梅毒.9.2ppt課件

1、梅毒檢測亳州市人民醫(yī)院檢驗科1;一.什么是梅毒？1.定義：梅毒是由蒼白（梅毒）螺旋體引起的慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病(VD,STD)。2;2.梅毒的分型：先天梅毒和后天傳染梅毒，先天梅毒就是人們常說的胎傳梅毒，母體傳播。3.梅毒的傳播途徑：梅毒病人是唯一的傳染源。性接觸傳染占95%。未經治療的病人在感染一年內最具傳染性，隨病期延長，傳染性越來越小，病期超過4年者，通過性接觸無傳染性。先天梅毒是患有梅毒的孕婦通過胎盤血行而傳染給胎兒3;3.梅毒的分期一期梅毒： 標志性臨床特征是硬下疳。這時候一般在外生殖器局部形成丘疹，進而無痛性潰瘍，這時候病灶中有大量螺旋體存在，此時極易傳播，1月左右，下疳自然愈合

2、，但抽血檢查梅毒陽性。（注：下疳：指發(fā)于男女外生殖器部位之瘡瘍 ）4;二期梅毒：經無癥狀的2-3個月進入第二期：梅毒疹期，全身皮膚粘膜出現(xiàn)皮疹，伴淋巴結腫大，并可累計骨、關節(jié)、眼、及中樞神經系統(tǒng)，梅毒疹及淋巴結中可有大量螺旋體，此期不治也可在3周到3個月內自然消退，但可反復發(fā)作。注：（一期和二期梅毒合起來叫做早期梅毒）5;6;三期梅毒：大約1/4的早期梅毒可發(fā)展為晚期梅毒，即第三期梅毒。螺旋體進入人體二年后，如未能徹底治療，就會形成內臟損害（如心、脾、腎），同時皮膚、腦神經、五官等都會受到不同的損害，此期為晚期梅毒，如不治療直接影響生命。 先天性梅毒可導致胎兒全身感染，螺旋體在胎兒內臟及組織中

3、大量繁殖，可引起胎兒的流產或死胎。7;4.梅毒感染人體后，人體產生的抗體有那些？（1）梅毒非特異性類脂質反應素抗體，又稱為反應素，未經治療的梅毒患者血清中反應素可長期存在，經適當治療后可逐漸減少，直至消失。（2）抗密螺旋體的特異性抗體。8;5.梅毒的檢測1.有病損者（下疳、皮疹、淋巴結穿刺液）暗視野鏡檢。暗視野顯微鏡檢查是一種檢查梅毒螺旋體的方法。暗視野，顧名思義即是顯微鏡下沒有明亮的光線，它便于檢查蒼白的螺旋體。這是一種病原體檢查，對早期梅毒的診斷有十分重要的意義。 2.梅毒血清學檢測：由于潛伏期和晚期梅毒不出現(xiàn)皮膚粘膜病損，得不到直接檢出的標本，因此血清學實驗非常重要。9;10;6.梅毒免

4、疫測定一：使用類脂質抗原的血清學實驗：梅毒螺旋體在破壞機體組織的過程中，體內釋放一種心磷脂抗原，這種抗原可刺激機體產生相應的抗體.即抗心磷脂抗體。常用于臨床篩選及判定治療的效果 ，此類試驗主要包括性病研究所實驗室試驗（VDRL）不加熱血清反應素試驗（USR）快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR）甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）.11;前兩者用玻片，形成凝集或凝集沉淀，需要在顯微鏡下觀察結果。不方便。RPR是USR抗原基礎上加入一定量的黑色活性炭顆粒，抗原抗體反應在白色地板上出現(xiàn)黑色凝集顆粒，可用肉眼觀察，不需要顯微鏡12;TURST是在RPR抗原試劑中加入特質的甲苯安紅染料，在白色紙板上的抗

5、原抗體凝集反應更容易觀察。所以目前TRUST是目前最常用的梅毒篩查方法。因為以上四種方法用的抗原都一樣，采用的凝集方法也一樣，所以測定的敏感性相似。但因為所以抗原為類脂質抗原，所以特異性較差，假陽性可見于各種疾病，如麻風、結核、SLE，類風濕關節(jié)炎、猩紅熱等疾病。13;由于感染梅毒后反應素的出現(xiàn)晚于特異性梅毒螺旋體抗體，晚期梅毒反應素又可能轉陰，因此這類試驗不適于一期早期、三期梅毒，對隱性梅毒和神經梅毒也不敏感。因此此類試驗做梅毒初篩時，存在一定數(shù)量的漏檢。14;（2）.使用密螺旋體抗原的血清學實驗原理：以死的或活的密螺旋體或其成分為抗原檢測血清中特意的抗密螺旋體抗體。為梅毒檢測的確認實驗。此

6、類實驗主要包括熒光密螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA）梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)等。目前ELISA的測定特異性和敏感性均高于TPHA等方法。成為梅毒血清學診斷試驗的首選方法。15;7.雙抗原夾心ELISA，檢測血清中梅毒螺旋體抗體。1實驗準備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時將濃縮洗滌液作1：20稀釋。2編號；將酶標條板固定在板架上，按序編號，每板設陰性對照3孔，陽性對照2孔?？瞻讓φ?孔。（空白對照孔不加樣品及酶標試劑機，其余各步相同）3加酶：每孔加100ul。4加樣：分別在相應孔中加入待測標本，

7、或陰、陽對照50ul，振蕩混勻。5溫育：用封板膜封板后，置37孵育60分鐘。6洗板：洗板機洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。7加顯色劑：先加顯色劑A，每孔50ul；再加顯色劑B，每孔50ul；充分混勻，放置37避光孵育15分鐘。8終止反應：每孔加入終止液0.05毫升，混勻。9測定：用酶標儀讀數(shù)，可選擇波長450nm（以空白孔校零）或雙波長450/630nm，讀取各孔OD值。16;8.Turst操作步驟定性試驗：分別吸取50ul梅毒陽性對照和陰性對照均勻鋪加在紙卡的兩個圓圈中。取待檢血清或血漿50ul（不需滅活）置于紙卡的另一圓圈中。用專用滴管及針頭垂直分別滴加TRUST試劑1滴于上述血清中。按每分鐘100轉搖動8分鐘，肉眼觀察效價。定量試驗：將待檢血清用生理鹽水作倍比稀釋，然后按上述定性方法進行試驗，以呈現(xiàn)明顯凝集反應的最高稀釋度作為該血清的凝集效價。三、結果判斷：陽性反應（+）：可見中等或較大的紅色凝聚物。弱陽性反應（+）：可見較小的紅色凝聚物。陰性反應（-）：可見均勻的抗原顆粒而無凝聚物。四、注意事項：本試驗在2329條件下進行。TRUST試劑使用前應充分搖勻。本試驗系非特異性反應，需結合臨床進行綜合分析，必要時需作梅毒螺旋體抗