橋本甲狀腺炎T3、T4自身抗體對(duì)RIA測(cè)定值的影響

1、橋本甲狀腺炎T3、T4自身抗體對(duì)RIA測(cè)定值的影響【提要】目的探討T3、T4自身抗體對(duì)放射免疫法(RIA)T3、T4測(cè)定值的影響,建立測(cè)定FT3、FT4真實(shí)濃度方法方法應(yīng)用抗體結(jié)合試驗(yàn)和抗體稀釋滴度測(cè)定,檢測(cè)橋本甲狀腺炎患者血清存在T3、T4自身抗體分段鹽析血清蛋白和球蛋白,RIA測(cè)定無球蛋白血樣本FT3、FT4結(jié)果T3、T4自身抗體結(jié)合試驗(yàn)呈陽性抗體稀釋滴度1:64時(shí)T3結(jié)合率,1:32時(shí)T4結(jié)合率才與正常人相似鹽析球蛋白T3抗體結(jié)合試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)無球蛋白血樣本FT3、FT4濃度分別為072pmol/L和218pmol/L結(jié)論實(shí)驗(yàn)證明該病人血清存在T3、T4自身抗體,自身抗體干擾RIA測(cè)定,

2、使T3、T4測(cè)定值假性升高自身抗體屬于球蛋白測(cè)定無球蛋白血樣本FT3、FT4能反映出真實(shí)濃度【關(guān)鍵詞】橋本甲狀腺炎T3、T4自身抗體抗體結(jié)合試驗(yàn)中分類號(hào)R 581.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)1008-634X(2000)03-0205-03The Effect of T3and T4Autoantibodies of Hashimotos Thyroiditis on RIA Determination ValueHUANG Ru-xinLIN Tuo（Yuebei Peoples Hospital,Guangdong 512026 China）【Abstract】ObjectiveTo stu

3、dy the effect of T3 and T4 autoantibodies on RIA determination value and establish a method of FT3 and FT4 true valueMethodsT3 and T4 autoantibodies of Hashimotos thyroiditis ( HT)were determined by means of antibodies binding and dilution titer testsAfter globulin of the serum was precipitated by f

4、ractional salting out method,FT3 and FT4 in free globulin sample was measuredResults T3 and T4 autoanti bodies binding tests for the patient were positive, which T3 and T4 bindin-rates were the same as normal when HT serum was diluted to 1:64 for T3 and 1:32 for T4T3 and T4 autoantibodies binding te

5、st for golubin by salting out from the serum were also positive The FT3 and value of free golubin sample was 072pmol/L and 218pmol/L alternativelyConclusionsThere were high titers T3 and T4 antibodies in the serum, which interfered T3 and T4 RIA determination and made T3 and T4 value pseudo-rise The

6、 autoantibodies belong to globulinTrue FT3 and FT4 value may be determined in freegolubin serum sample【Key Words】Hashimotos thyroiditisT3 and T4 autoantibodiesAntibodies binding test橋本甲狀腺炎(HT)是較常見的自身免疫性疾病在產(chǎn)生TGAb和TMAb的同時(shí)也可能產(chǎn)生T3和/或T4抗體,干擾RIA測(cè)定,導(dǎo)致結(jié)果與TSH值和臨床不符我們發(fā)現(xiàn)1例HT因血清中同時(shí)存在T3和T4自身抗體干擾血清T3、T4 RIA測(cè)定結(jié)果,使

7、假性升高研究報(bào)告如下1對(duì)象與方法11一般資料女性,18歲,無突眼,甲狀腺。腫大,未及結(jié)節(jié),未聞血管雜音心率66次/分,律齊血清甲狀腺激素和TGAb、TMAb測(cè)定值(見表1).12方法血清T3水平高、T4水平正常、TSH水平升高的矛盾結(jié)果,為檢測(cè)T3、T4抗體,行下列實(shí)驗(yàn):121自身抗體結(jié)合試驗(yàn)取血清25l加pH74 PBS 75l,分別加入125I-T3和125I-T4 100l混勻,取正常人血清作對(duì)照樣本在37C溫浴1h,然后加入25%PEG 200l,4C離心棄上清液,測(cè)沉淀物CPM表1血清甲狀腺激素和TGAb、TMAb測(cè)定值Tab.1The results of detecting th

8、yroid hormone,TSH and TGAb,TMAbTT3TT4FT3FT4TSHTGAbTMAbnmol/Lnmol/Lpmol/Lpmol/LmIU/L%第1次381105310415675356427第2次36181499313475344456第3次39799411614375413475服甲狀腺片后427180167195143401427正常值1434541742598102503442030122自身抗體稀釋度實(shí)驗(yàn)用PBS將患者血清倍比稀釋為12,14,18,116,132 ,164,1128,各取100l,加入pH74 PBS 50l,分別加入125I-T3和125

9、I-T4 100l樣本37C溫浴1h然后各加入25%PEG 200l,4C離心棄上清液,測(cè)沉 淀CPM123分段鹽析分離血清蛋白和球蛋白以及抗體結(jié)合試驗(yàn)取血清200l加入飽和硫酸銨200l,混勻離心,取上清液備用球蛋白沉淀加入蒸餾水200l混勻復(fù)溶取上清液和球蛋白復(fù)溶液各50l加pH74 PBS 75l,分別加入125I-T3和125I-T4 100l混勻,以正常人血清同樣處理作對(duì)照樣本在37C溫浴1h,然后加入25% PEG 200l,4C離心,棄上清液,測(cè)沉淀物CPM124血清去球蛋白樣本FT3、FT4測(cè)定取病人血清分段鹽析后上清液200l按FT3、FT4 RIA 測(cè)定試劑盒操作取正常人血

10、清同樣處理作對(duì)照樣本測(cè)定沉淀部分CPM值125攝131I試驗(yàn)和SPECT甲狀腺靜態(tài)顯像病人于晨8:00空腹口服131I 2uci,測(cè)3h、24h攝131I率;靜脈注射99mTc 5mci,20min后行SPECT甲狀腺靜態(tài)顯像,測(cè)甲狀腺/唾液腺攝99mTc比值 2結(jié)果21抗體T3、T4結(jié)合率分別為361%，245%正常人分別為108%和112%(結(jié)合率=B/T).22自身抗體1:64稀釋血清T3結(jié)合率為114%; 1:32稀釋血清T4結(jié)合率為106%結(jié)果(見表2)23正常人血清去球蛋白樣本T3結(jié)合率和T4結(jié)合率分別是112%和126%; 病人T3結(jié)合率128%和114%正常人血清球蛋白復(fù)溶樣本

11、T3結(jié)合率和T4結(jié)合率分別為121%和125%;病人T3結(jié)合率和T4結(jié)合率分別為359%和238%24病人血清去球蛋白樣本FT3、FT4測(cè)定值分別為072pmol/L和218pmol/L(本實(shí)驗(yàn)室血清去球蛋白樣本FT3值084351pmol/L; FT4值33833pmol/L)表2自身抗體稀釋度試驗(yàn)結(jié)果Tab.2The results of dilution test for autoantibobies病人血清稀釋度T3-CPMT3結(jié)合率(B/T)(%)T4-CPMT4結(jié)合率(B/T)(%)1:112811361192642451:211533325163552081:4109293081

12、45461851:89404265122661561:166423181100641281:32503914283341061:64404511475259571:1283701104未稀釋正常人血清3832108880611225病人攝131I率3h:39%,24h:62%SPECT甲狀腺靜態(tài)顯像:甲狀腺中度腫大,邊界清晰,放射性分布基本均勻,攝99mTc功能增加,甲狀腺/單側(cè)唾液腺攝99mTc比值=167(正常值=1535) 3討論本例僅有甲狀腺腫大外,無明顯臨床癥狀其血清甲狀腺自身抗體TGAb、TMAb呈陽性反應(yīng)TMAb可抑制甲狀腺激素合成過程中關(guān)鍵酶過氧化物酶活性,故病人血清T4、FT

13、4降低,TSH反饋性升高,刺激甲狀腺增生腫大,診斷為HT1本例病人多次TT3和FT3值高于正常,TT4和FT4值正常,而TSH高于正常，結(jié)果提示該病人血清中有能與T3和T4特異性結(jié)合的物質(zhì)用倍比稀釋患者血清做125I-T3和125I-T4結(jié)合率試驗(yàn),作可得滿意抗體稀釋曲線(見表2)上述實(shí)驗(yàn)支持患者血清中存在T3和T4抗體半飽和硫酸銨沉淀球蛋白復(fù)溶后與125I-T3和125I-T4結(jié)合率分別為359%和238%,證明T3和T4抗體為球蛋白該病人血清用半飽和硫酸銨沉淀球蛋白后,其上清液中FT3和FT4不受球蛋白中自身抗體的影響,所測(cè)072pmol/L與218pmol/L應(yīng)為真實(shí)FT3和FT4濃度,

14、均低于本室正常值FT3和FT4水平降低反饋性刺激垂體分泌TSH,使血清TSH升高 TSH促進(jìn)甲狀腺細(xì)胞增生腫大并且攝取131I和99mTc功能增加1HT自身免疫反應(yīng)過程中,機(jī)體產(chǎn)生TGAb、TMAb同時(shí)可能也產(chǎn)生T3和T4抗體,干擾RIA測(cè)定2，3RIA測(cè)定過程中,自身抗體可與加入的兔抗人血清同時(shí)競爭T3、T4標(biāo)記物,而二抗是驢抗兔抗體,僅能與125I-T3-兔抗人血清復(fù)合物和125I-T4-兔抗人血清結(jié)合,作B/F分離時(shí),沉淀中T3和T4的結(jié)合率明顯減少,導(dǎo)致T3和T4值假性升高4用甲狀腺素片60mg/天治療一個(gè)月復(fù)查,甲狀腺縮小,TSH值正常當(dāng)血清T3、T4、FT3、FT4、TSH結(jié)果有矛

15、盾,測(cè)定病人血清去球蛋白樣本FT3能反映真實(shí)濃度,并應(yīng)建立本實(shí)驗(yàn)室正常值相應(yīng)的抗體結(jié)合實(shí)驗(yàn)和抗體稀釋度實(shí)驗(yàn)對(duì)于明確診斷十分必要黃汝新（廣東省粵北人民醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科韶關(guān)512026）林拓（廣東省粵北人民醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科韶關(guān)512026）參考文獻(xiàn)1，林拓, 張巧云,李潔珍等核醫(yī)學(xué)檢查對(duì)早期橋本甲狀腺炎的診斷價(jià)值J中華核醫(yī)學(xué)雜志，1998,18:2422，Rajatanavin RThyroid hormone antibodies and Hoshimotos Thyroiditis in Mongrel dogsJJournal of Clinnical Endocrinology and Metebolism，1