呼吸道病毒九聯(lián)檢技術(shù)講解-課件

1、呼吸道病毒九聯(lián)檢技術(shù)九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體 l采用間接免疫熒光法（IFA）l同時(shí)檢測(cè)人血清中呼吸道感染主要病原體的IgM抗體l用于呼吸道感染疾病的輔助診斷。 可檢的病原體包括：可檢的病原體包括：l嗜肺軍團(tuán)菌血清1型、l肺炎支原體、lQ熱立克次體、l肺炎衣原體、l腺病毒、l呼吸道合胞病毒、l甲型流感病毒、l乙型流感病毒l副流感病毒1、2和3型。.檢測(cè)原理檢測(cè)原理 l間接免疫熒光法IFAl基于待測(cè)樣本中的抗體與吸附在載玻片上的抗原發(fā)生的反應(yīng)。l樣本中存在的特異性抗體和抗原反應(yīng)，未與抗原結(jié)合的免疫球蛋白在洗滌步驟中除去。l在下一步驟中，抗原-抗體復(fù)合物與熒光素標(biāo)記的抗人球蛋白反應(yīng)l用免疫熒光

2、顯微鏡觀察結(jié)果。 試劑盒組成及用途試劑盒組成及用途 簡(jiǎn)明操作程序簡(jiǎn)明操作程序 結(jié)果判斷結(jié)果判斷l(xiāng)有效性判斷有效性判斷l(xiāng)每一次試驗(yàn)都應(yīng)設(shè)立陽(yáng)性和陰性對(duì)照，以確認(rèn)試驗(yàn)和試劑盒的有效性。觀察到的熒光模式應(yīng)為：l陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照：腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒對(duì)陽(yáng)性質(zhì)控的1-15%細(xì)胞出現(xiàn)蘋(píng)果綠細(xì)胞核、胞漿或胞膜熒光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同時(shí)觀察到著色的合胞）；軍團(tuán)菌、衣原體或立克次體中所有的細(xì)菌呈現(xiàn)出蘋(píng)果綠熒光；支原體對(duì)陽(yáng)性質(zhì)控在細(xì)胞外圍呈現(xiàn)蘋(píng)果綠色熒光。l陰性對(duì)照陰性對(duì)照：軍團(tuán)菌、肺炎衣原體和立克次體無(wú)熒光，支原體、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的

3、細(xì)胞呈現(xiàn)紅色。陽(yáng)性結(jié)果熒光圖譜陰性結(jié)果熒光圖譜 樣本結(jié)果判斷樣本結(jié)果判斷 l陽(yáng)性結(jié)果：可以觀察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒對(duì)陽(yáng)性血清的1-15%細(xì)胞的細(xì)胞核、胞漿或胞膜出現(xiàn)蘋(píng)果綠色熒光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同時(shí)觀察到著色的合胞）；軍團(tuán)菌、衣原體或立克次體中所有的細(xì)菌呈現(xiàn)出蘋(píng)果綠色熒光；支原體對(duì)陽(yáng)性血清在細(xì)胞外圍呈現(xiàn)蘋(píng)果綠色熒光。樣本結(jié)果判斷樣本結(jié)果判斷 l陰性結(jié)果：可觀察到軍團(tuán)菌、肺炎衣原體和立克次體無(wú)熒光，支原體、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的細(xì)胞呈現(xiàn)紅色。臨床靈敏度和特異性臨床靈敏度和特異性 病原體對(duì)比方法樣本數(shù)量陽(yáng)性符合率陰性符合率

4、嗜肺軍團(tuán)菌IFA8294.4%98.4%肺炎支原體ELISA6296.8%100.0%Q熱立克次體IFA74100.0%97.6%肺炎衣原體IFA61100.0%98.0%腺病毒ELISA7485.7%97.0%呼吸道合胞病毒ELISA9793.8%100.0%甲型流感病毒ELISA4694.1%96.4%乙型流感病毒ELISA40100.0%96.4%副流感病毒ELISA36100.0%96.3%對(duì)所需檢測(cè)的樣本要求 l僅適用與于檢測(cè)人血清。l其血液采集需由專業(yè)人員無(wú)菌靜脈穿刺采集。建議使用消毒或無(wú)菌技術(shù)，以保持樣本的完整性。l血清樣本采集后如不在8小時(shí)內(nèi)檢測(cè)應(yīng)28 C冷藏，如7天內(nèi)不檢測(cè)，

5、則應(yīng)冷凍（-20C）保存。l不要反復(fù)凍融以防止免疫球蛋白滴度降低，特別是IgM。l不要使用高血脂或污染的血清。若樣本中含有微粒要離心使之澄清。 呼吸道感染病原體IgG/M抗體檢測(cè) l在感染早期采集的樣本可能是檢測(cè)不到IgG的，在這種情況下可采用IgM檢測(cè)，或者在14-21天后采集第二個(gè)血清樣本，并與原標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)來(lái)確定是否發(fā)生血清轉(zhuǎn)換。l在初次感染和再次感染的過(guò)程中，IgG和IgM抗體有不同的表現(xiàn)方式：初次感染時(shí)，幾乎在所有的情況下IgM和IgG均出現(xiàn)（IgM早于IgG出現(xiàn)）；而再次感染時(shí)，可能不出現(xiàn)IgM，因此IgG的檢測(cè)是唯一有用的診斷方法。l在許多疾病中病人的一生都可能存在高滴度的IgG，而IgM一般情況下僅在感染后23個(gè)月存在于