分光光度法測定6種忍冬藤中綠原酸的含量

1、分光光度法測定6種忍冬藤中綠原酸的含量         【摘要】  目的以綠原酸的含量為指標(biāo)，測定評價(jià)川渝所產(chǎn)忍冬藤的質(zhì)量。方法采用分光光度法測定。結(jié)果測定了川渝6種忍冬藤中綠原酸的含量。結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。其結(jié)果可對川渝產(chǎn)忍冬藤的合理用藥、質(zhì)量控制及進(jìn)一步開發(fā)提供參考。 【關(guān)鍵詞】  忍冬藤； 綠原酸； 分光光度法Determination of Chlorogenic Acid in 6 Caulis Lonicerae by SpectrophotometryAbstract：

2、ObjectiveTo determine the content of chlorogenic acid in Caulis Lonicerae in Sichuan province and Chongqing city for evaluating the quality of them. MethodsThe spectrophotometry analysis was used. ResultsThe content of chlorogenic acid in 6 Caulis Lonicerae has been determined. ConclusionThe method

3、is accurate, simple and has a good reproducibility. The result can be used as a reference for reasonable medication，quality control as well as further study for them.Key words：Caulis Lonicerae;  Chlorogenic acid;   Spectrophotometry    忍冬藤Caulis Lonicerae為常用中藥，具有清熱解毒,疏風(fēng)通絡(luò)的功效

4、。2005年版中國藥典規(guī)定忍冬藤為忍冬科Caprifoliaceae植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥莖枝1。但在實(shí)際使用中，多種金銀花原植物的藤莖（即莖枝）在不同的區(qū)域以中藥忍冬藤入藥。中華本草記載忍冬藤的來源有忍冬科植物忍冬L. japonica Thunb.、山銀花L. confusa DC.、紅腺忍冬L. hypoglauca Miq.、黃褐毛忍冬L. fulvotomentosa Hsu et S. G.heng等的莖枝2。據(jù)作者調(diào)研，川渝忍冬藤品種也很復(fù)雜。本實(shí)驗(yàn)對川渝主要的6種金銀花原植物的藤莖用分光光度法進(jìn)行了有效成分綠原酸的含量測定，以期對川渝產(chǎn)忍

5、冬藤的質(zhì)量控制和開發(fā)提供參考。1  儀器、試劑和樣品   Lambda35分光光度計(jì)（Perkin Elmer），TCQ-250超聲波清洗器（北京醫(yī)療設(shè)備二廠），Sartrorius BP211D 1/10萬電子分析天平，ZK-82B型電熱真空干燥箱。綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，80減壓干燥至恒重），蒸餾水，分析純甲醇。   實(shí)驗(yàn)材料為成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院萬德光教授通過原植物分類學(xué)鑒定的6種干燥忍冬藤莖。2  方法與結(jié)果2.1  對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品5.87 mg，置于100 ml容量瓶中，甲醇

6、定容，搖勻，配制成58.70 g/ml的綠原酸溶液。2.2  測定波長的選擇將對照品溶液和供試品溶液在200400 nm進(jìn)行掃描，其均在327 nm波長處有最大吸收，故檢測波長選擇為327 nm。2.3  標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及線性范圍精密吸取綠原酸對照品溶液1，4，8，12，15，20 ml，分別置于50 ml容量瓶中，甲醇定容，搖勻，配制成1.174，4.696，9.392，14.088，17.610，23.480 g/ml的綠原酸溶液，以甲醇作空白對照，在327 nm波長處測吸收度。以吸收度（A）對進(jìn)樣濃度（M）進(jìn)行回歸，得綠原酸線性回歸方程為A=0.039 76M-0.0

7、02 7，r=0.999 9 ，線性范圍為1.17423.480 g/ml。         2.4  供試品溶液的制備精密稱取藥材細(xì)粉約0.5 g，加甲醇定容于25 ml容量瓶中，超聲30 min,放置至室溫，滴加甲醇至25 ml，搖勻，精密吸取1 ml上清液用甲醇定溶于25 ml容量瓶中，稀釋倍數(shù)為1 250，作為藥材供試品溶液。2.5  精密度實(shí)驗(yàn)將1號樣品制成的供試品溶液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作重復(fù)測定6次，RSD為0.31%（n=6），說明精密度良好。2.6  重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 精密稱

8、取6份同一樣品（1號），各約0.5 g，按供試品溶液制備項(xiàng)下進(jìn)行制備，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作測定，RSD為1.08%（n=6），說明重現(xiàn)性好。2.7  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)對1號供試品溶液在0，1，2，3，4，5 h按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作各測定1次，RSD=0.74%（n=6），說明樣品溶液在5 h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.8  回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法。精密稱定6份1號樣品各約0.25 g，分別精密加入綠原酸對照品0.25，0.50，1.00 mg（3水平共6份），按供試品溶液制備項(xiàng)下進(jìn)行制備，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作。結(jié)果見表1。表1  回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）2.9  樣品測定按供試品

9、溶液制備項(xiàng)下進(jìn)行制備，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作測定，從回歸方程求得綠原酸的質(zhì)量，再計(jì)算出忍冬藤中綠原酸的含量。結(jié)果見表2。3  小結(jié)與討論3.1  供試品溶液和對照品綠原酸溶液的紫外掃描圖譜在250 nm400 nm范圍內(nèi)一致，證明本實(shí)驗(yàn)所用測定方法確實(shí)可行。為了保證測試結(jié)果的可比性，材料來源全為植株從上往下數(shù)第515節(jié)之間的藤莖，未采集木栓層已脫落的老藤。所測結(jié)果綠原酸含量在0.43%2.22%之間，相差5倍，主要集中在0.66%1.22%之間。表2  忍冬藤中綠原酸含量（略）3.2  2005年版中國藥典首次規(guī)定了用HPLC法測定忍冬藤中綠原酸的含量，并且要求其含量不少于0.1%。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果遠(yuǎn)高于中國藥典中的限量要求,這是由于金銀花中有綠原酸的幾種異構(gòu)體3，其原植物忍冬藤中也應(yīng)該含綠原酸的幾種異構(gòu)體，分光光度法可測定其總含量4，所以本實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果實(shí)為綠原酸類的總含量?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 國家藥典委員會(huì).中國藥典，部 S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：133.2 國家中醫(yī)藥管理局，中華本草編委會(huì).