反復(fù)體外受精

1、反復(fù)體外受精                 作者：楊桂艷，姜英華，吳洪秋，曾偉榮【關(guān)鍵詞】 T輔助細(xì)胞摘要：目的：研究不明原因反復(fù)體外受精胚胎移植(試管嬰兒，IVF-ET)失敗的患者機(jī)體T輔助細(xì)胞1（Th1）及T輔助細(xì)胞2(Th2)免疫應(yīng)答方式，為治療不明原因反復(fù)體外受精-胚胎移植失敗提供理論依據(jù)。方法：將不明原因的三次及三次以上IVF-ET失敗的患者作為研究對象，一個(gè)周期IVF-ET成功妊娠的患者作為對照組，抽取非治療周期靜脈血分離

2、單個(gè)核細(xì)胞并于37，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h，分離上清，ELISA法測定上清液中INF-/IL10含量，計(jì)算INF-/IL10的比值，從而反映機(jī)體Th1、Th2細(xì)胞的免疫應(yīng)答方式。結(jié)果：反復(fù)IVF-ET失敗的患者9例中有7例TH1細(xì)胞因子（INF-）濃度是Th2細(xì)胞因子（IL10）的3倍，有顯著性差異；反復(fù)IVF-ET失敗的患者9例中有4例機(jī)體Th1細(xì)胞因子（INF-）是Th2細(xì)胞因子（IL10）的9倍，呈Th1強(qiáng)勢反應(yīng)，而對照組9例中僅1例且發(fā)生早期流產(chǎn)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：部分反復(fù)體外受精-胚胎移植失敗的患者機(jī)體Th1 Th2免疫應(yīng)答失衡，呈Th1優(yōu)勢反應(yīng)，提示細(xì)胞免疫過強(qiáng)。關(guān)鍵詞：

3、反復(fù)體外受精-胚胎移植失?。?T輔助細(xì)胞； 優(yōu)勢反應(yīng)Study on T Helper Cell Immune Response Type in Women with Unexplained Recurrent IVF-ET FailureAbstract： Objective：To study the Th1 and Th2 response type in women with unexplained recurrent IVF-ET failure, and to provide theoretic evidence on dealing with recurrent IVF-ET fa

4、ilure. Method： Blood sample was taken from 9 women received 3 unexplained failure IVF-ET cycles (study group), while 9 women with successful IVF-ET cycle being controlled. The lymphocyte was separated, and then was cultured at 37，5%CO2 for 72 hours, concentration of INF-,IL10 was measured by ELISA，t

5、he INF-/IL10 rate was calculated. Result： 7 from 9 in study group had INF-/IL10 rate more than 3, while only 2 from 9 in control group and 4 from 9 in study group had INF-/IL10 rate more than 9, while only 1 from 9 in control group and the patient got early abortion. Conclusion： Large partial women

6、with unexplained recurrent IVF-ET failure had T helper cell immune respond imbalance. Th1 cytokines was strong response in large partial women with unexplained recurrent IVF-ET failure, and it was obvio ( 反復(fù)體外受精-胚胎移植失敗的患者T輔助細(xì)胞免疫應(yīng)答方式的研究) us in some patients.Key words： Reccurent unexplained IVF-ET fai

7、lure； T helper cell； Strong response體外受精-胚胎移植是一種有效的使輸卵管阻塞、男方少弱精及各類難治性不孕癥夫婦喜得后代的技術(shù)，其一個(gè)治療周期的妊娠率達(dá)40%左右，累計(jì)妊娠率高達(dá)80%，已知的反復(fù)植入失敗的原因有：年齡過大卵子老化、卵巢反應(yīng)不良可供選擇的優(yōu)質(zhì)胚胎少、子宮內(nèi)膜嚴(yán)重受損、輸卵管積水等，但也有一些患者雖然植入優(yōu)質(zhì)胚胎、子宮內(nèi)膜正常、染色體檢查正常仍然反復(fù)種植失敗，有學(xué)者認(rèn)為與機(jī)體的免疫狀態(tài)有關(guān)，因此我們研究了反復(fù)不明原因種植失敗的患者血清中單個(gè)核細(xì)胞的INF-/IL10的含量及比值了解 T 輔助細(xì)胞的免疫應(yīng)答方式，介紹如下：1 材料與方法1.1 研

8、究對象：選自2004年1月至2005年10月因輸卵管阻塞、男方少弱精來我院行體外受精-胚胎移植的患者，研究組9例：選擇三次體外受精胚胎移植失敗的患者；對照組9例：選擇第一次行體外受精-胚胎移植成功妊娠的患者。所有患者排除輸卵管積水、子宮內(nèi)膜受損、卵巢反應(yīng)不良等明顯影響成功種植的因素并且移植的胚胎質(zhì)量優(yōu)良，排除染色體、解剖、內(nèi)分泌異常及感染、自身免疫性疾病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、甲狀腺疾病、紅斑狼瘡等。兩組年齡分別為34.3±4.7歲及33.1±4.4歲,無顯著性差異。1.2 研究方法：10ml靜脈血抗凝，淋巴細(xì)胞分離液梯度離心分離單個(gè)核細(xì)胞，加入含5% 人血清白蛋白及植物血凝素的1

9、640培養(yǎng)液1ml，將淋巴細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)至2×106/ml，置37，5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h，分離上清，于-70低溫冰箱保存待測。INF-IL10試劑盒購于深圳晶美工程有限公司，采用雙抗體夾心ELISA法測定標(biāo)本中INF-|IL10的含量（標(biāo)本按1：8稀釋）。 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用X2檢驗(yàn) 。2 結(jié)果2.1 IFN-/IL-10>1：研究組9例中7例（77.77%），而對照組9例中僅4例（44.44%）,其中1例發(fā)生早期流產(chǎn)（No.2），P>0.05。2.2 IFN-/IL-10>3：研究組9例中7例（77.77%），而對照組9例中僅2例（22.22%）,

10、其中1例發(fā)生早期流產(chǎn)（No.2），P<0.05。2.3 IFN->9倍IL-10：研究組9例中4例（44.44%），而對照組9例中僅1例（11.11%）,發(fā)生早期流產(chǎn)（No.2），P>0.05，見表1。表1 各標(biāo)本IFN-與IL-10的含量（略）3 討論體外受精胚胎移植是有效的治療難治性不孕的技術(shù)，其費(fèi)用高成功率低令患者憂心忡忡，如何提高成功率長期以來是生殖醫(yī)生及胚胎學(xué)家探討的主要問題，如囊胚移植、培養(yǎng)液及移植管的改進(jìn)、移植方法改良等使成功率有所提高，但仍在40%左右徘徊，不能有所突破。尤其是反復(fù)體外受精-胚胎移植失敗的患者，通過切除輸卵管積水、宮腔粘連分離等手段使一部分患者

11、成功妊娠，但仍有相當(dāng)一部分的患者多次的取卵移植雖然有評分很高的優(yōu)質(zhì)胚胎仍然不能如愿以償，作者認(rèn)為可能與機(jī)體 ( 反復(fù)體外受精-胚胎移植失敗的患者T輔助細(xì)胞免疫應(yīng)答方式的研究(2) ) 的免疫狀態(tài)異常有關(guān)。機(jī)體免疫效應(yīng)類型主要分為細(xì)胞免疫和體液免疫兩類，兩者之間的協(xié)調(diào)依靠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞來維持，根據(jù)分泌的細(xì)胞因子不同，T輔助細(xì)胞分為Th1細(xì)胞及Th2細(xì)胞，前者分泌IL2及IFN-，后者分泌IL6及IL10,分別調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫和體液免疫，這兩類細(xì)胞通過分泌不同的細(xì)胞因子交互調(diào)節(jié)維持Th1/Th2間的動態(tài)平衡，如某種因素打破了這一平衡則可能導(dǎo)致與免疫有關(guān)的疾病，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、甲狀腺疾病等。近年

12、來有學(xué)者研究反復(fù)不明原因流產(chǎn)的患者機(jī)體T輔助細(xì)胞失衡，呈Th1強(qiáng)勢反應(yīng)，并認(rèn)為通過夫血淋巴細(xì)胞主動免疫可重新調(diào)節(jié)Th1/Th2間的平衡，下調(diào)Th1型細(xì)胞因子，上調(diào)Th2型細(xì)胞因子1，2，從而有效的治療不明原因反復(fù)性流產(chǎn)。本文作者由此得到啟發(fā)，推測不明原因的反復(fù)的優(yōu)質(zhì)胚胎的種植失敗可能是因?yàn)榘l(fā)生了早期的流產(chǎn)，在種植的10d之內(nèi)發(fā)生了免疫排斥。我們通過測定反復(fù)的不明原因種植失敗的患者的血單個(gè)核細(xì)胞分泌IFN-和IL-10的含量得出以下結(jié)論：反復(fù)的不明原因種植失敗的患者9例中有7例（77.77%）呈TH1細(xì)胞強(qiáng)勢應(yīng)答，表現(xiàn)為IFN-與IL-10的比值大于3倍以上，而對照組9例中僅2例（22.22%）

13、 的患者呈Th1細(xì)胞強(qiáng)勢,有顯著性差異；在研究組中有4例（44.44%）IFN-含量高于IL-10九倍以上，而對照組僅1例，且發(fā)生了自然流產(chǎn)。眾所周知，胚胎是同種半異體抗原，在體外受精-胚胎移植過程中，數(shù)個(gè)優(yōu)質(zhì)胚胎被直接移植入子宮，其是否能夠在母體子宮內(nèi)生存、生長和發(fā)育而不被排斥，除了胚胎本身的發(fā)育潛能、染色體外其中發(fā)生在母胎界面的免疫也起著一定的作用。近年來許多學(xué)者用Thl/Th2型細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)機(jī)制研究母胎界面的免疫。Kent發(fā)現(xiàn)Th1型細(xì)胞因子干擾滋養(yǎng)細(xì)胞的侵蝕，抑制子宮內(nèi)膜蛻膜化3。反復(fù)自然流產(chǎn)婦女蛻膜細(xì)胞產(chǎn)生過量胚胎毒性細(xì)胞因子，Thl/Th2平衡偏向Thl，而Thl類細(xì)胞因子對胚胎

14、有害，Th1型細(xì)胞因子可引起自然殺傷細(xì)胞的活化浸潤，導(dǎo)致胎兒死亡，誘發(fā)妊娠早期人絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡4。Th2細(xì)胞因子被認(rèn)為是免疫調(diào)節(jié)性因子，下調(diào)Thl反應(yīng)，誘導(dǎo)母體對胎兒同種移植產(chǎn)生免疫耐受，IL10可能是促進(jìn)成功妊娠滋養(yǎng)層生長的自然反應(yīng)，可減弱胎兒組織的人白細(xì)胞抗原I和II類分子的表達(dá)，保護(hù)胎兒免遭母體免疫系統(tǒng)的排斥5。本研究提示，Th1的強(qiáng)勢反應(yīng)可能是不明原因反復(fù)體外受精-胚胎移植失敗的原因之一，有必要擴(kuò)大樣本排除混雜因素進(jìn)行進(jìn)一步的研究。夫血淋巴細(xì)胞主動免疫是否對部分反復(fù)失敗的患者有利、是否可以下調(diào)這類患者Th1型細(xì)胞因子是值得進(jìn)一步探討的問題。參考文獻(xiàn)：1 趙愛民，林其德.Th1/Th2

15、細(xì)胞因子與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，20 suppl:351-352.2 邱麗華，林其德，洪燕，等原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)患者主動免疫治療前后T輔助細(xì)胞1、2型細(xì)胞因子的變化.中華婦產(chǎn)科雜志，2001，36（7）：408-4103 kent AS, Sulivan MH, Sun MY, et al. Effect of interleukin 6 and tumor necrosis factor on prostagland in production by cultured human fetal membranesJ.Prostaglandins,1993,46(4):351-359.4 邢福祺，孔令紅，陳士嶺，等腫瘤壞死因子和干擾素誘導(dǎo)人絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡的研究J.中華婦產(chǎn)科雜志，1999,34(8): 476-478. Piccini PM, Beloni L, Livi C, et al. Defective production of both leukemia inhibitory fa