肝癌的微血管密度與血管內(nèi)皮生長因子表達

1、肝癌的微血管密度與血管內(nèi)皮生長因子表達【摘要】目的研究肝癌組織連續(xù)切片中微血管密度(MVD)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)兩者之間的關(guān)系。方法肝癌組織標本50例，采用抗人因子相關(guān)抗原、抗人VEGF進行免疫組織化學(xué)染色顯示組織中微血管及VEGF陽性表達細胞。結(jié)果50例肝癌組織中，VEGF表達陽性者28例，陽性率為56%。肝癌及癌旁正常肝組織MVD測定結(jié)果顯示，VEGF陽性表達組明顯高于陰性表達組，其差異有顯著性(P0.05)。結(jié)論肝癌組織中MVD明顯高于癌旁正常組織，并與VEGF表達呈明顯正相關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】癌，肝細胞；微血管密度；血管內(nèi)皮生長因子；免疫組織化學(xué) Microvessel densi

2、ty and vascular endothelial growth factor expression in liver cancerZHANG Qin*, SHEN Hongwei, WU Yulian, et al.*Department of Surgery, The First Peoples Hospital of Yuhang, Yuhang 311100, China【Abstract】 Objective To study the relationship between the microvessel density MVD and VEGF expression in t

3、he serial sections of liver cancer. Methods Microvessels and positive cells of VEGF expression were assessed by immunohistochemical staining with monoclonal antibodies against F-VIII Rag and against human VEGF. Results Positive VEGF expression was found in 56 %(28/50) of the patients with liver canc

4、er. MVD in the liver cancer and the normal tissue arround liver cancer was significantly higher in positive VEGF expression tumor than in negative VEGF expression (P0.05). Conclusions MVD in the liver cancer was significantly higher than in the normal liver tissue, and positively correlated with the

5、 VEGF expression.【Key words】 Carcinoma, hepatocellalar; Microvessel density; Vascular endothelial growth factor; Immunohistochemistry 我們采用血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和F-因子染色的免疫組織化學(xué)技術(shù)，觀察肝癌組織連續(xù)切片中VEGF陽性表達和微血管密度(MVD)，探討VEGF在微血管生成反應(yīng)中的作用和價值。 材料與方法1.一般資料：取自1996年1月1998年12月肝癌手術(shù)切除標本50例；患者年齡2470歲(平均49.82歲)；其中男45例，女5例；肝細胞性肝

6、癌47例，其中12例伴門靜脈癌栓，1例有膈肌浸潤，膽管細胞癌2例，混合細胞癌1例；腫塊直徑5 cm 14例、510 cm 28例、10 cm 8例；單個病灶32例、多個病灶18例。肝癌組織標本以福馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4 m厚連續(xù)切片。2.主要試劑：小鼠抗人第因子抗原、抗人血管內(nèi)皮生長因子，卵白素-生物素(HIGH-SABC)-過氧化酶檢測系統(tǒng)，3，3-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒等，購自武漢博士德生物工程有限公司。3.實驗方法：采用卵白素-生物素(SABC)-過氧化酶免疫組織化學(xué)染色法，步驟操作按藥盒說明書。4.結(jié)果判定：微血管呈棕黃色，計數(shù)方法為每張切片選擇5個血管最高的區(qū)域，在40

7、0倍下進行計數(shù)，求其平均數(shù)；微血管判定標準1：凡染成棕黃色的數(shù)個內(nèi)皮細胞或內(nèi)皮細胞簇均為1個血管計數(shù)，管腔大于8個紅細胞大小，有較厚肌層的血管不計數(shù)。VEGF染色為細胞漿呈棕黃色。VEGF結(jié)果判定標準：每個高倍視野計數(shù)100個細胞，胞漿呈棕黃色的陽性細胞小于5%為陰性，大于5%為陽性。5.統(tǒng)計學(xué)處理：統(tǒng)計軟件為SPSS/PC。計數(shù)資料采用2檢驗、計量資料采用樣本均數(shù)t檢驗。結(jié)果50例肝癌組織中，VEGF表達陽性者28例，陽性率為56%(28/50)。肝癌及癌旁正常肝組織MVD測定結(jié)果見表1，顯示VEGF陽性表達組明顯高于陰性表達組，其差異均有顯著性(P0.05)；MVD測定結(jié)果表明，肝癌組織明

8、顯高于癌旁正常組織，其差異有極顯著性(P0.001)。組別肝癌組織癌旁肝組織VEGF陽性組19.955.53*1.940.46VEGF陰性組9.613.741.620.38 注：與VEGF陰性組比較，*P0.01，P0.05 討論惡性腫瘤的生長、侵襲及轉(zhuǎn)移過程受到多種因素影響，其中腫瘤誘導(dǎo)的血管生成反應(yīng)與其生物學(xué)行為關(guān)系密切。從血管生成的角度，可以將惡性腫瘤的發(fā)展分為血管生成前期和血管生成期兩個階段。實體腫瘤生長至1 mm3以上時即需要瘤內(nèi)血管生成，否則腫瘤靜止于休眠狀態(tài)，不發(fā)生轉(zhuǎn)移，而一旦進入血管生成期，其轉(zhuǎn)移潛能能迅即出現(xiàn)2。實體腫瘤的生長具有明顯的血管生成依賴性，腫瘤細胞增殖、浸潤過程中

9、不斷釋放血管生成因子誘發(fā)血管生成，新生血管結(jié)構(gòu)薄弱、形態(tài)變異，為惡性腫瘤的侵入提供了條件3。有關(guān)肝癌組織血管密度及其相關(guān)因素的研究國外已有報道4。較多的研究結(jié)果認為肝癌組織中的微血管密度與病人的預(yù)后有關(guān)，MVD低則預(yù)后較好，術(shù)后生存率高，反之則預(yù)后差、術(shù)后生存率低；此外，還有作者發(fā)現(xiàn)肝癌組織中的微血管密度與腫瘤的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)相關(guān)。目前已發(fā)現(xiàn)了多種促血管生長因子，其中血管內(nèi)皮生長因子對內(nèi)皮細胞的生長促進作用效果最強、特異性最高。VEGF在缺氧或低血糖狀況時表達升高，可特異地結(jié)合于酪氨酸激酶家族的KDR和Flt-1上，這兩種受體在腫瘤內(nèi)皮細胞均表達升高。利用抗血管內(nèi)皮某些特異成分(細胞粘附分子CD3

10、1、CD34或因子相關(guān)抗原)的單克隆抗體進行免疫組織化學(xué)染色可顯示組織中的血管成分。因子相關(guān)抗原由相關(guān)內(nèi)皮、巨核細胞以及血小板生成。組織培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞也可分泌第因子前體。應(yīng)用針對血管內(nèi)皮細胞的抗因子相關(guān)抗原免疫法染色，可特異性地使微血管內(nèi)皮染色。腫瘤內(nèi)毛細血管盡管不存在腫瘤的去分化，但對抗因子相關(guān)抗原卻呈強染色5。我們在本研究中用VEGF和F-因子染色的免疫組織化學(xué)技術(shù)，觀察肝癌組織連續(xù)切片中VEGF陽性表達和MVD，以探討VEGF在微血管生成中的作用，結(jié)果表明：VEGF表達陽性組其肝癌組織及癌旁正常肝組織的MVD均高于VEGF表達陰性組；肝癌組織內(nèi)微血管明顯高于周邊正常肝組織，鏡下觀察發(fā)現(xiàn)癌

11、巢中微血管密度也不均衡，表現(xiàn)出明顯的異質(zhì)性，以癌巢的周邊部位尤其是腫瘤向周圍浸潤的部位為最密集。許多腫瘤細胞可分泌VEGF，后者可誘導(dǎo)腫瘤血管形成，從而支持腫瘤生長。Kimitoshi等6應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法，對75例食管癌進行了MVD和VEGF表達的研究，發(fā)現(xiàn)46.7%(35/75)的食管癌VEGF表達陽性，并與食管癌微血管密度呈高度正相關(guān)。我們對50例肝癌的MVD及VEGF表達的研究結(jié)果表明56%(28/50)的肝癌VEGF表達陽性，并與肝癌微血管密度呈高度正相關(guān)，提示VEGF能刺激肝癌微血管生長，從而促進腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，顯示其預(yù)后不佳。目前認為，VEGF與腫瘤血管內(nèi)皮細胞的相應(yīng)受體結(jié)合

12、，刺激腫瘤血管內(nèi)皮細胞的增生，增加腫瘤血管通透性，并為腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移提供適合的基礎(chǔ)。對肝癌兩種組織化學(xué)染色切片的觀察顯示，肝癌組織其微血管密集區(qū)大多位于腫瘤周邊及腫瘤向周圍浸潤的區(qū)域，這些部位也正是VEGF陽性表達細胞所密集的區(qū)域?；痦椖浚赫憬⌒l(wèi)生廳科研基金資助項目(98019)作者單位：張慶（311100浙江省余杭市第一人民醫(yī)院外科）沈宏偉（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院外科）吳育連（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院外科）彭承宏（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院外科）江獻川（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院外科）彭淑牖（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院外科）參考文獻1，Bosari S, Delellis RA,

13、 Healtey GJ. Microvessel quantitation and prognosis in invasive breast carcinoma. Hum Path, 1992,23:755-756.2，F(xiàn)olkman J. What is the evidence that tumors are angiogenesis-dependent J Natl Cancer Inst, 1991,82:4-5.3，Liotta L, Kleinerman J, Saidek GM. Quantitative relatiionships of intravascular tunor cells, tumor vessels, and pulmonary metastasis following tumor implantation. Cancer Res, 1974,34:997-998.4，Yamamoto A, Dhar DK, El-Assal ON, et al. Thymidine phosphorylase, microvessel density and clinical outcome in