發(fā)酵法生產(chǎn)α熊果苷及其分離純化

1、北京化工大學(xué)碩士學(xué)位論文發(fā)酵法生產(chǎn)-熊果苷及其分離純化姓名：劉春巧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：發(fā)酵工程指導(dǎo)教師：張鵬20100606北京化工大學(xué)碩：論文發(fā)酵法生產(chǎn)一熊果苷及其分離純化摘要一熊果苷，一種高效、安全、配伍性強(qiáng)的天然美白活性物質(zhì)。它比同分異構(gòu)體一熊果苷的美白效果更好、更安全。本論文探討利用嗜麥芽黃單胞菌一（）生物合成一熊果苷，并對(duì)產(chǎn)物分離純化進(jìn)行了研究。利用嗜麥芽黃單胞菌一催化合成【一熊果苷的方法具有原料簡(jiǎn)單，反應(yīng)條件容易控制，反應(yīng)周期短，產(chǎn)物純度高等優(yōu)點(diǎn)，具有重要的工業(yè)化意義。本論文系統(tǒng)地闡述了黃單胞菌的誘變篩選過程、發(fā)酵條件的優(yōu)化及產(chǎn)物的分離純化。通過對(duì)黃單胞菌的誘變篩選，最終獲得了

2、一株酶活高、專一性強(qiáng)、遺傳性狀穩(wěn)定的菌株；通過發(fā)酵條件的優(yōu)化，確定了培養(yǎng)基的最佳配方為：蔗糖，蛋白胨，牛肉膏；培養(yǎng)的最佳條件：發(fā)酵培養(yǎng)基于三角瓶中，在。、搖床培養(yǎng)，加入反應(yīng)物對(duì)苯二酚與蔗糖進(jìn)行反應(yīng)小時(shí)；發(fā)酵液以大孔吸附樹脂進(jìn)行分離純化，通過對(duì)多種樹脂的選擇，最終選擇了一種吸附力強(qiáng)、柱效高、壽命長(zhǎng)的樹脂一，分離純化的最佳條件為：樹脂吸附力為樹脂，上柱液濃度為，上柱流速為，洗脫液濃度為酒精溶液，洗脫流速為，洗脫液體積為；洗脫液進(jìn)行濃縮結(jié)晶，最終獲得的產(chǎn)物純度高達(dá)以上，整個(gè)工藝過程收率為以上。關(guān)鍵詞：【一熊果苷，黃單胞菌，發(fā)酵，大孔吸附樹脂，分離純化北京化工大學(xué)碩十論文量?jī)H一，；【一；，曲：，：，；

3、，北京化大學(xué)碩上論文，一，：，；，：【，砌，北京化工大學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。作者簽名：關(guān)于論文使用授權(quán)的說明學(xué)位論文作者完全了解北京化工大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬北京化工大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨?/p>

4、學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以允許采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密論文注釋：本學(xué)位論文屬于保密范圍，在土年解密后適用本授權(quán)書。非保密論文注釋：本學(xué)位論文不屬于保密范圍，適用本授權(quán)書。作者簽名：導(dǎo)師簽名：日期：巡臣二！二日期：圣芝！竺：！魚：里北京化大學(xué)碩十論文第一章緒論熊果苷（）屬氫醌苷化合物，化學(xué)名為一羥基苯基一一吡喃葡萄糖苷，是源于綠色植物的天然活性皮膚脫色組分，存在于熊果、越橘等植物中，是一種新興的無刺激、無過敏、配伍性強(qiáng)的天然美白活性物質(zhì)。熊果苷是國(guó)際上正在極力推廣的高功效醫(yī)藥、化妝品添加劑，國(guó)際公認(rèn)的高效祛斑美白劑，是美白化妝品理想的添加成份，國(guó)內(nèi)外需求巨大，市場(chǎng)

5、前景廣闊。熊果苷具有顯著的抑制酪氨酸酶活性，減少酪氨酸酶在皮膚中的沉積，對(duì)皮膚有漂白、防色變和祛斑的功效。而且熊果苷與安甲環(huán)酸的衍生物及七葉醇等配伍具有極佳的美白作用，抗壞血酸一熊果苷磷酸酯等具有更理想的理化性質(zhì)，這為開發(fā)更好的護(hù)膚品提供了思路。熊果苷有兩種同分異構(gòu)體，它們分別是一熊果苷（）和一熊果苷（），結(jié)構(gòu)式如下：西呔迫。一例蠕熊果苷的概況熊果苷的美白機(jī)理為了比較了一熊果苷與其同分異構(gòu)體一熊果苷的美白效果的差異，等觀察了它們對(duì)來自磨菇及小鼠黑素瘤酪氨酸酶活性的影響。結(jié)果表明，一熊果苷抑制來自蘑菇及小鼠黑素瘤的酪氨酸酶，一熊果苷反抑制小鼠黑素瘤的酪氨酸酶，但一熊果苷強(qiáng)度為一熊果苷的倍。而且等

6、通過比較一熊果苷和一熊果苷在人體黑素瘤細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)一熊果苷美白效果是一熊果苷的倍以上。研究還發(fā)一熊果苷的美白機(jī)理是直接抑制酪氨酸酶活性，從而達(dá)到減少黑色素的生成；而不是通過抑制細(xì)胞生長(zhǎng)或酪氨酸酶基因表達(dá)的方式來達(dá)到減少黑色素的生成的目的，在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，濃度為的一熊果苷未見抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)，而熊北京化工人學(xué)碩：論文果苷在同樣的濃度則出現(xiàn)有效地抑制，這進(jìn)一步說明一熊果苷不是通過殺死黑素細(xì)胞來實(shí)現(xiàn)人體皮膚的美白效果的，而是通過影響酪氨酸酶來抑制黑素的生成來達(dá)到美白效果的。此外，在一熊果苷與人體黑素瘤細(xì)胞培養(yǎng)過程中未發(fā)現(xiàn)對(duì)苯二酚的存在。這不但說明了一熊果苷在使用過程中是穩(wěn)定的，而且進(jìn)一步說明一

7、熊果苷的美白作用是其本身的作用而不是其通過分解對(duì)苯二酚來實(shí)現(xiàn)。而一熊果苷在使用過程中會(huì)抑制黑素細(xì)胞的生長(zhǎng)，長(zhǎng)期使用會(huì)導(dǎo)致黑素細(xì)胞衰退，黑素細(xì)胞是人體防御紫外線傷害的一道屏障，所以如果長(zhǎng)期使用一熊果苷會(huì)使人體降低人體自身對(duì)紫外線的防御。因此使用一熊果苷作為化妝品添加劑比一熊果苷更安全，且對(duì)人體沒有任何副作用。國(guó)內(nèi)外已經(jīng)有多家大型化妝品公司使用一熊果苷代替一熊果苷作為美白劑添加劑晴。關(guān)于它們具體數(shù)據(jù)如表：表一熊果苷與一熊果苷的比較熊果苷穩(wěn)定性的比較通過水溶性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，一熊果苷的水溶性明顯好于一熊果苷，在同等濃度下，一熊果苷只要輕微攪拌就很快溶解，而一熊果苷一般要攪拌很長(zhǎng)時(shí)間依然有少量的不能溶解。而

8、且在相同濃度相同時(shí)間條件下，一熊果苷的水溶液比一熊果苷的水溶液更容易被氧化。所以一熊果苷的穩(wěn)定性比一熊果苷高。熊果苷的制備方法熊果苷（）是從多種屬植物中可分離得到的天然活性物質(zhì)，其化學(xué)名為一羥苯基一吡喃葡萄糖苷（簡(jiǎn)稱一熊果苷）。一熊果苷其去色素作用機(jī)制已有報(bào)道，是酪氨酸酶抑制劑，主要阻斷多巴及多巴醌的合成，從而遏制黑色素的生長(zhǎng)，因而具有皮膚增白作用。世紀(jì)年代由日本資生堂化妝品株式會(huì)社作北京化人學(xué)碩士論文為化妝品美白劑首先推出，它是繼一半胱氨酸和曲酸等美白劑后又一個(gè)美白劑。不僅對(duì)皮膚的雀斑、老人斑、黃褐斑有消褪作用，而且對(duì)皮膚的滋潤(rùn)、皮膚灼傷后的愈合和粉刺等也頗有療效。目前發(fā)達(dá)國(guó)家美白護(hù)膚市場(chǎng)幾

9、乎已被熊果苷壟斷。一熊果苷和一熊果苷的來源完全不同。一熊果苷可以通過植物提取、植物細(xì)胞培養(yǎng)和人工合成三種方法來制備。而一熊果苷一般只能通過不同的微生物的酶進(jìn)行糖轉(zhuǎn)移反應(yīng)，讓一分子的葡萄糖和一分子的氫醌結(jié)合形成單一的一熊果苷睜。日本學(xué)者等采用蔗糖磷酸化酶，在緩沖液中加入氫醌與蔗糖。反應(yīng)可得一熊果苷。另有采用脂肪嗜熱桿菌在硼酸緩沖液中制備。等利用枯草桿菌振蕩培養(yǎng)，在有氧培養(yǎng)后純化得培養(yǎng)液，在醋酸緩沖液（）加入氫醌、蔗糖和培養(yǎng)液反應(yīng)制備一熊果苷。年等優(yōu)化了一熊果苷催化的酶類型和反應(yīng)條件，比較了環(huán)狀糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶（）和葡萄糖苷合成酶（）對(duì)于氫醌的糖基轉(zhuǎn)化率發(fā)現(xiàn)優(yōu)于，在最佳反應(yīng)條件中加入糊精有利于提高

10、苷的合成，同時(shí)防止生成物的分解，后達(dá)到最高產(chǎn)率。氫醌的苷化率達(dá)到（與氫醌的摩爾比）。特別是年等采用單胞桿菌屬凍干細(xì)胞，在一緩沖液中使氫醌在反應(yīng)，發(fā)生一端基異構(gòu)體糖基化生成一熊果苷。雖然一分子氫醌中有兩個(gè)酚羥基，但只有一個(gè)羥基被糖基化，同時(shí)沒有其他副產(chǎn)物如麥芽三糖等的生成，氫醌的糖基化轉(zhuǎn)化率達(dá)到（與氫醌的摩爾比），具體反應(yīng)方程式如下：舊口伽工癢臻一豁上科一熊果苷的發(fā)展現(xiàn)狀國(guó)內(nèi)現(xiàn)狀：國(guó)內(nèi)目前所能生產(chǎn)的熊果苷基本上都是一熊果苷，而且主要是通過化學(xué)法合成；對(duì)于一熊果苷的生產(chǎn)尚未見報(bào)道，已有的文獻(xiàn)主要是關(guān)于一熊果菅應(yīng)用方面的研究；這主要是因?yàn)橐韵聝煞矫嬖颍阂环矫媸怯闷胀ǖ幕瘜W(xué)合成手段無法生產(chǎn)一熊果苷，

11、另外一方面是發(fā)酵法生產(chǎn)一熊果苷的難度較大，初期投入較多，風(fēng)險(xiǎn)較大，這導(dǎo)致從事這方面的研究機(jī)構(gòu)很少。北京化火學(xué)碩：論文國(guó)外現(xiàn)狀：年代中期美國(guó)哈佛大學(xué)和日本馳名化妝品公司在他們的醫(yī)學(xué)研究中從熊果植物中發(fā)現(xiàn)了含有能夠抑制黑色素的活性成份。為了將此發(fā)現(xiàn)造福于人類，研究人員歷時(shí)載，潛心研究，終于從植物中提取出了一種無刺激、無過敏、配伍性強(qiáng)的天然美白活性物質(zhì)一熊果苷。此產(chǎn)品一經(jīng)問世，既受到化妝品科技領(lǐng)先的日本、美國(guó)的格外重視，并被廣泛應(yīng)用引。該產(chǎn)品已被收入美國(guó)化妝品組份匯編和中華人民共和國(guó)藥典（年第版）年代初，日本資生掌等公司在世界上率先開發(fā)出含熊果苷的生物美白化妝品。美國(guó)一些醫(yī)院用熊果苷臨床治療黑色素沉

12、著嚴(yán)重的病人，祛斑效果好，有效率達(dá)以上，而且沒有毒害性、刺激性、致敏性。此后，世界上使用熊果苷美白劑的化妝品公司日益增多，特別是近幾年來，有關(guān)添加熊果苷的護(hù)膚配方不斷出現(xiàn)。國(guó)外臨床試驗(yàn)證明，熊果苷對(duì)紫外線照射有安全性和穩(wěn)定性，不但能卓有成效的抑制黑色素，而且還具有良好的配伍性，能協(xié)助其他護(hù)膚成份更好的完成美白、保濕、柔軟、祛皺、消炎等作用。因此，發(fā)達(dá)國(guó)家的美白護(hù)膚品市場(chǎng)已被熊果苷所壟斷。美國(guó)化妝品香精工業(yè)協(xié)會(huì)（）認(rèn)為熊果苷是二十一世紀(jì)獨(dú)領(lǐng)風(fēng)騷非它莫屬的皮膚脫色組份。綠色使者亦極力推薦“使用這種洋溢著綠色植物氣息的化妝品。年末，日本江崎糖業(yè)公司與一家企業(yè)合作，成功開發(fā)出有皮膚增白效果的物質(zhì)“阿爾

13、法一熊果苷（一熊果苷）”，其抑制黑色素的效果比現(xiàn)有的同類物質(zhì)高大約十倍。該公司日前發(fā)表的新產(chǎn)品信息說，“阿爾法一熊果苷利用了由微生物的酶進(jìn)行的糖轉(zhuǎn)移反應(yīng)，讓一個(gè)葡萄糖與氫醌進(jìn)行“阿爾法結(jié)合，其葡萄糖的結(jié)合方式與現(xiàn)有的一熊果苷不同。該公司使用人的正常細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，“阿爾法一熊果苷（一熊果苷）抑制黑色素生成的效果比現(xiàn)有的熊果苷（一熊果苷）高十倍刪。熊果苷的應(yīng)用化妝品國(guó)內(nèi)外絕大多數(shù)學(xué)者均報(bào)道熊果苷具有美白活性，其美白機(jī)理為熊果苷對(duì)酪氨酸酶產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性及可逆性抑制，從而阻斷多巴及多巴醌的合成，進(jìn)而抑制黑色素的生成，達(dá)到美白效果。但熊果苷不影響酪酪氨酸酶的表達(dá)和合成。熊果苷細(xì)胞毒性很低，其不形響

14、人黑色素瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的最高濃度為。在此北京化大學(xué)碩上論文濃度下，后黑色素合成受到抑制，且抑制作用呈劑量依賴性。因此熊果苷對(duì)皮膚能高效美白祛斑，逐漸淡化、祛除皮膚的崔斑、黃褐斑、黑色素沉著、粉刺和老年斑。一熊果苷作為最新的美容增白劑，世界知名品牌剛剛開始使用。年推出了含有一熊果苷的新活性皮膚增白劑，日本資生堂也推出了含有一熊果苷成分的系列化妝品附湖。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)一熊果苷對(duì)紫外線灼傷所形成的瘢痕具有明顯的效果，其化學(xué)性質(zhì)也比熊果苷效果更為穩(wěn)定，能夠更方便的加入到各種美白亮膚化妝品中。之間最穩(wěn)定，推薦添加量為，之間，可用到所有的配方中【引。目前熊果苷的效果比較理想但價(jià)格相對(duì)較高。其他用途（）燒燙傷藥原料

15、：熊果葉具有抗炎、抑菌作用，統(tǒng)上用于治療尿路感染，其中熊果苷是其主要藥效。它是新型燒燙傷藥主要成分，特點(diǎn)是快速止痛，消炎力強(qiáng)，迅速消除紅腫，愈合快，不留疤痕。劑型：噴射或涂抹。（）腸道消炎用藥原料：殺菌、消炎效果好，無毒副作用。（）鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用：熊果苷灌胃可增加動(dòng)物氣管分泌、延長(zhǎng)氮水引咳潛伏期、咳嗽次數(shù)減少、氣管酚紅排泌顯增多。劑量能延長(zhǎng)哮喘潛伏期；劑能極顯著地對(duì)抗豚鼠離體氣管條的收縮【】。在抗炎、祛痰、鎮(zhèn)咳三種作用中，熊果苷的鎮(zhèn)咳效果尤其好切。但到目前為止，其抗炎、止咳、祛痰的機(jī)理尚未見報(bào)道。（）用藥可增強(qiáng)人體免疫力：最新報(bào)導(dǎo)對(duì)艾滋病毒具有免疫功能。（）抗氧化作用：藍(lán)欽艄刀采用體外培

16、養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞觀察熊果苷對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果表明熊果苷可以抵御所致細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。大孔吸附樹脂它是一種具有大孔結(jié)構(gòu)的有機(jī)高分子共聚體，是一類人工合成的有機(jī)高聚物吸附劑。因其具多孔性結(jié)構(gòu)而具篩選性，又通過表面吸附，表面電性或形成氫鍵而具吸附性。一般為球形顆粒狀，粒度多為目大孔樹脂有非極性（一，一，一，一），弱極性（一，一，一），極性（一，）之分。大孔吸附樹脂理化性質(zhì)穩(wěn)定，一般不溶于酸堿及有機(jī)溶媒，在水和有機(jī)溶劑中可以吸收溶劑而膨脹。北京化工人學(xué)碩七論文根據(jù)類似物吸附類似物的原則，一般非極性樹脂宜于從極性溶劑中吸附非極性有機(jī)物質(zhì)，相反強(qiáng)極性樹脂宜于從非極性溶劑中吸附極性溶質(zhì)，而中等極性吸附

17、樹脂，不但能從非水介質(zhì)中吸附極性物質(zhì)，也能從極性溶液中吸附非極性物質(zhì)。大孔吸附樹脂作用原理（）樹脂的篩選要達(dá)到最佳的分離純化效果，必須正確有效的選用樹脂。樹脂的選擇應(yīng)從樹脂極性、空隙率、孔徑等指標(biāo)，并根據(jù)需分離物質(zhì)的極性及吸附量等影響因素綜合考慮。（）吸附量的測(cè)定靜態(tài)吸附法：準(zhǔn)確稱取經(jīng)預(yù)處理的樹脂各適量，置適宜的具塞玻璃器皿中，緊密加入一定濃度的欲分離純化的物質(zhì)的水溶液適量，置恒溫振蕩器上振蕩，震動(dòng)速度一定，定時(shí)測(cè)定溶液中剩余濃度，直至吸附達(dá)到平衡。計(jì)算吸附量。（）動(dòng)態(tài)吸附法：將等量已預(yù)處理的樹脂各適量，裝入樹脂吸附柱中，待分離物質(zhì)水溶液以一定的流速通過樹脂床，測(cè)定流出液的濃度，直至達(dá)到吸附平

18、衡計(jì)算各樹脂的比上柱量（），然后用去離子水清洗樹脂床中未被吸附的量，計(jì)算樹脂的比吸附量（）。（上一殘）（上一殘一水洗）靜態(tài)法較動(dòng)態(tài)法簡(jiǎn)單，可控性強(qiáng)，但動(dòng)態(tài)法更能真實(shí)反映實(shí)際操作的情況。（）解析率的測(cè)定由于樹脂極性不同，吸附作用力強(qiáng)弱不同，解吸難易也不同，若吸附過強(qiáng)，解析太難，解析率過低，產(chǎn)品回收率低，損失太大，即使吸附量再大，也無實(shí)際意義。靜態(tài)法：取充分吸附的各種樹脂，分別精密加入解吸劑，解吸平衡后，濾過，測(cè)定濾液中吸附成分的濃度，根據(jù)吸附量計(jì)算解吸率。動(dòng)態(tài)法：將解吸劑以一定的速度通過樹脂床，同時(shí)配合適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法以確定解析終點(diǎn)，然后測(cè)定解吸液中藥物的濃度。（）吸附條件的確定上樣液的濃度，值，

19、上樣液吸附的速度，溫度都會(huì)影響大孔樹脂的吸附能力，現(xiàn)分別介紹：吸附液的濃度吸附液的濃度對(duì)大孔樹脂的分離純化影響很大。對(duì)于一定量樹脂，濃度太低，盡管吸附效率高，但是不能完全發(fā)揮樹脂的作用，浪費(fèi)樹脂且生產(chǎn)效率低：濃度太北京化大學(xué)碩：論文大，樹脂的吸附容量增加，但同時(shí)泄漏較多，造成浪費(fèi)所以在生產(chǎn)過程中，為了提高生產(chǎn)效率且不造成浪費(fèi)，單柱吸附時(shí)，上柱液含生藥量以在泄漏點(diǎn)附近為宜：若多柱串聯(lián)吸附上柱液含生藥量以接近飽和點(diǎn)為宜。泄漏點(diǎn)的測(cè)定方法：將藥液按少量多次的原則，在確定的吸附條件下以一定的流速分次通過樹脂床，每次收集流出液，按法分析藥物組分，若在某一時(shí)段收集的流出液中在分析方法誤差所允許的條件下，測(cè)

20、得該藥物組分，則從開始到此時(shí)所上樣的藥液體積總和就是樹脂在該吸附條件下對(duì)這一藥物組分的泄漏點(diǎn)。吸附液的值在大孔樹脂的吸附過程中，吸附液的直接影響了溶液的極性，對(duì)整個(gè)吸附過程中具有重大影響。根據(jù)化合物結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)調(diào)整原液的值，可以達(dá)到較好的吸附效果。樹脂對(duì)某種物質(zhì)的吸附，特別是對(duì)生物堿和黃酮類物質(zhì)的吸附，很大程度上受它的解離程度的影響。對(duì)非極性吸附樹脂來講，酸性物質(zhì)在酸性條件下，以分子形式存在，易被樹脂吸附，而在堿性環(huán)境下，以離子形式存在，物質(zhì)不易被吸附。因此，原液會(huì)影響樹脂吸附性能。藥液上樣吸附的速度上柱液上樣吸附的速度對(duì)樹脂的吸附能力也有一定的影響，隨著上樣液流速的加大，從柱中泄漏出的液體也在

21、不斷加大，樹脂吸附量在減小。流速過快時(shí)，樹脂與被吸附物質(zhì)分子間來不及充分接觸，致使分子不能充分?jǐn)U散到樹脂內(nèi)表面，就隨著上樣液一起泄露出去，所以造成了隨著流速的增加，吸附量下降，泄漏量增大的現(xiàn)象。在實(shí)際生產(chǎn)操作中，從盡量縮短吸附時(shí)間和增大吸附量的角度出發(fā)，應(yīng)根據(jù)不同的吸附柱選擇最佳的流速，一般上樣時(shí)控制流速在卜為宜。吸附溫度吸附溫度對(duì)樹脂的吸附有一定的影響，當(dāng)吸附時(shí)間相同時(shí)，溫度越高，吸附率越高，說明吸附越快，在實(shí)際生產(chǎn)中適當(dāng)升高溫度可縮短吸附達(dá)飽和的時(shí)間，提高效率。（）解吸條件的確定洗脫劑的確定通常所選的解吸劑應(yīng)對(duì)溶質(zhì)有較大的溶解度，這樣可以得到高濃度的洗脫液。通過選用的不同洗脫溶劑，以一定的

22、流速通過樹脂床進(jìn)行解吸，分段收集解吸液，測(cè)定濃度，繪制解析曲線，一般解吸曲線越尖銳，不拖尾，解吸率越高。解吸劑的確定根據(jù)實(shí)際情況，用稀酸或稀堿溶液調(diào)節(jié)解吸液的值，以一定的流速進(jìn)行解吸，比較不同值的解吸效果，確定解吸液的。北京化大學(xué)碩一論文解吸速度的確定一般流速越慢，解吸率越高，解吸效果好。但解吸速率的選擇，還應(yīng)結(jié)合生產(chǎn)周期，綜合考慮生產(chǎn)效率和產(chǎn)品純度，權(quán)衡利弊。一般洗脫時(shí)控制流速在較為合適。解吸溫度的確定在不同的溫度下，比較解吸效果一般溫度升高，有利于解吸，但溫度過高，有可能使一些吸附性過強(qiáng)的雜質(zhì)成分解吸而混入成品中，影響產(chǎn)品的純度同時(shí)溫度的選擇也應(yīng)考慮節(jié)能和減少設(shè)備腐蝕等因素。大孔吸附樹脂操

23、作步驟（）樹脂的預(yù)處理預(yù)處理的目的：為了保證制劑最后用藥安全樹脂中含有殘留的未聚合單體，致孔劑，分散劑和防腐劑對(duì)人體有害。預(yù)處理的方法：乙醇浸泡一用乙醇洗至流出液與水按：混合不渾濁為止一用水洗至無醇味，備用。（）上樣將樣品溶于少量水中。以定的流速加到柱的上端進(jìn)行吸附。上樣液以澄清為好，上樣前要配合一定的處理工作，如上樣液的預(yù)先沉淀，濾過處理，調(diào)節(jié)，使部分雜質(zhì)在處理過程中除去，以免堵塞樹脂床或在洗脫中混入成品上樣方法主要有濕法和干法兩種。（）洗脫先用水清洗以除去樹脂表面或內(nèi)部還殘留的許多非極性或水溶性大的強(qiáng)極性雜（多糖或無機(jī)鹽），然后用所選洗脫劑在一定的溫度下以一定的流速進(jìn)行洗脫（）再生再生的目

24、的：除去洗脫后殘留的強(qiáng)吸附性雜質(zhì)，以免影響下一次使用過程中對(duì)于分離成分的吸附再生的方法：乙醇洗脫至流出液無色透明為止，再用水洗至中性，備用。論文選題的目的和意義一熊果苷在世紀(jì)年代由日本資生堂化妝品株式會(huì)社作為化妝品美白劑首先推出，它是繼半胱氨酸和曲酸等美白劑后又一個(gè)美白劑。不僅對(duì)皮膚的雀斑、老人斑、黃褐斑有消褪作用，而且對(duì)皮膚的滋潤(rùn)、皮膚灼傷后的愈合和北京化工人學(xué)碩士論文粉刺等也頗有療效。一熊果苷作為最新的美容增白劑，世界知名品牌剛剛開始使用。年推出了含有熊果苷的新活性皮膚增白劑，日本資生堂也推出了含有熊果苷成分的系列化妝品。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)一熊果苷對(duì)紫外線灼傷所形成的瘢痕具有明顯的效果，其化學(xué)性質(zhì)

25、也比一熊果苷效果更為穩(wěn)定，能夠更方便的加入到各種美白亮膚化妝品中。：間最穩(wěn)定。推薦添加量為之間，可用于所有的配方中。目前發(fā)達(dá)國(guó)家美白護(hù)膚市場(chǎng)幾乎已被熊果苷壟斷。自年通過日本厚生省的認(rèn)可熊果苷就受了美國(guó)和日本大型化壯品廠的密切關(guān)注，有人認(rèn)為對(duì)美容品來說世紀(jì)將是熊果苷的世紀(jì)。熊果苷合成是當(dāng)前研究工作的一個(gè)熱點(diǎn)，其合成有種途徑：有機(jī)合成法、生物轉(zhuǎn)化法和酶合成法。其中有機(jī)合成和生物轉(zhuǎn)化法主要用于熊果苷的合成，而酶法合成對(duì)于一熊果苷獨(dú)具優(yōu)勢(shì)。對(duì)于一熊果苷，化學(xué)合成尚未能提供高效立體專一性的合成方法，因?yàn)橐话愫铣梢惶擒盏姆椒▽?duì)于合成一熊果苷來說都顯得過于繁瑣。故一熊果苷一般只能通過不同的微生物的酶進(jìn)行糖轉(zhuǎn)

26、移反應(yīng)，讓一分子的葡萄糖和一分子的氫醌結(jié)合形成單一的一熊果苷。生物法生產(chǎn)符合環(huán)保要求，對(duì)于合成一熊果苷獨(dú)具優(yōu)勢(shì)，因此吸引了許多研究者的興趣，相信今后會(huì)有更多新的成果應(yīng)用于實(shí)際。但國(guó)內(nèi)這方面的研究進(jìn)行得很少，值得引起我們的注意。本課題采用微生物菌體為催化劑，催化蔗糖和對(duì)苯二酚合成熊果苷，替代以價(jià)格昂貴的糖苷酶為催化劑、產(chǎn)物往往是難于分離的一熊果苷和熊果苷混合物的傳統(tǒng)工藝，再配合其它工藝條件可制造出純度高達(dá)以上的產(chǎn)品。本工藝具有成本低、產(chǎn)品純度高、生產(chǎn)操作安全等優(yōu)點(diǎn)。因此發(fā)酵法生產(chǎn)一熊果苷具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。綜上所述，隨著人們對(duì)于僅熊果苷的研究的不斷深入，一熊果苷作為最好的安全高效美白劑必將在國(guó)際

27、化妝品中占有極其重要的地位，有著廣闊的應(yīng)用前景。然而，無論是一熊果苷還是熊果苷還未引起我國(guó)化妝品界和化工業(yè)的足夠關(guān)注，開發(fā)和利用剛處在起步階段，因此對(duì)于生產(chǎn)一熊果苷的深入研究有助于我們緊跟世界化妝品行業(yè)的最新潮流，參與全球化商貿(mào)競(jìng)爭(zhēng)。本論文研究?jī)?nèi)容采用微生物菌體為催化劑，催化蔗糖和對(duì)苯二酚合成一熊果苷，替代以價(jià)格昂貴的一糖苷酶為催化劑，產(chǎn)物往往是難于分離的一熊果苷和一熊果苷混合物的傳統(tǒng)工藝。對(duì)此，從三個(gè)方面來達(dá)到以上目的：北京化人學(xué)碩一：論文一是采用一糖苷鍵專一性強(qiáng)的菌株，在菌種篩選過程中，通過對(duì)菌種誘變、復(fù)篩，最后得到一株對(duì)一糖苷鍵專一性強(qiáng)的菌株，利用此菌株作為催化劑，催化合成的都是一熊果苷

28、，而不生成一熊果苷；二是通過優(yōu)化發(fā)酵條件，提高一熊果苷產(chǎn)量，優(yōu)化工藝步驟，實(shí)現(xiàn)低成本、大規(guī)模生產(chǎn)的目的；三是利用大孔吸附樹脂對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分離純化，首次利用分離效率高、易工業(yè)化放大的大孔吸附樹脂分離純化方法，最終獲得高純度的產(chǎn)品。北京化工人學(xué)碩士論文第二章黃單胞菌的誘變篩選一熊果苷（）屬氫醌苷化合物，化學(xué)名為一羥基苯基一一吡喃葡萄糖苷，具有顯著的抑制酪氨酸酶活性，減少酪氨酸酶在皮膚中的沉積，對(duì)皮膚有美白、防色變和祛斑的功效，是種新型的無刺激、無過敏、配伍性強(qiáng)的天然美白活性物質(zhì)。在比較一熊果苷與一熊果苷在人體黑色素細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中，等瞳研究發(fā)現(xiàn)一熊果苷的美白效果是一熊果苷的倍以上，而且一熊果苷的美白機(jī)理

29、是直接抑制酪氨酸酶活性，不抑制人體細(xì)胞：然而相同濃度的一熊果苷卻對(duì)人體細(xì)胞出現(xiàn)了抑制，對(duì)使用者有一定的副作用。所以一熊果苷是一種更高效、更安全的美白劑。目前國(guó)內(nèi)對(duì)于一熊果苷生產(chǎn)的文獻(xiàn)報(bào)道較少。隨著一熊果苷作為美白劑被越來越多人接受，對(duì)它的研究也越來越多，作者通過生物法制備一熊果苷，并對(duì)工藝條件進(jìn)行了討論。本章通過誘變篩選，獲得了一株酶活高、專一性強(qiáng)的菌株，利用該菌株催化合成一熊果苷，產(chǎn)物只有單一結(jié)構(gòu)的一熊果苷，轉(zhuǎn)化率可達(dá)到以上，具有重大工業(yè)化意義。材料與方法菌種嗜麥芽黃單胞菌（），由本實(shí)驗(yàn)室保藏。培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基：蔗糖，蛋白胨，無水，：，瓊脂，水定容到，×滅菌。發(fā)酵培養(yǎng)基：蔗糖，蛋白

30、胨，無水。，：，：，。，維生素，維生素，煙酸，對(duì)氨基苯甲酸納，水定容到，×滅菌。北京化工大學(xué)碩論文材料和儀器設(shè)備材料：一熊果苷標(biāo)準(zhǔn)品和一熊果苷標(biāo)準(zhǔn)品為公司提供；其他為分析純?cè)噭┗蛏虡I(yè)用物品。儀器設(shè)備：全溫振蕩培養(yǎng)箱，哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司；高效液相色譜，日本島津；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器從，上海亞榮生化儀器廠；低速大容量離心機(jī)型，上海安亭科學(xué)儀器廠；立式自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌鍋，上海申安醫(yī)療器械廠。黃單胞菌的誘變從菌種斜面挑一環(huán)菌種，加入到無菌生理鹽水試管中配成菌懸液，稀釋濃度到一，然后加入不同量的化學(xué)誘變劑（硫酸二乙酯），在旋渦混合器上振蕩，取菌懸液涂平板，把平板放在紫外燈（距離）照射不

31、同時(shí)間。把復(fù)合誘變后平板放在恒溫培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)。以不經(jīng)過復(fù)合誘變平板作為空白對(duì)照，其培養(yǎng)后菌落數(shù)計(jì)為，經(jīng)過復(fù)合誘變平板培養(yǎng)后菌落數(shù)計(jì)為。計(jì)算致死率。致死率（）。然后把復(fù)合誘變后菌株分別接種搖瓶發(fā)酵。黃單胞菌的初篩把黃單胞菌涂布平板，挑單菌落依次進(jìn)行搖瓶發(fā)酵，發(fā)酵后加入對(duì)苯二酚和蔗糖反應(yīng)，最后產(chǎn)物走硅膠薄層層析板（），以標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)比，把斑點(diǎn)值與顏色跟標(biāo)準(zhǔn)品一樣的菌落挑出保藏。黃單胞菌的復(fù)篩把經(jīng)過初篩的菌株進(jìn)行搖瓶發(fā)酵，發(fā)酵后加入對(duì)苯二酚和蔗糖反應(yīng)，最后產(chǎn)物用高效液相（）檢測(cè)，計(jì)算對(duì)苯二酚的轉(zhuǎn)化率。北京化大學(xué)碩：論文黃單胞菌的培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基于三角瓶中，×和滅菌。將菌種斜面挑一環(huán)接種到三角

32、瓶中，在。、搖床培養(yǎng)。一熊果苷的生物合成在培養(yǎng)好的黃單胞菌發(fā)酵液中加入對(duì)苯二酚和蔗糖，、搖床反應(yīng)。反應(yīng)方程式：對(duì)苯二酚的轉(zhuǎn)化率：轉(zhuǎn)化率（）其中為加入到發(fā)酵液中對(duì)苯二酚的摩爾量，為反應(yīng)后發(fā)酵液中一熊果苷的摩爾量。一熊果苷的檢測(cè)胡薄層層析法（法）：把反應(yīng)后的發(fā)酵液用點(diǎn)樣毛細(xì)管分別取少量樣品依次點(diǎn)在板上，以正丁醇、異丙醇、水的體積比：為流動(dòng)相，對(duì)甲氧基苯甲醛、乙醇、濃硫酸的體積比：為顯斑劑，在烘箱中烤即可顯色。高效液相法（法）：取發(fā)酵液，加入甲醇，離心。上清液用高效液相色譜檢測(cè)。色譜柱：柱，×，；柱溫：；流動(dòng)相：巾（。）：巾（。）：；流速：；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)：；進(jìn)樣量：。菌濃的

33、測(cè)定菌濃用在波長(zhǎng)下分光光度計(jì)檢測(cè)的吸光度咖表示。數(shù)據(jù)處理和分析以下實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均重復(fù)三次，然后取平均值。北京化工大學(xué)碩士論文結(jié)果與討論黃單胞菌的誘變以本實(shí)驗(yàn)室保藏的嗜麥芽黃單胞菌作為出發(fā)菌株，分別實(shí)驗(yàn)在菌懸液中于不同紫外照射時(shí)間對(duì)菌體進(jìn)行誘變，以不照射紫外線的空白平板作為對(duì)照。具體結(jié)果參見下表。表黃單胞菌的紫外誘變￥根據(jù)微生物發(fā)生突變的概率可知，當(dāng)菌體的致死率在以上時(shí)，菌體發(fā)生突變的概率最大。由上表結(jié)果可知，當(dāng)紫外照射在秒以上時(shí)，菌體致死率可達(dá)以上，由此可得秒株、秒株、秒株，總共株作為初篩出發(fā)菌株。黃單胞菌的初篩把致死率在以上的平板進(jìn)行挑單菌落，可得株菌株，依次接種搖瓶發(fā)酵，然后加入對(duì)苯二酚和

34、蔗糖反應(yīng)，反應(yīng)后發(fā)酵液用法分析，把斑點(diǎn)，及顏色與標(biāo)準(zhǔn)品一致的菌株挑出保藏。通過對(duì)株進(jìn)行發(fā)酵反應(yīng)，與出發(fā)菌株進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果比出發(fā)斑點(diǎn)大的菌株有株，跟出發(fā)菌株斑點(diǎn)相近的有株，比出發(fā)菌株低的有株。即有株菌株發(fā)生了正突變，把這株菌株保藏進(jìn)入下一輪的復(fù)篩。具體結(jié)果參見圖一及表。北京化上學(xué)碩十論史圖部分誘變菌株發(fā)酵反應(yīng)厲的薄層層析圖（注：最右側(cè)樣品為一熊果苷標(biāo)準(zhǔn)品）（：）表發(fā)生止突變的株菌株的圖編號(hào)苗落生長(zhǎng)情況備注參比他垢塢”埔塢北京化工大學(xué)碩上論文注：“”表示發(fā)酵液的菌體密度和斑點(diǎn)大小程度，“”表示斑點(diǎn)明顯大于出發(fā)菌株斑點(diǎn)。黃單胞菌的復(fù)篩把經(jīng)過初篩獲得的株菌株依次進(jìn)行搖瓶發(fā)酵，加入對(duì)苯二酚和蔗糖反應(yīng)，反

35、應(yīng)后發(fā)酵液用法分析，最后得到株轉(zhuǎn)化率在以上的菌株，比出發(fā)菌株轉(zhuǎn)化率（）高以上，具體結(jié)果如表。由表可知菌株一轉(zhuǎn)化率最高，可達(dá)，比出發(fā)菌株轉(zhuǎn)化率（）提高了。北京化人學(xué)碩：論文菌株繼代穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)把菌株一經(jīng)過連續(xù)繼代代后，依次把各代進(jìn)行發(fā)酵，繼代穩(wěn)定性結(jié)果如圖。由圖可知，第代菌種活力依然不變，一熊果苷轉(zhuǎn)化率依然高達(dá)。由此可見菌株的遺傳性狀是穩(wěn)定的。廠、長(zhǎng)、蔣、÷婢繼代（代）圖繼代穩(wěn)定性北京化丁大學(xué)碩論文本章小結(jié)通過對(duì)本實(shí)驗(yàn)室保藏的嗜麥芽黃單胞菌（）進(jìn)行誘變篩選，最后獲得一株酶活比出發(fā)菌株提高了的菌株，經(jīng)連續(xù)傳代穩(wěn)定性試驗(yàn)證明，該菌株遺傳性狀穩(wěn)定，可以作為一熊果苷生產(chǎn)菌株。北京化工人學(xué)碩十論文

36、第三章發(fā)酵法生產(chǎn)一熊果苷本章研究黃單胞菌發(fā)酵法生成一熊果苷，通過對(duì)其發(fā)酵培養(yǎng)基（碳源、氮源、金屬離子及微量元素等）和發(fā)酵條件（溫度、搖床轉(zhuǎn)速、發(fā)酵時(shí)間糖等）的研究及分析進(jìn)行了探討。材料與方法菌種嗜麥芽黃單胞菌（），由本實(shí)驗(yàn)室保藏。培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基：蔗糖，蛋白胨，無水。，：，：，瓊脂，水定容到，×滅菌。發(fā)酵培養(yǎng)基：蔗糖，蛋白胨，無水，維生素，維生素，煙酸，對(duì)氨基苯甲酸納，水定容到，×滅菌。材料和儀器設(shè)備材料：一熊果苷標(biāo)準(zhǔn)品和一熊果苷標(biāo)準(zhǔn)品為公司提供；其他為分析純?cè)噭┗蛏虡I(yè)用物品。儀器設(shè)備：全溫振蕩培養(yǎng)箱，哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司；高效液相色譜，日本島津：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上

37、海亞榮生化儀器廠；低速大容量離心機(jī)一型，上海安亭科學(xué)儀器廠；立式自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌鍋，上海申安醫(yī)療器械廠。北京化大學(xué)碩、：論文黃單胞菌的培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基于三角瓶中，×和滅菌。將菌種斜面挑一環(huán)接種到三角瓶中，在、搖床培養(yǎng)。一熊果苷的生物合成在培養(yǎng)好的黃單胞菌發(fā)酵液中加入對(duì)苯二酚和蔗糖，、搖床反應(yīng)。反應(yīng)方程式：對(duì)苯二酚的轉(zhuǎn)化率：轉(zhuǎn)化率（）水其中為加入到發(fā)酵液中對(duì)苯二酚的摩爾量，為反應(yīng)后發(fā)酵液中一熊果苷的摩爾量。一熊果苷的檢測(cè)（法）取發(fā)酵液，加入甲醇，離心。上清液用高效液相色譜檢測(cè)。色譜柱：柱，；柱溫：；流動(dòng)相：咖（）：巾（。）：；流速：；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)：；進(jìn)樣量：。菌濃的測(cè)

38、定菌濃用在波長(zhǎng)下分光光度計(jì)檢測(cè)的吸光度螄表示。數(shù)據(jù)處理和分析以下實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均重復(fù)三次，然后取平均值。北京化大學(xué)碩：論文結(jié)果與討論碳源的選擇碳源是微生物發(fā)酵的一個(gè)重要因素，實(shí)驗(yàn)分別采用葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、玉米漿作為碳源，接種菌株發(fā)酵，結(jié)果如圖。、蘭彗嘻擗葡萄糖麥芽糖蔗糖淀粉碳源圖不司碳源的比較，由圖可知，麥芽糖與蔗糖作為碳源菌體催化合成一熊果苷活性最大，對(duì)苯二酚轉(zhuǎn)化率高達(dá)，而葡萄糖及淀粉轉(zhuǎn)化率卻很低，這主要是因?yàn)榫w胞內(nèi)聚合酶對(duì)以對(duì)苯二酚合成一熊果苷的葡萄糖基有基團(tuán)選擇性。通過分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，只有含有葡萄糖基的寡糖才能作為所選菌種催化合成一熊果苷的葡萄糖基供體，原因可能是蔗糖（麥芽糖）通過細(xì)胞

39、膜上的、泵運(yùn)輸進(jìn)細(xì)胞內(nèi)，在胞內(nèi)糖基轉(zhuǎn)移酶作用下轉(zhuǎn)化為果糖和一葡萄糖（兩分子一葡萄糖），在轉(zhuǎn)化出葡萄糖分子的同時(shí)馬上與對(duì)苯二酚在聚合酶催化下以，一糖苷鍵合成一熊果苷；由于淀粉相對(duì)分子質(zhì)量大，通過細(xì)胞膜上的、泵無法把它們運(yùn)輸進(jìn)細(xì)胞內(nèi)，導(dǎo)致胞內(nèi)聚合酶無法發(fā)揮作用，所以轉(zhuǎn)化率很低；對(duì)于葡萄糖，因其在水溶液中是以多種結(jié)構(gòu)（如開鏈葡萄糖、葡萄糖和一葡萄糖等結(jié)構(gòu)）存在，所以雖然葡萄糖分子很容易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，但是只有少量的以一葡萄存在的葡萄糖分子占據(jù)了酶位點(diǎn)卻不能合成一熊果苷，導(dǎo)致最終轉(zhuǎn)化率很低。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，等人利用黃單胞菌催化合成一熊果苷的反應(yīng)只能用麥芽糖結(jié)構(gòu)存在的分子才能與對(duì)苯二酚在聚合酶催化下合成一熊果苷

40、，而其他結(jié)構(gòu)糖作為反應(yīng)物，即只能用麥芽糖作為一熊果苷的葡萄糖基的供體。而本項(xiàng)目篩選北京化丁大學(xué)碩論文的菌種具有更廣闊的葡萄糖基供體，大大地降低了生產(chǎn)成本，為工業(yè)化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。蔗糖濃度的選擇由上小節(jié)可知，麥芽糖和蔗糖作為菌體發(fā)酵的碳源，對(duì)一熊果苷的轉(zhuǎn)化率影響不大，從經(jīng)濟(jì)角度考慮我們選擇價(jià)格更低廉、來源更廣泛的蔗糖作為碳源。通過比較不同蔗糖濃度對(duì)發(fā)酵反應(yīng)的影響，我們?cè)囼?yàn)了蔗糖濃度為、，結(jié)果如下圖，由圖可知，當(dāng)蔗糖濃度達(dá)到時(shí)，一熊果苷的轉(zhuǎn)化率最高，為，繼續(xù)增加濃度對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響不大，所以蔗糖的最佳濃度為。不耐蔗糖濃度對(duì)發(fā)酵反應(yīng)的影響硬靜畿加馳們?nèi)缂恿藵舛龋ǎ﹫D不同蔗糖濃度對(duì)發(fā)酵反應(yīng)的影響氮源的選

41、擇氮源是微生物發(fā)酵的一個(gè)重要因素，實(shí)驗(yàn)分別采用玉米漿、蛋白胨、酵母膏作為氮源，接種菌株發(fā)酵，結(jié)果如圖，由圖可知，蛋白胨作為氮源菌體催化合成一熊果苷活性最大，對(duì)苯二酚轉(zhuǎn)化率高達(dá)。北京化工大學(xué)碩上論文不同氮源對(duì)發(fā)酵反應(yīng)的影晌，、譽(yù)、，憎卜暈蜒北京化工人學(xué)碩：論文發(fā)酵溫度的影響每一種微生物都有最適的生長(zhǎng)溫度，根據(jù)文獻(xiàn)可知，黃單胞菌的最適生長(zhǎng)的溫度為，所以分別實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)溫度，。一、琶彗、÷辯發(fā)酵溫度（）圖發(fā)酵溫度對(duì)一熊果苷轉(zhuǎn)化率的影響結(jié)果如圖所示。由圖可知，當(dāng)培養(yǎng)溫度為時(shí)，一熊果苷的轉(zhuǎn)化率最高，達(dá)，繼續(xù)增加溫度轉(zhuǎn)化率逐漸下降，這是因?yàn)殡S著溫度的增加，菌體生長(zhǎng)受到抑制，不利于菌體的生長(zhǎng)代謝，導(dǎo)致

42、轉(zhuǎn)化率下降，所以黃單胞菌的最適生長(zhǎng)溫度為。發(fā)酵時(shí)間的選擇分別實(shí)驗(yàn)了培養(yǎng)時(shí)間為、，一熊果苷轉(zhuǎn)化率的比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖，實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖表明，當(dāng)菌體發(fā)酵，一熊果苷的轉(zhuǎn)化率高達(dá)。而在其他時(shí)間時(shí)轉(zhuǎn)化率都不是很理想，這主要是因?yàn)?，在培小時(shí)前，菌體尚處于對(duì)數(shù)期階段，菌體生物量尚未達(dá)到最大值，所以轉(zhuǎn)化率沒達(dá)到最大值；而當(dāng)菌體培養(yǎng)后轉(zhuǎn)化率反而逐漸下降，這主要是因?yàn)榫w在發(fā)酵后處于衰亡期，菌體出現(xiàn)了死亡自溶現(xiàn)象，導(dǎo)致一熊果苷轉(zhuǎn)化率下降。所以菌株一的最佳發(fā)酵時(shí)間是。北京化工人學(xué)碩十論文槳斟卻辯發(fā)酵時(shí)間（）圖發(fā)酵時(shí)間的選擇搖床轉(zhuǎn)速的影響菌體發(fā)酵轉(zhuǎn)速的大小直接關(guān)系到溶氧及代謝物的傳質(zhì)速度。由于黃單胞菌是兼性好氧菌，所以溶氧濃度太低或太高生長(zhǎng)代謝均受到阻礙。通過實(shí)驗(yàn)不同轉(zhuǎn)速，結(jié)果如圖，由圖可知，搖床轉(zhuǎn)速為時(shí)，一熊果苷轉(zhuǎn)化率最高，達(dá)。廠、裝薅皋辯轉(zhuǎn)。速拶圖轉(zhuǎn)速對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響北京化大學(xué)碩上論文值對(duì)菌體發(fā)酵的影響值為最有利于黃單胞桿菌的生長(zhǎng)口，由于在菌體生長(zhǎng)過程中會(huì)有氣體的放出，導(dǎo)