雄黃的研究進展(1)

1、雄黃的研究進展(1)        【摘要】 綜述了雄黃的化學成分、炮制工藝、藥代動力學、藥理作用、臨床應用及毒副反應，并對雄黃的制劑工藝進行了展望。 【關鍵詞】 雄黃; 化學成分； 炮制工藝； 藥理作用； 臨床應用    雄黃是中醫(yī)內治外用常用藥之一，最早收載于神農本草經，距今已有幾千年歷史。雄黃又名石黃,其性辛溫、味苦,有毒。2005年版中國藥典收載含雄黃的中成藥共26種，約占藥典成方總數(shù)的4.6%1。傳統(tǒng)醫(yī)學認為雄黃具有解毒、殺蟲、燥濕、祛痰、截瘧等功能。自20世紀50

2、年代以來，國內醫(yī)者將含雄黃的復方制劑或單方用于治療血液系統(tǒng)疾病、惡性淋巴系統(tǒng)疾病甚至實體瘤，取得了明顯的治療效果，引起人們廣泛的關注。本文就雄黃的化學成分、炮制工藝、藥理作用機制、臨床應用及毒副作用進行綜述。1 化學成分    雄黃的主要化學成分是As4S4 或As2S2，另外還含有少量三氧化二砷(As2O3)及五氧化二砷(As2O5)。長期以來，關于雄黃的主要成分的討論一直沒有中斷，2000版中國藥典規(guī)定雄黃的主要成分為As2S2，其含量不得少于90%。梁國剛等2認為雄黃的主要成分是As4S4，只有在550800時才分解成As2S2。陳憲平等3利用電鏡

3、&-能譜儀對雄黃進行分析，掃描電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，雄黃為柱狀晶體或不規(guī)則晶體；能譜儀測定發(fā)現(xiàn)，雄黃中的主要元素為砷和硫，其中砷與硫的重量百分比為1.27:1。2 炮制工藝    由于雄黃在臨床上的特殊功效及其毒性反應，自古就很重視它的炮制處理，僅古籍記載就有十余種4。其中，使用歷史較久的是漢代的干研法和宋代的水飛法5。1990年及1995年版藥典的炮制方法為將雄黃粗品研成細粉或水飛,可以保留某些可溶性成分。而2000年版藥典規(guī)定應將可溶性成分全部除去,只剩下不溶于水的As2S2，并且規(guī)定了雄黃不得顯示游離砷反應。但大量的研究表明，As2O3在治療

4、白血病等血液系統(tǒng)疾病時可有效抑制腫瘤細胞的增殖，提示雄黃的毒性成分可能是它的有效成分之一；另外，陸道培等6 也研究發(fā)現(xiàn)As4S4同樣對腫瘤細胞有抑制作用，但難溶性As4S4藥理活性的發(fā)揮需要一個更長的過程，在解決難溶性雄黃的生物利用度問題上，王曉波等7采用球磨法制備納米級雄黃粉體，發(fā)現(xiàn)納米雄黃與傳統(tǒng)雄黃比較，生物利用度等方面具有明顯優(yōu)勢。寧凝等8采用溶劑接力法制備雄黃納米混懸液有誘導HL-60和K562細胞凋亡和壞死的雙重作用。詹秀琴等9應用微射流法制備超細微雄黃顆粒與水飛法、氣流粉碎制備的雄黃顆粒從粉體表征、藥代動力學參數(shù)、體內外抑瘤作用等方面進行了比較，得出微射流法制備的超細微雄黃顆粒優(yōu)于

5、其它兩種方法。3 藥化動力學    雄黃為砷類礦物中藥，砷作為微量元素存在于正常人體內。砷在生物體內的存在形式主要包括四類：無機砷、有機砷小分子、砷的有機化合物、含砷的生物大分子1012。程增江等13對Wistar大鼠持續(xù)5周灌胃不同劑量的雄黃，結果顯示，大鼠灌服雄黃后攝入的砷幾乎在所有組織器官中都有分布。其中，砷在血液中的蓄積量最高。汪金華等14研究正常大鼠和腦缺血大鼠在灌胃服用安宮牛黃丸的實驗結果中顯示，砷在正常和腦缺血大鼠的體內分布未見明顯差異，從而推斷As2S2在體內未被吸收，實驗中檢出的砷可能來自雄黃中少量的可溶性砷。汪寶琪等15測定了六神丸和

6、牛黃清心丸中砷在家兔體內的藥動學參數(shù),發(fā)現(xiàn)復方中的砷在體內吸收速度快，消除速度極慢，同時還發(fā)現(xiàn)砷的分布在心、肺中的含量高于肝、腎含量。湯毅珊等16將安宮牛黃丸及復方中的單味藥與雄黃混合用人工胃液處理，測得的可溶性砷含量均比單味雄黃在人工胃液中的溶出量低。鐵步榮等17對健康志愿者服用牛黃解毒片后尿砷濃度檢測表明雄黃經腎臟由尿液排出體外的量很少可能大部分由糞便排出。房圣民等18報道家兔經陰道連續(xù)7 d給藥僅在肝和脾臟中檢測到少量的砷。Cui X等19研究發(fā)現(xiàn)砷在膽汁和尿中的排泄形式受給藥途徑、劑量和化學形態(tài)的影響，其中GSH起重要作用。由于藥物進入機體后，其變化是一個復雜的過程，難溶性雄黃在含有大

7、量酶的體液環(huán)境中可以溶解，在酶催化下進行氧化還原、生物甲基化等生物合成，產生亞砷酸、砷酸、甲基胂酸、二甲基胂酸等物質。由此可見，體外可溶的As2O3和難溶的As4S4進入體內后，都可以進行生物轉化，發(fā)揮其藥理作用。4 藥理作用4.1 抗腫瘤作用4.1.1 雄黃誘導腫瘤細胞凋亡鐘璐等 20，21，郝紅纓等22 應用雄黃作用于NB4細胞，使PML融合蛋白降解, 快速調變PML-RAR融合蛋白的亞細胞定位。劉延方等23將As2S2處理NB4細胞，發(fā)現(xiàn)細胞內Caspase-3酶活性增加,突變型p53蛋白表達下降。caspase的活化級聯(lián)形式是砷劑誘導凋亡的重要通路。陳思宇等24研究雄黃作用于K562細

8、胞后， Bax蛋白表達量增加,其凋亡機制可能與Bax上調有關。經雄黃作用后的耐藥K562ADM細胞,細胞攝取DNR的量增加,從而增加了DNR的細胞毒性作用,并且使Bcl-2和P-gP顯著下調25。另外，As2S2能增加K562及K562ADM細胞膜HSP70蛋白表達,且與時間及濃度成正相關,從而影響細胞凋亡26。高曉東等27用雄黃作用HL-60/ADR細胞，發(fā)現(xiàn)雄黃可抑制HL-60/ADR細胞生長,逆轉其耐藥性,促進細胞凋亡,且與劑量呈依賴性,其機理可能與P- gP表達下降有關。顧春紅等28應用基因表達譜芯片研究，推測細胞骨架和信號轉導的改變可能參與As2S2促進U937細胞凋亡的過程。張晨等

9、29將雄黃處理Raji細胞后，發(fā)現(xiàn)細胞形態(tài)發(fā)生染色質凝集、核固縮和核碎裂,FCM檢測此細胞處于G2/M期阻滯。李靜等30用不同濃度雄黃作用于K562細胞發(fā)現(xiàn)雄黃可顯著抑制細胞端粒酶活性和細胞增殖,并呈劑量相關，端粒酶活性下降是雄黃誘導K562細胞凋亡的機制之一。4.1.2 促進腫瘤細胞成熟、分化陳思宇等31研究發(fā)現(xiàn)，雄黃對NB4細胞有不完全的分化誘導作用。表現(xiàn)為部分細胞出現(xiàn)核凹陷、核漿比例減少,酷似中、晚幼粒細胞,但細胞不向末端分化。4.1.3 抑制腫瘤細胞核酸的合成、抑制血管內皮細胞的生長及直接殺瘤作用周靄祥等32用青黃散治療白血病時發(fā)現(xiàn)青黃散對L615，S180細胞的DNA，RNA合成有不

10、同程度的抑制作用，且藥物與細胞作用存在量效關系。Deng Y等33研究相同劑量的四種不同尺寸(100500 nm)的雄黃對臍血管內皮細胞(ECV-304)有誘導細胞凋亡的作用。徐輝碧等34從荷瘤種鼠抽取S180腹水瘤細胞,使用不同粒徑不同劑量的雄黃混懸液進行體外培養(yǎng)研究,發(fā)現(xiàn)雄黃對S180腫瘤細胞具有毒殺作用。 4.1.4 增加細胞膜HSP70及MT蛋白表達湯毅珊等35將雄黃和安宮牛黃散分別灌胃于SD大鼠試驗中,發(fā)現(xiàn)用藥后8 h大鼠腦組織內的HSP70mRNA表達顯著高于正常對照組,并能抑制外傷性腦水腫模型大鼠血清中炎性細胞因子TNF-的釋放。張晨等26采用流式細胞儀測定經硫化砷處理的K562

11、細胞和耐藥細胞K562ADM細胞膜HSP70蛋白表達及細胞凋亡, 發(fā)現(xiàn)硫化砷能增加細胞膜HSP70蛋白表達，而其細胞凋亡率與膜HSP70的表達成一定的相關性,這種改變可能對細胞凋亡率產生一定影響。Romach EH.等36研究表明,砷使鼠肝內膜細胞內的MT基因表達增高,使細胞對砷的耐受性比對照組細胞增加2.5倍。Shimizu m.等37證實MT的表達在拮抗砷毒性及激活原癌基因中起重要作用。Susanto I等38研究表明砷誘導細胞MT量的增加不受細胞內水平的影響且MT的抗砷毒性比GSH更重要。4.2 抗菌、抗病毒作用雄黃具有廣泛的抗菌譜，如對金黃色葡萄球菌、鏈球菌、白色鏈珠菌、痢疾桿菌、結核

12、桿菌等有較強的抗菌作用?？涤赖?9對雄黃體外抑菌效果進行了研究，發(fā)現(xiàn)雄黃對金黃色葡萄球菌有非常明顯的抑制作用。同時進行了雄黃對白細胞及網狀內皮系統(tǒng)的吞噬功能影響的研究，表明雄黃能增強內皮系統(tǒng)（RES）的吞噬能力，且不影響白細胞總數(shù)及分類，提高機體非特異性免疫功能。另外，雄黃及含雄黃復方治療帶狀皰疹等病毒性皮膚感染與其具有解疫毒，燥濕祛風等作用有關。一過性細胞凋亡可能是控制細胞中病毒復制的普遍機制40。5 毒副反應    雄黃是一種含砷的化合物，在以往的研究中，關于砷及其化合物的作用和危害已有了一定的認識。國內早已出現(xiàn)了有關其毒性的文獻報道4143。砷是一

13、種細胞原漿毒，進入機體后作用于酶系統(tǒng),可抑制含巰基酶的活性,阻止細胞的氧化和呼吸,嚴重干擾細胞代謝、染色體結構、核分裂等。受影響的重要酶系統(tǒng)有丙酮酸氧化酶、丙酮酸脫氫酶、磷酸酯酶、細胞色素氧化酶、脫氧核糖核酸聚合酶、白介素1轉化酶（ICE）等。砷可致中樞神經系統(tǒng)缺氧和功能紊亂,引起惡心、嘔吐、腹脹、腹瀉；砷對腎臟也有損害作用，李國明等44用雄黃給小鼠灌胃5周，發(fā)現(xiàn)低劑量組對腎臟損害不明顯，而高劑量組對腎臟損害較為嚴重，腎小球充血較明顯，細胞數(shù)增多，腎小囊腔明顯狹窄，囊壁增厚，并有少量新月體形成。另外，砷可引發(fā)貧血及砷角化病等45，長期大量使用雄黃可致突變，致癌，致畸46。6 臨床應用 

14、;   臨床實踐表明，含雄黃復方常外用治療病毒性皮膚感染、銀屑病、小兒腮腺炎、乳癰、尖銳濕疣，療效顯著。含雄黃的復方制劑或單方用于治療血液系統(tǒng)疾病、惡性淋巴系統(tǒng)疾病也取得了一定療效。另外，近期的一項研究表明，雄黃有望用于治療膠質瘤47。7 展望    通過上述綜述，使我們了解到雄黃不僅可以通過各種不同途徑抑制腫瘤細胞生長，促進腫瘤細胞凋亡，同時還可以增強機體的非特異性免疫功能，提高機體抗菌和抗病毒能力。另外，雄黃對機體的毒性作用除與使用劑量有關外，還與給藥途徑、用藥時間、存在狀態(tài)及與其他物質的拮抗或協(xié)同作用等有關。盡管人們對

15、于雄黃的藥用機理認識仍不十分清楚,但近年來雄黃及其復方應用于惡性血液病治療中已取得了肯定的臨床療效，相應的基礎研究也展示了其廣闊的應用前景。雄黃進入體內如何降低其毒性，發(fā)揮其最佳生物學效應是我們目前亟待解決的關鍵。隨著高科技的引入，我們相信只要充分利用現(xiàn)代制劑手段如納米科技，并按國際標準的要求全面提高中藥的質量和水平，使其成為質量穩(wěn)定可控、療效可靠、制劑精良的現(xiàn)代中藥，雄黃必將在今后的臨床應用過程中發(fā)揮更大的作用。【參考文獻】1國家藥典委員會.中國藥典,部S.北京:化學工業(yè)出版社,2005:307.2梁國剛,張啟偉.朱砂、雄黃中各成分的溶解度對其藥效、毒副作用的影響J.中國中藥雜志，2002,

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