原發(fā)性血小板增多癥血小板更新率與血栓形成的關(guān)系

1、原發(fā)性血小板增多癥血小板更新率與血栓形成的關(guān)系    作者：高新譜，劉正敏，李健，韓雪瑩    【摘要】 為了對原發(fā)性血小板增多癥血小板更新率（turnover）變化與血栓形成的關(guān)系進(jìn)行分析，根據(jù)有無血栓癥狀將26例原發(fā)性血小板增多癥（ET）患者分成兩組，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測網(wǎng)織血小板（RP），選擇26名健康獻(xiàn)血者作為對照。應(yīng)用羥基脲加-干擾素對血栓病例進(jìn)行治療。結(jié)果表明：有血栓ET病例的RP百分?jǐn)?shù)（14.8%±7?2%）比無癥狀病例的（4.5%±2.3%）和健康對照的（3.3%±1.5

2、%）顯著增高（P0.05）；RP百分?jǐn)?shù)在無血栓病例和健康對照中無差異。有血栓病例的RP絕對值比無血栓病例顯著升高（176±37）×109/L vs （46±12）×109/L。有血栓ET病例接受羥基脲加-干擾素治療后，RP百分?jǐn)?shù)和絕對數(shù)均明顯降低（P0.05）。結(jié)論： ET病例形成血栓時，與無血栓病例和健康對照相比，其RP百分?jǐn)?shù)和絕對數(shù)均顯著升高，有血栓的ET患者用羥基脲加-干擾素治療療效良好。    【關(guān)鍵詞】 原發(fā)性血小板增多癥 Correlation of Thrombosis with Increased

3、Platelet Turnover in Essential Thrombocythemia Abstract This study was aimed to investigate the correlation of thrombosis with increased platelet turnover in essential thrombocythemia. According to presence or abscence of thrombosis，26 patients with ET were divided into two groups. Reticulated plate

4、lets (RP) were measured by flow cytometry and 26 healthy volunteers were selected as healthy controls. The ET patients with thrombosis were treated with hydroxyurea and interferon-. The results demonstrated that the ET patients with thrombotic events had a significantly higher RP percentage (14.8%&#

5、177;7.2%) than that in both asymptomatic ET patients (4.5%±2.3%) and normal control (3.3%±1.5%)，(P0.05)；the RP percentage in asymptomatic ET patients did not differ significantly from controls. ET patients with thrombosis also had a significantly higher absolute RP (ARP) count than those i

6、n ET patients without thrombosis （176±37）×109/L vs （46±12）×109/L. The ET patients with thrombosis were successfully treated with hydroxyurea plus INF-，the RP percentage and ARP counts obviously reduced. In conclusion，when the ET patients had thrombotic events，those patients had a

7、 significantly higher RP percentage and ARP compared with patients without thrombosis and healthy controls. The ET patients with thrombosis were successfully treated with hydroxyurea plus INF-. Key words essential thrombocythemia；thrombosis；platelet turnover；reticulated platelet   

8、60;原發(fā)性血小板增多癥（essential thrombocythemia，ET）屬于骨髓增殖性疾?。∕PD），血小板持續(xù)升高，有反復(fù)自發(fā)性出血和血栓并發(fā)癥，被認(rèn)為與異常的血小板功能和(或)升高的循環(huán)血小板數(shù)有關(guān)。然而，在外周血血小板計數(shù)（blood platelet count，BPC）升高情形下，針對血栓和出血并發(fā)癥的特殊危險因素相對地說人們并不明確。目前還沒有簡單可行的檢測血小板在體內(nèi)活性的方法。檢測網(wǎng)織血小板（reticulated platelets，RP）是一種快速而簡單的計算血小板更換率的途徑。血小板更換率為ET患者發(fā)生血栓時提供了有價值的臨床信息。為此，我們探討了RP百分值升

9、高是否與ET患者血栓形成相關(guān)。 材料和方法 研究對象 原發(fā)性血小板增多癥患者的診斷均符合診斷標(biāo)準(zhǔn)1，共26例，女17，男9（年齡20-81歲，平均52歲），試驗前均未接受過化療、生長因子或阿斯匹林等藥物治療。所采用的血栓形成確認(rèn)方式有：紅斑性肢痛病的基本癥狀、血管造影術(shù)、超聲波及核磁共振檢查等。選擇26例健康獻(xiàn)血者作健康對照。 血樣的準(zhǔn)備 所有樣本均在采取治療措施前采集。26例ET中9例血樣是在血栓發(fā)生時或其后24小時內(nèi)采集的；17例血樣是在血栓癥狀出現(xiàn)前采集的，其中7例在接下來的16天內(nèi)出現(xiàn)了血栓并發(fā)癥。對16例發(fā)生血栓的ET患者進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。采集3 ml靜脈血，用EDTA-Na2（1

10、.5 mg/ml）抗凝。用MEK-6318血細(xì)胞自動分析儀進(jìn)行血小板計數(shù)（BPC）。血小板樣本的制備：血樣離心得富含血小板血漿，用緩沖液洗滌后，1%多聚甲醛4固定2小時，然后再洗滌配成200×109/L懸液。 標(biāo)記及測定2 將50 l稀釋到100×109/L血小板懸液與450 l噻唑橙（TO）混勻，22避光孵育1小時；PBS作空白對照，流式細(xì)胞術(shù)測定熒光強(qiáng)度，吸收波488 nm，激發(fā)波530 nm，測得直方圖，按空白對照設(shè)定標(biāo)尺，陽性率設(shè)為1%，同一標(biāo)尺用于TO染色的病例標(biāo)本，結(jié)果即為RP百分?jǐn)?shù)。取50 l 200×109/L血小板懸液與10 l CD41-FIT

11、C單克隆抗體混勻，4避光孵育25分鐘，用FACScalibur流式細(xì)胞儀測定陽性細(xì)胞率。RP的絕對數(shù)（absolute reticulated platelets，ARP）是由RP百分?jǐn)?shù)×BPC得出的。 統(tǒng)計分析 所測數(shù)據(jù)以x±SD表示，用軟件SPSS 11.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)計算。    結(jié) 果 網(wǎng)織血小板對比檢測 檢測的結(jié)果詳見表1。形成血栓的病例有16例，占61?5%，平均年齡55±16歲；無血栓病例10例，占38.5%，平均年齡為51±23歲。有無血栓病例間的年齡和性別均無顯著性差異。有血栓癥狀ET病例的RP百分

12、數(shù)（14.8%±7.2%）比無癥狀病例者（4?5%±2.3%）和健康對照者（3.3%±1.5%）顯著增高（P0.05）；無血栓病例和健康對照中RP百分?jǐn)?shù)無差異。而且血栓病例的ARP比無血栓病例顯著升高（176±37)×109/L vs （46±12）×109/L。16例血栓病例RP百分?jǐn)?shù)均超過了6%（健康對照平均值 2SD）。經(jīng)治療后16例血栓病例中3例RP百分?jǐn)?shù)超過6%，隨后又有血栓癥狀出現(xiàn)，剩余13例RP百分?jǐn)?shù)均低于6%，血栓癥狀逐漸緩解；而無血栓癥狀10例都沒有超過6%。Table 1. Comparison of r

13、eticulated plalelets between diffe-rent groups (略) 治療效果 結(jié)果見表2。16例血栓ET在隨后的6-52周內(nèi)，均接受了溶栓及羥基脲加-干擾素治療3，4，取得了明顯的效果，RP百分?jǐn)?shù)從（14.8±7.2）%降到（4.0±1.9）%（P0.05），ARP從（176±37）×109/L降到（29±11）×109/L（P0.05），BPC從（1 202±127）×109/L降到（336±182）×109/L(P0.05），Rtc從（3.6±0.

14、6）%降到（1.3±0.2）%（P0?05）。經(jīng)過治療后，其中13例患者的RP百分?jǐn)?shù)范圍是2.1%-5.9%，低于6%的危險水平，他們的紅斑性肢痛癥逐漸得到緩解，并且在隨后的一段時期內(nèi)沒有形成血栓。另外，3例患者的RP百分?jǐn)?shù)是6?5%，16.8%，22.9%，均高于6%的危險水平，在隨后又有血栓形成，但他們的紅斑性肢痛癥較之前有所緩解。Table 2. Changes of BPC，RP，ARP and Rtc before and after treatment（略）    討 論 原發(fā)性血小板增多癥是發(fā)病率最低的MPD，起病緩慢，在臨床上不

15、易與真性紅細(xì)胞增多癥和慢性粒細(xì)胞白血病相鑒別，由于血小板計數(shù)過高且功能異常，易發(fā)生栓塞和出血以致危及生命。RP是骨髓釋放出的新生血小板，其胞漿中含有RNA，可以被TO熒光染色?；谶@一點(diǎn)，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)對ET患者的RP進(jìn)行檢測。所有有形成血栓的ET病例的RP百分?jǐn)?shù)和ARP比相應(yīng)無血栓病例顯著升高，揭示了RP百分?jǐn)?shù)和ARP的升高與ET血栓形成密切相關(guān)（P0.05）。并且，在RP百分?jǐn)?shù)6%時ET病例全部出現(xiàn)血栓并發(fā)癥；而在RP百分?jǐn)?shù)6時，即使ARP比健康對照顯著增加，但也沒有ET病例發(fā)生血栓癥狀。這進(jìn)一步揭示出RP百分?jǐn)?shù)的變化對ET發(fā)生血栓危險性會產(chǎn)生更直接的影響。  

16、0; 本研究還發(fā)現(xiàn)無癥狀ET病例RP百分?jǐn)?shù)在正常范圍內(nèi)，這與先前報道一致5。這些數(shù)據(jù)顯示BPC升高時血小板更新率是受網(wǎng)織血小板影響的，而在原發(fā)性血小板減少性紫癜（ITP）患者中RP百分?jǐn)?shù)升高同樣影響了血小板更新率的升高6。有學(xué)者認(rèn)為，血栓病例RP值升高使得血小板更新率升高是由于血小板進(jìn)入大動脈或較小但更廣泛的小動脈形成血凝塊（紅斑性肢痛癥）造成了丟失所致7。也可能是，RP升高引起血小板生理功能異常，從而導(dǎo)致血小板黏附到內(nèi)皮細(xì)胞、白細(xì)胞或其他血小板上，沒有形成真正的血凝塊，這些血小板就從外周血循環(huán)中被移除7。此外，在有癥狀深部靜脈血栓或動脈血栓病例BPC正常時并未發(fā)現(xiàn)RP百分?jǐn)?shù)的升高7

17、。雖然如此，但是對于RP百分?jǐn)?shù)升高與血栓形成相關(guān)的另一種可能解釋是：動脈血小板沉積物分布相當(dāng)廣泛，導(dǎo)致血小板更換率升高。從病理生理學(xué)角度看，血栓形成傾向的ET病例有潛在的、與較高血小板更新率相關(guān)的血小板病理改變，而血小板更新率升高的ET病例有潛在的形成血栓的危險。    對于合并血栓的ET病例，在使用溶栓藥物及羥基脲誘導(dǎo)后，應(yīng)用-干擾素進(jìn)行了維持治療，取得了良好效果，所有病例的RP百分?jǐn)?shù)和ARP均降低了，伴有紅斑性肢痛癥癥狀的改善，近期也未形成血栓。由此看來，RP百分?jǐn)?shù)和ARP的這種改變能夠得到適當(dāng)抗血小板治療的糾正。RP檢測可以提供一種非侵入性、簡單可

18、行的評測血小板動力學(xué)的手段，從而監(jiān)視ET的治療反應(yīng)。    總之，當(dāng)ET患者沒有血栓并發(fā)癥時，RP百分?jǐn)?shù)會是正常的；無癥狀病例血栓形成前期和后來發(fā)展形成血栓時，RP百分?jǐn)?shù)和ARP都是升高的，這與血小板更換率的升高一致。不過，還需要更大標(biāo)本量的前瞻性研究，對無癥狀病例進(jìn)行連續(xù)RP檢測，以確定是否能夠在RP百分?jǐn)?shù)升高和血栓癥狀產(chǎn)生之間獲得足夠的時間，以便于采取較早的、可能更成功的醫(yī)療干涉。 【參考文獻(xiàn)】 1Murphy S，Peterson P，Iland H，et al. Experience of the Polycythemia Vera Study Group with essential thrombocythemia: a final report on diagnostic criteria，survival，and leukemic transition by treatment. Semin Hematol，1997；34: 29-392Richards EM，Baglin TP. Quantitation of reticulated platelets: methodology and clinical application. Br J Haema