細(xì)胞周期素E和p53同時(shí)表達(dá)與早期胃癌臨床病理的關(guān)系

1、細(xì)胞周期素E和p53同時(shí)表達(dá)與早期胃癌臨床病理的關(guān)系【摘要】目的探討細(xì)胞周期素 E和p53的同時(shí)表達(dá)在早期胃癌進(jìn)展中的意義。方法用免疫組化法檢測(cè)97例早期胃癌中細(xì)胞周期素 E和p53的表達(dá)。結(jié)果早期胃癌中細(xì)胞周期素 E和p53的表達(dá)顯著相關(guān)，二者的同時(shí)表達(dá)率為19%（18/97）。同時(shí)表達(dá)的早期胃癌中，平均腫瘤最長徑(2213) mm，幽門部發(fā)生率30%（15/50），分化型占26%（18/70），淋巴管浸潤率35%（11/31），均顯著低于或高于對(duì)照組；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率38%（5/13），靜脈管浸潤率39%（7/18），均高于對(duì)照組。同時(shí)表達(dá)的18例中，5年生存率僅為61%(11/18)，而細(xì)胞

2、周期素E與p53均陰性者5年生存率為90%(P0.004)。結(jié)論細(xì)胞周期素 E和p53的同時(shí)表達(dá)很可能參與和促進(jìn)了早期胃癌的進(jìn)展，對(duì)兩者同時(shí)表達(dá)者應(yīng)給予更積極的治療?！娟P(guān)鍵詞】免疫組織化學(xué)病理學(xué)胃腫瘤 The coexpression of cyclin E and p53: correlation with clinicopathological features in early gastric cancerLI Jiaqing, CAI Wenyan, WUAN Yuanlian.Department of General Surgery, The First Hospital, Bei

3、jing Medical University, Beijing 100034【Abstract】ObjectiveTo investigate the significance of co-expression of cyclin E and p53 in the progression of early gastric cancer. MethodsThe expression of cyclin E and p53 were examined by immunohistochemical method in 97 patients with early gastric cancer. R

4、esultsThe expression of cyclin E was significantly related with that of p53 and the incidence of co-expression of cyclin E and p53 was 18% (18/97) in early gastric cancer.The average diameter of the early gastric cancers with co-expression was （2213） mm, the incidence in antrum was 30% (15/50), the

5、rate of differentiated type was 26% (18/70), the incidence of lymphatic vessel invasion was 35% (11/31), all these parameters were significantly worse than in control groups. As to the carcinomas with co-expression, the incidence of lymph node metastasis was 38%(11/31), the rate of venous vessel inv

6、asion was 39%(7/18); both of the incidences tended to be higher than in their negative control groups. The 5 year survival rate of patients with co-expression was 61%(11/18),vs. 90% in negative cyclin E and p53 controls (P0.004). ConclusionThe co-expression of cyclin E and p53 may promote the progre

7、ssion of early gastric cancer. The patients with co-expression should be given more aggressive postoperative treatments.【Key words】ImmunohistochemistryPathologyStomach neoplasms 盡管醫(yī)學(xué)進(jìn)展已使早期胃癌的預(yù)后明顯改善，但仍有部分患者預(yù)后不良。鑒別出早期胃癌中細(xì)胞生物學(xué)特性較惡者，對(duì)于及時(shí)確定治療方案和進(jìn)一步改善患者預(yù)后具有重要意義。已證實(shí)突變型p53不僅失去了正常野生型p53對(duì)細(xì)胞生長的抑制作用，而且具有癌基因的功能。

8、1991年首次發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞周期素E（Cyclin E），近來又證實(shí)其表達(dá)與細(xì)胞的腫瘤變形密切相關(guān)，并且可能參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展1，2。最近我們的研究表明，Cyclin E的表達(dá)參與、促進(jìn)了早期胃癌的進(jìn)展（結(jié)果待發(fā)表）。同時(shí)基礎(chǔ)研究提示，Cyclin E和p53的表達(dá)之間可能存在某種關(guān)系3。因此，與只有單獨(dú)的Cyclin E或p53表達(dá)及二者均無表達(dá)的腫瘤相比，二者同時(shí)表達(dá)的早期胃癌可能具有惡性程度較高的細(xì)胞生物學(xué)特性；并且同時(shí)表達(dá)在早期胃癌的發(fā)展中可能起不良作用。本文旨在探討Cyclin E和p53的同時(shí)表達(dá)在早期胃癌進(jìn)展中的作用，以期進(jìn)一步改善早期胃癌中預(yù)后較差者的治療和預(yù)后。材料與方法一、標(biāo)

9、本取19791992年間日本鹿兒島大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一外科連續(xù)手術(shù)切除的早期胃癌97例，其中男72例，女25例。平均年齡64歲（3185）。標(biāo)本經(jīng)10福爾馬林固定、石蠟包埋。每例標(biāo)本均選擇既包括腫瘤中心又含腫瘤邊緣的石蠟塊1個(gè)，制成3張3微米連續(xù)切片后分別經(jīng)抗Cyclin E、抗p53單克隆抗體和HE染色。早期胃癌臨床病理特征的診斷依據(jù)為日本胃癌研究的一般規(guī)則(第12版)。其肉眼觀察類型分為隆起型、凹陷型及混合型。組織學(xué)類型分為分化型（包括乳頭狀與管狀腺癌）和未分化型（包括印戒細(xì)胞癌、粘液與低分化腺癌）。二、免疫組化染色切片按免疫組織化學(xué)法染色2，藥盒為Histofine (日本Nichirei公司

10、)產(chǎn)品。二甲苯脫臘后的組織切片經(jīng)酒精水化后，浸入0.3的雙氧水中30分鐘，以阻斷內(nèi)源性氧化酶的活性，然后在0.01 mol/L、pH 6.5、100的檸檬酸緩沖液內(nèi)加熱30分鐘，以充分暴露抗原。分別經(jīng)抗Cyclin E單克隆抗體(Santa Cruz生物技術(shù)公司，1600倍稀釋)和抗p53單克隆抗體（Transduction實(shí)驗(yàn)室, Lexington, KY, 美國，1:500倍稀釋）4孵育至少12小時(shí)后，室溫下切片再分別與兔抗鼠血清反應(yīng)20分鐘，過氧化酶復(fù)合物反應(yīng)15分鐘。隨后Cyclin E及p53染色經(jīng)二胺基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽分別顯色2分鐘和5分鐘，再經(jīng)蘇木精復(fù)染1分鐘，脫水、透明、封片。

11、三、結(jié)果評(píng)價(jià)每張切片選擇5個(gè)不同的代表性區(qū)域（即切片的中心及上、下、左、右四邊），分別進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。每個(gè)區(qū)計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，5個(gè)區(qū)共1000個(gè)細(xì)胞，計(jì)算染色細(xì)胞所占比例。Cyclin E和p53的染色結(jié)果分為：陰性(-)，其染色細(xì)胞數(shù)小于或等于5；陽性(+)，染色細(xì)胞數(shù)大于52。四、統(tǒng)計(jì)處理使用Statview 4.5版統(tǒng)計(jì)軟件。 Cyclin E和p53的同時(shí)表達(dá)與年齡和腫瘤大小的關(guān)系采用H檢驗(yàn)，與其它臨床病理特征的關(guān)系采用2檢驗(yàn)，與預(yù)后的關(guān)系采用Kaplan-Meier檢驗(yàn)中的Logrank法。結(jié)果一、Cyclin E和p53的關(guān)系Cyclin E陽性組比陰性組顯著頻繁地表達(dá)了p53(表1

12、)。 1、2顯示1例表達(dá)Cyclin E的早期胃癌也同時(shí)表達(dá)了p53。18例（18/97，18%）早期胃癌同時(shí)表達(dá)了Cyclin E及p53(1，2)。二、臨床病理特征與同時(shí)表達(dá)的關(guān)系表2顯示Cyclin E與p53同時(shí)表達(dá)的早期胃癌，腫瘤最大徑顯著短于二者均無表達(dá)者；同時(shí)表達(dá)者腫瘤主要發(fā)生在胃的幽門部，全部為分化型，淋巴管浸潤的比例顯著較高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和靜脈浸潤的比例也傾向較高。三、預(yù)后與同時(shí)表達(dá)的關(guān)系Cyclin E與p53同時(shí)表達(dá)組的5年生存率顯著低于非同時(shí)表達(dá)組(表3)。表197例早期胃癌Cyclin E與p53表達(dá)的關(guān)系Cyclin E表達(dá)例數(shù)p53表達(dá)陰性（%）陽性（%）陰性625

13、0(81)12(19)陽性3517(49)18(51) 注：2值=16.123，P0.01 1癌上皮細(xì)胞被抗Cyclin E單克隆抗體染色4002同一病例的癌上皮細(xì)胞也同時(shí)被抗p53單克隆抗體染色400 表297例早期胃癌中臨床病理特征與Cyclin E和p53同時(shí)表達(dá)的關(guān)系臨床病理特征例數(shù)Cyclin E和p53的表達(dá)2值P值Cy-p53-(%)Cy-p53+(%)Cy+p53-(%)Cy+p53+(%)總計(jì)9750(52)12(12)17(18)18(18)平均年齡(歲)59136913641168910.648005平均腫瘤最長徑(毫米)3320211522922137.987005腫瘤

14、位置賁門部2116(76)0(0)4(19)1(5)18.084001胃體部2613(50)7(27)4(15)2(8)幽門部5021(42)5(10)9(18)15(30)組織學(xué)類型分化型7029(41)11(16)12(17)18(26)14.230001未分化型2721(78)1(4)5(18)0(0)淋巴管浸潤無6637(56)10(15)12(18)7(11)9.193001有3113(42)2(6)5(16)11(35)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無8443(51)11(13)17(20)13(15)6.117005有137(54)1(8)0(0)5(38)靜脈浸潤無7943(54)10(13)15

15、(19)11(14)6.158005有187(39)2(11)2(11)7(39) 注：Cy-p53-，Cyclin E、p53的表達(dá)同時(shí)呈陰性；：Cy-p53+，Cyclin E表達(dá)呈陰性而同時(shí)p53表達(dá)呈陽性；：Cy+p53-，Cyclin E表達(dá)呈陽性而同時(shí)p53表達(dá)呈陰性；：Cy+p53+，Cyclin E、p53的表達(dá)同時(shí)呈陽性。：H檢驗(yàn)的H值 表3Cyclin E和p53同時(shí)表達(dá)與早期胃癌預(yù)后的關(guān)系Cyclin E和p53的同時(shí)表達(dá)情況例數(shù)5年生存例數(shù)百分比（%）Cyclin Ep53494490Cyclin Ep53121083Cyclin Ep53161488Cyclin Ep

16、53181161* 注：P值001*分別與其它3組5年生存率比均有顯著差異 討論Cyclin E系周期素依賴激酶2 (Cyclin-dependent kinase 2, CDK2) 和CDK抑制者在細(xì)胞周期的G1晚期分別促進(jìn)和抑制G1向S期的過渡。正常情況下，作為一種細(xì)胞內(nèi)核蛋白的Cyclin E是有順序、按計(jì)劃進(jìn)行表達(dá)的。合成開始于G1中期，最大化表達(dá)出現(xiàn)在細(xì)胞進(jìn)入S期的時(shí)刻，降解發(fā)生在S期內(nèi)，在G2期和M期不存在。而CDK2在整個(gè)細(xì)胞周期中均有表達(dá)且水平不變，故Cyclin E只能在G1晚期和S早期激活CDK2以促使G1/S過渡4。作為CDK2抑制者的野生型p53，不僅通過激活p21抑制

17、細(xì)胞周期進(jìn)程，而且還通過調(diào)控GADD45的轉(zhuǎn)錄抑制細(xì)胞的生長。異常情況下，Cyclin E由于無順序、無計(jì)劃的過度表達(dá)而存在于整個(gè)細(xì)胞周期中，其可持續(xù)性地在整個(gè)細(xì)胞周期中激活CDK2去磷酸化底物，進(jìn)而驅(qū)使細(xì)胞超越某些控制機(jī)制發(fā)生異常增殖4。突變型p53不僅失去了正常野生型p53對(duì)細(xì)胞生長的抑制作用，而且具有癌基因的功能。提示Cyclin E和p53的同時(shí)過度表達(dá)者，可能具有較惡的細(xì)胞生物學(xué)特性。早期胃癌中，Cyclin E陽性者比陰性者顯著頻繁地表達(dá)p53，與同時(shí)包括早晚期胃癌病例的研究結(jié)果一致2。在接觸性抑制細(xì)胞中，Cyclin E過度表達(dá)能恢復(fù)p53的活性3。本結(jié)果提示，早期胃癌中過度表達(dá)

18、的Cyclin E與p53之間可能具有某種相互促進(jìn)的關(guān)系。采用免疫組織化學(xué)方法，我們首次觀察到了以下重要現(xiàn)象：(1)同時(shí)表達(dá)Cyclin E和p53的早期胃癌浸潤淋巴管的比例較高，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性較大和出現(xiàn)靜脈管浸潤的可能性較大，因Cyclin E 或p53過度表達(dá)的胃癌細(xì)胞增殖較快5。結(jié)果表明，同時(shí)表達(dá)的早期胃癌具有較強(qiáng)的能力浸潤淋巴系統(tǒng)和靜脈管，其細(xì)胞生物學(xué)惡性程度較高，兩者同時(shí)表達(dá)，可增強(qiáng)癌細(xì)胞的浸潤能力。具有Cyclin E基因擴(kuò)增的胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高6，也從基因水平支持此結(jié)論。(2)同時(shí)表達(dá)者5年生存率顯著低下，這可能與此類腫瘤頻繁浸潤淋巴系統(tǒng)及靜脈管有關(guān)，證實(shí)同時(shí)表達(dá)者生物學(xué)

19、惡性程度較高，故對(duì)有同時(shí)表達(dá)的早期胃癌應(yīng)該采取更積極的治療措施。(3)同時(shí)表達(dá)只發(fā)生在分化型早期胃癌，提示分化型和未分化型胃癌的細(xì)胞增殖機(jī)制可能有所不同，并提示分化型早期胃癌中有同時(shí)表達(dá)者，其細(xì)胞生物學(xué)惡性度也可能較高。(4)同時(shí)表達(dá)的早期胃癌多發(fā)生在幽門部且體積小。同時(shí)表達(dá)很可能參與和促進(jìn)了早期胃癌的進(jìn)展，同時(shí)表達(dá)癌浸潤淋巴系統(tǒng)的能力較強(qiáng)且預(yù)后較差，對(duì)Cyclin E和p53同時(shí)表達(dá)者，需要采用更加積極的綜合治療措施。志謝：感謝日本鹿兒島大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一外科愛甲孝教授對(duì)本研究的指導(dǎo)。作者單位：100034 北京醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院普外科參考文獻(xiàn)1 Thenaa KS，Daniel M. Cell

20、cyclins and cyclin-dependent kinase activities in mouse mammary tumor development. Carcinogenesis, 1995, 16: 823-30.2Yasui W, Akama Y, Kuniyasu H, et al. Expression of Cyclin E in human gastric adenomas and adenocarcinomas: correlation with proliferative activity and p53 status. J Exp Ther Oncol, 1996, 1:88-94.3Deffie A, Hao MM, Oca-Luna RMD, et