實驗二十四 尿藥法測定核黃素片劑消除速度常數(shù)

1、實驗二十四 尿藥法測定核黃素片劑消除速度常數(shù)一 、實驗目的1 熟悉尿藥法在藥物動力學實驗中的應用。2 掌握尿藥法計算消除速度常數(shù)的方法。二、實驗原理 藥物在體內(nèi)過程是一個整體，吸收、分布、代謝、排泄等過程既有區(qū)別，又有聯(lián)系，觀察一個方面的變化，常可間接地認識另一方面的情況，所以藥物在體內(nèi)的速度過程變化規(guī)律，既可用血藥法來估算，也可用尿藥法來估算。在多數(shù)情況下，尿藥濃度高于血藥濃度，定量分析精密度好，測定方法較易建立，而且取樣方便，受試者可免受多次抽血的痛苦。因此，在體內(nèi)藥物大部分以原形從尿中排除條件下，通?？捎媚蛩幏ü浪阆俣瘸?shù)、生物半衰期等動力學參數(shù)。尿中原形藥物的瞬時排泄速度，可用下列

2、微分式表示： =KeX （1）Ke為表觀一級排泄速度常數(shù)，Xu為t時尿中原形藥物的累計排泄量，X為t時間體內(nèi)存有的藥量。在靜脈給藥時，體內(nèi)藥量的經(jīng)時過程可由下式表示： X=Xoe-kt （2）Xo為給藥劑量，K為表觀一級消除速度常數(shù)。將（2）式中X值代入（1）式后得： =KeXoe-kt （3）兩邊取對數(shù)得： log=logKeXo- （4）由（4）式可見，原形藥物排泄速度的對數(shù)對時間作圖為一直線，其斜率為-，與血藥濃度的對數(shù)對時間作圖所求的斜率相同。（4）式適用于靜脈給藥后求算消除速度常數(shù)。若口服給藥，則體內(nèi)藥量經(jīng)時過程可由下式表示： X=（e-Kte-Kat） （5）Ka為表觀一級吸收速度

3、常數(shù)。 尿中原形藥物的瞬時排泄速度可用（5）式代入（1）式得： =（e-Kte-Kat） （6）當Ka>K，t充分大時，則e-kat0，（5）式簡化為： =e-Kt （7）兩邊取對數(shù)得： log=log （8）由上述關(guān)系式可見，若以logXu/dt對t作圖，可得到一條二項指數(shù)曲線，從其后段直線的斜率可求出一級消除速度常數(shù)K。 由于尿中原形藥物排泄速度的瞬時變化率是不可能用實驗方法求算的，通過實驗只可求出平均排泄速度，設在一段時間間隔t內(nèi)藥物的排泄速度量為Xu，則平均排泄速度為，這樣（4）或（8）式可改寫如下： log=logKeXot中 （9） log=logt中 （10）由于實驗中采取

4、平均排泄速度代替瞬時排泄速度，求得的消除速度常數(shù)K會出現(xiàn)一些誤差。但若以恒定的時間間隔集尿，其時間間隔不大于一個藥物的半衰期時，則僅發(fā)生2%以內(nèi)的偏差。三、實驗內(nèi)容與操作（一） 服藥及尿樣收集1 服藥前一天收集24小時尿液，每次收集尿液后量體積，取10ml保留，其余倒掉。2 臨服藥前排空小便。3 早餐后立即服用核黃素片三片（5毫克/片），用溫水吞服不嚼碎，記錄服藥時間。4 按藥片服下后的第2、4、6、8、10小時收集尿液，用量筒取并記錄尿液體積，然后，將尿液倒入盛有0.2毫升冰醋酸的刻度試管內(nèi)至20毫升，搖勻，于陰涼避光處保存。5 注意點：（1）每次收集尿液后飲200毫升左右水以維持尿量。（2

5、）每次大便時收集小便，切勿損失。（3）試驗期間（包括服藥前一天）控制食譜，不能吃含有核黃素的食物，如：蛋類、牛奶、麥乳精、奶糖等。并不得服用含有B族維生素的藥品。（二） 尿液中核黃素含量的測定1 原理： 核黃素的異咯嗪環(huán)上具有活潑的雙鍵，能接受和放出氫原子，在保險粉（連二亞硫酸鈉）的作用下，能還原為無色雙氫核黃素，利用這一特性，可以由加入保險粉前后二次測得的吸收度（核黃素在波長444nm處有吸收）的差值，來計算尿液中核黃素的含量。2.方法（1） 標準溶液的制備精密稱取105 干燥2小時的核黃素對照品50毫克于500毫升容量瓶中，加0.02mol/L醋酸液稀釋至300毫升，置水浴加熱溶解后，放冷

6、至室溫，用0.02mol/L醋酸液稀釋至刻度，搖勻即得，每1毫升中含核黃素100微克，然后加入甲苯覆蓋上面，置涼暗處保存。（2） 標準曲線的制備 精密吸取標準液0.1、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0毫升分別置于10毫升容量瓶中，用酸化蒸餾水（每100毫升蒸餾水中含1毫升冰醋酸）稀釋至刻度，搖勻。以酸化蒸餾水作空白，用721或722型分光光度計，在444nm波長處測定吸收度，然后，在每管中各加保險粉約3毫克，搖勻。在一分鐘內(nèi)再次測定吸收度。兩次測定值之差，即為核黃素的吸收度，以此值為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。（3） 尿樣中核黃素含量測定 尿樣測定照標準曲線制備項下的方法。從“以

7、酸化蒸餾水作空白”起，依法測定吸收度，以兩次測定值之差，從標準曲線上查出尿液中核黃素的含量。以上操作步驟，均須注意避光。四、實驗結(jié)果與討論1 原始記錄服藥后尿液收集與測定數(shù)據(jù)表1 空白尿藥測定數(shù)據(jù)A1 （未加保險粉）A2（加保險粉）A1-A2C空白尿體積（毫升）：空白尿中排泄核黃素的總Xu量：平均每2小時排泄核黃素的數(shù)：表2 尿樣的原始記錄試管號集尿時刻（hr）集尿時間間隔（hr）尿量（ml）空白12345表3 尿藥測定記錄試管號A1（未加保險粉）A2（加保險粉）A1-A2C空白12345表4 尿藥法動力學分析記錄試管號集尿時間間隔（t）中點時間（t中）Xu（mg）平均排泄速度（Xu/t）log空白12345 2 繪制尿藥排泄速率二項指數(shù)曲線。3 從二項指數(shù)曲線后