儀器與紙片擴(kuò)散檢測(cè)耐甲氧西林葡萄球菌的方法比較評(píng)價(jià)

1、儀器與紙片擴(kuò)散檢測(cè)耐甲氧西林葡萄球菌的方法比較評(píng)價(jià)         摘要 目的：比較耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)儀器檢測(cè)與紙片擴(kuò)散檢測(cè)的檢出率。：采用KB紙片擴(kuò)散法，全自動(dòng)微生物分析儀法，并以瓊脂稀釋法為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)臨床分離的63株葡萄球菌進(jìn)行檢測(cè)，比較3種方法的檢出率。 結(jié)果：對(duì)63株葡萄球菌(凝固酶陽(yáng)性50株，凝固酶陰性13株)3種方         摘要 目的：比較耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)儀器檢測(cè)與紙片擴(kuò)散檢測(cè)的檢出率。：采用KB紙

2、片擴(kuò)散法，全自動(dòng)微生物分析儀法，并以瓊脂稀釋法為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)臨床分離的63株葡萄球菌進(jìn)行檢測(cè)，比較3種方法的檢出率。 結(jié)果：對(duì)63株葡萄球菌(凝固酶陽(yáng)性50株，凝固酶陰性13株)3種方法檢出率分別為60.3%、57.1%、50.8%。含4% 氯化鈉(NaCl) M?H平板藥敏紙片擴(kuò)散法和VITEK?32型自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)法差異無(wú)顯著性(P0.05)，與瓊脂稀釋法差異無(wú)顯著性(P>0.05)，而儀器法與瓊脂稀釋法差異無(wú)顯著性(P0.05)。 結(jié)論：KB紙片擴(kuò)散法,儀器法和作為MRS檢測(cè)推薦方法的含鹽瓊脂平板稀釋法對(duì)MRS的檢出率,三者差異均無(wú)顯著性，儀器法與KB紙片擴(kuò)散法均可用于臨床常規(guī)實(shí)驗(yàn)室

3、MRS的檢測(cè)。 關(guān)鍵詞 耐甲氧西林葡萄球菌；紙片擴(kuò)散法；儀器法；瓊脂稀釋法 耐甲氧西林葡萄球菌(Methicillin?resistant Staphylococcus，MRS)所致院內(nèi)感染已成為全球范圍內(nèi)一個(gè)越來(lái)越嚴(yán)重的1，有效預(yù)防和控制其感染的關(guān)鍵是及時(shí)準(zhǔn)確地檢出MRS，為臨床合理選擇抗生素提供依據(jù)2，因而快捷、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法對(duì)快速采取有效的感染控制措施和MRS感染流行病學(xué)調(diào)查十分重要。MRS的檢測(cè)方法有苯唑西林紙片擴(kuò)散法、肉湯稀釋法、瓊脂擴(kuò)散法、E?test法、儀器法及PCR技術(shù)檢測(cè)mecA基因等3，我們將臨床分離的63株葡萄球菌用含4%氯化鈉(NaCl) M?H平板苯唑西林紙片擴(kuò)散法和

4、VITEK?32型自動(dòng)微生物鑒定儀法進(jìn)行檢測(cè)比較，并以含6g/ml苯唑西林的瓊脂稀釋法為標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)其準(zhǔn)確性。 1 材料與方法 1.1材料 1.1.1菌株及其來(lái)源自2006年1月至2006年5月從江醫(yī)二附院臨床患者的痰、血、尿、膿液、前列腺液及陰道分泌物等標(biāo)本，經(jīng)常規(guī)分離得到63 株葡萄球菌，包括凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌50 株，凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)13株。另MRS陽(yáng)性菌株ATCC(R)43300，MRS陰性金黃色葡萄球菌ATCC25923，購(gòu)自衛(wèi)生部臨檢中心。 1.1.2苯唑西林紙片購(gòu)自北京天壇生物制品有限公司，苯唑西林標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自重慶藥友制藥有限公司，SDS瓊脂糖、溴化乙錠、溶菌酶、蛋白酶K

5、為美國(guó)Sigma產(chǎn)品，丙烯酰胺、雙丙烯酰胺TEMED和TBE為美國(guó)Gibcobrl公司產(chǎn)品。 1.1.3儀器法國(guó)生物梅里埃公司生產(chǎn)的VITEK?32型鑒定系統(tǒng)及配套的GPS?SV葡萄球菌藥敏檢測(cè)卡。 1.2方法 1.2.1含4% NaCl M?H平板紙片擴(kuò)散法由于苯唑西林較甲氧西林穩(wěn)定、不易失活，通常用苯唑西林代替甲氧西林測(cè)定葡萄球菌。配制0.5麥?zhǔn)蠁挝痪航臃N于含4% NaCl的M?H平板，貼1 g/片苯唑西林藥敏紙片，35 、24 h觀察結(jié)果(CNS孵育48 h)金黃色葡萄球菌(SA)抑菌圈13 mm為敏感，11 mm12 mm為中介，10 mm為耐藥，凝固酶陰性葡萄球菌18 mm為敏感，

6、17 mm為耐藥。 1.2.2瓊脂稀釋法NCCLS推薦為測(cè)定耐甲氧西林葡萄球菌的參考方法，在含4% NaCl、6 g/ml苯唑西林M?H平板中點(diǎn)種0.5麥?zhǔn)蠁挝痪?，?jīng)35 、24 h孵育檢查瓊脂表面有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，只要有一個(gè)菌落生長(zhǎng)即判為MRS。 1.2.3儀器檢測(cè)挑取待檢菌落，嚴(yán)格參照GPS?SV卡說(shuō)明書(shū)配制一定濃度菌懸液，置備GPS?SV藥敏卡上機(jī)，用VITEK?32型全自動(dòng)微生物鑒定儀檢測(cè)結(jié)果。 1.2.4質(zhì)量控制以金黃色葡萄球菌ATCC(R)43300為MRS陽(yáng)性參考菌株，金黃色葡萄球菌ATCC25923為MRS陰性參考菌株及藥敏質(zhì)控菌株與實(shí)驗(yàn)菌株同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。  

7、   2 結(jié)果 3種對(duì)MRS的檢出率見(jiàn)表1。 表1 3種方法對(duì)MRS的檢出率（略） 對(duì)3種方法MRS檢出率進(jìn)行2檢驗(yàn)，含4% NaCl M?H平板藥敏紙片擴(kuò)散法MRS檢出率與瓊脂稀釋法MRS檢出率差異無(wú)顯著性(2=1.16，P0.05),VITEK?32型儀器             2結(jié)果 3種對(duì)MRS的檢出率見(jiàn)表1。 表13種方法對(duì)MRS的檢出率（略） 對(duì)3種方法MRS檢出率進(jìn)行2檢驗(yàn)，含4% NaCl M?H平板藥敏紙片擴(kuò)散法MRS檢出率與瓊脂稀釋法

8、MRS檢出率差異無(wú)顯著性(2=1.16，P>0.05),VITEK?32型儀器檢測(cè)法MRS檢出率與瓊脂稀釋法MRS檢出率差異也無(wú)顯著性(2=0.51，P0.05),同時(shí)紙片擴(kuò)散法MRS檢出率與VITEK?32型儀器檢測(cè)法MRS檢出率差異也無(wú)顯著性(2=0.13，P0.05)。 3討論 國(guó)內(nèi)外雖然用以檢測(cè)MRS的方法很多，由于MRS本身對(duì)甲氧西林耐藥存在有不均一性，且甲氧西林不穩(wěn)定，故常用苯唑西林代替甲氧西林來(lái)檢測(cè)MRS。由于紙片擴(kuò)散法操作簡(jiǎn)便、價(jià)格低廉，不需要特殊儀器設(shè)備，可以和普通藥敏實(shí)驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行，在多種MRS檢測(cè)方法中，目前很多臨床常規(guī)微生物實(shí)驗(yàn)室仍在采用這種方法，從我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果看

9、，紙片擴(kuò)散法與被NCCLS推薦為方法的瓊脂稀釋法對(duì)MRS檢出率差異無(wú)顯著性，因此可以用于臨床常規(guī)微生物實(shí)驗(yàn)室,對(duì)MRS進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)。VITEK?32型GPS?SV藥敏卡方法簡(jiǎn)單、快捷，從結(jié)果看其MRS檢出率與瓊脂稀釋法差異無(wú)顯著性，雖然其與紙片擴(kuò)散法MRS檢出率也無(wú)明顯差異，但其檢測(cè)速度比紙片擴(kuò)散法更快捷，可以及時(shí)給出準(zhǔn)確的報(bào)告,節(jié)約了時(shí)間,因此評(píng)估GPS?SV藥敏卡的準(zhǔn)確性，為臨床找出一種準(zhǔn)確而簡(jiǎn)單、快捷的篩選MRS的方法是極有意義的，且VITEK?32型微生物鑒定藥敏系統(tǒng)配套使用的GPS?SV卡葡萄球菌藥敏檢測(cè)，其苯唑西林檢測(cè)孔含有4% NaCl，符合NCCLS推薦的檢測(cè)MRS的方法標(biāo)準(zhǔn)4

10、，因此，儀器法GPS?SV卡可用于葡萄球菌耐甲氧西林的檢測(cè)，且簡(jiǎn)便準(zhǔn)確、快速。所以紙片擴(kuò)散法和儀器法均可用于醫(yī)院常規(guī)實(shí)驗(yàn)室MRS檢測(cè),但對(duì)有條件的實(shí)驗(yàn)室建議采用儀器法，目前也出現(xiàn)了一些更準(zhǔn)確可靠的方法，即對(duì)耐甲氧西林葡萄球菌進(jìn)行基因?qū)哟蔚姆中蜋z測(cè)，并也出現(xiàn)了商品化的幾種mecA基因乳膠檢測(cè)法5，也是目前可采用的較好的方法。 參考： ;1Mulligan ME.Murray?leisure KA.Ribner BS.et al.Methicillin?resistant Staphylococcus aureus:a consensus review of the microbiology Pathogenesis and epidemiology with implications for prevention and management AM JJ.Med 1993;94:313. 2馬紀(jì)平，蘇建榮.耐甲氧苯青霉素葡萄球菌J.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，1996，19：187?189. 3趙玉坤，婁金麗，白華