現(xiàn)象放射免疫技術(shù)檢測放射性強度酶免

8、疫技術(shù)檢測酶底物顯色發(fā)光免疫技術(shù)檢測發(fā)光強度金免疫技術(shù)檢測金顆粒沉淀 抗原抗體反響的類型抗原抗體反響的類型19三、免疫標(biāo)志技術(shù)的運用三、免疫標(biāo)志技術(shù)的運用20免疫標(biāo)志技術(shù)的運用免疫標(biāo)志技術(shù)的運用免疫標(biāo)志技術(shù)是用熒光素、放射性同位素、酶等標(biāo)志抗體或抗原等所進展的抗原抗體反響。 特點：敏感度高 特異性強 快速 容易察看 能進展定性、定量、定位檢測等211 1、熒光免疫技術(shù)、熒光免疫技術(shù) 將結(jié)合有熒光素的熒光抗體進展抗原抗體反響的技術(shù)。 常用的熒光素有異硫氰酸熒光素FITC)和羅丹明RB200)等。它們可與抗體球蛋白中賴氨酸的氨基結(jié)合，在藍紫光激發(fā)下，可分別出現(xiàn)鮮明的黃綠色及玫瑰紅色。固相吸附抗原或

9、抗體Ab光或Ag光Ab Ag光 或 AgAb光光激發(fā)發(fā)光22本身抗體檢本身抗體檢測測抗核抗體 (均質(zhì)型)抗核抗體 (核膜型)抗核抗體 (斑點型)歐蒙熒光免疫技術(shù)的運用熒光免疫技術(shù)的運用23熒光免疫技術(shù)的運用熒光免疫技術(shù)的運用病原體檢病原體檢測測呼吸道合胞病毒流感病毒A/B型副流感病毒免疫病理檢測免疫病理檢測細胞外表抗原和受體檢測細胞外表抗原和受體檢測特殊運用：流式細胞分特殊運用：流式細胞分析析242 2、放射免疫技術(shù)及其運用、放射免疫技術(shù)及其運用用放射性同位素標(biāo)志技術(shù)來檢測抗原抗體反響的高靈敏度方法。反響特點：靈敏，準確；不穩(wěn)定 ；平安性差標(biāo)志Ag或Ab標(biāo)志物純化抗原抗體反響抗原抗體復(fù)合物沉淀

10、測定其放射活性 現(xiàn)臨床實驗室現(xiàn)臨床實驗室運用較少運用較少廣泛運用于生物醫(yī)學(xué)研討和臨床診斷領(lǐng)域中各種微量蛋白質(zhì)、激素、廣泛運用于生物醫(yī)學(xué)研討和臨床診斷領(lǐng)域中各種微量蛋白質(zhì)、激素、小分子藥物和腫瘤標(biāo)志物的定量分析等小分子藥物和腫瘤標(biāo)志物的定量分析等253 3、酶免疫技術(shù)、酶免疫技術(shù)將待測抗原或抗體吸附于固相外表聚苯乙烯微量反響板，與酶標(biāo)志的抗體或抗原反響后，參與底物反響顯色或發(fā)光的分析方法。酶標(biāo)板吸附抗原或抗體洗滌參與酶標(biāo)抗體或抗原Ag-Ab酶或Ab-Ag酶參與酶作用底物顯色反響26方法1直接法可檢測抗原或抗體：酶標(biāo)板吸附抗原或抗體洗滌 AgAb酶或AbAg酶顯色反響Ab酶或Ag酶底物272間接法有兩種抗體參與，一抗做反響橋梁1Ab2Ab酶酶標(biāo)板吸附抗原Ag1Ab洗滌Ag1Ab2Ab酶底物顯色反響一抗二抗28酶標(biāo)板吸附抗體AgAb - Ag洗滌Ab酶Ab - Ag - Ab酶底物顯色反響3夾心法不同抗體將抗原夾在中間反響 直接夾心法 間接夾心法酶標(biāo)板吸附抗體AgAb Ag1AbAb Ag 1Ab洗滌2Ab酶Ab Ag1Ab 2Ab酶底物顯色反響29酶聯(lián)免疫吸附實驗夾心法30ELISA 運用的范圍很廣，而且正在不斷地擴展。臨床實